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RNA抽提和标记实验

实验方法原理 实验材料 从组织培养收获的细胞 在组织培养中的细胞 冻存的整个组织 试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液(PBS) TRIzol 试剂 乙醇 乙酸钠 EDTA NaOH Tris-Cl TE 缓冲液 固定化的 oligo-dT 引物 仪器、耗材 组织匀浆器 ......阅读全文

凝胶迁移实验(EMSA)——凝胶迁移

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初

EMSA实验问题与解答

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互

RNA足迹和修饰干扰分析实验

RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA 足迹试验的理论基础,它们都是建立在变性、半变性或自然条件下采用碱基特异性

分子生物学常用实验技术(page 2)

一、RNA 制备   模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人

RNA足迹和修饰干扰分析实验

            实验方法原理 RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋

EMSA(PROMEGA)

凝胶迁移实验以下问题是以Promega公司试剂盒为例。[InstallDir_ChannelDir]mob/72360.shtml1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初

酵母剪接体分析实验

前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋白复合体,它由 5 种 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白组成,每一种 snRNP 由一个 snRNA 和几种蛋白质构成。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋

凝胶迁移实验(EMSA)

            实验方法原理 一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的

酵母剪接体分析实验

            实验方法原理 前接体是真核细胞核内剪接 mRNA 前体的大分子核糖核蛋白复合体,它由 5 种 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白组成,每一种 snRNP 由一个 snRNA 和

cDNA 文库的构建

            实验材料 λ噬菌体臂 大肠杆菌菌株 用于λ噬菌体的包装抽提物 试剂、试剂

血清中 miRNA 抽提和实验设计经验谈

人体内的血液循环系统犹如印度的圣河 – 恒河,河水中携带的养分滋养着古老的大地;洗涤带走地上的ㄧ切污秽,人们的一生都在河水中完成。如此的恒河可以想象,河水中充斥着各种物质,有废物有养分,只要你想都可以从河水中捞取。同样的我们的循环系统如同恒河;流动的血液如同恒河水,身体所需的ㄧ切由血液运送,身体

荧光RNA随机引物触发的聚合酶链反应实验

差异显示聚合酶链反应(PCR) 可促进在诸多物种中与污染暴露相关的新分子标志物的鉴定。至今,已有多种差异显示方法被详细描述。这里,我们描述了一种改良的RNA 随机引物触发的 PCR 方 法(RNAarbitrarily primed PCR, RAP-PCR) , 主要涉及通过 罗 丹 明(rhod

miRNA克隆实验

在细胞中表达的 RNA 除了我们所熟悉的 mRNA 以外,还有大量不编码蛋白质的非编码 RNA(noncoding RNA,ncRNA),非编码 RNA 在细胞中起着非常重要的作用,如 rRNA 和 tRNA 维持着基因的表达,还有一部分则起着调控基因表达的作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主

荧光RNA随机引物触发的聚合酶链反应实验

实验步骤 ##一、 从组织和培养细胞中分离RNA1.TRIzol试 剂(Invitrogen)。该试剂含有苯酚和硫氰酸盐化合物,操作时应穿实验服,戴手套,存放于 4°C 。2.氯仿。3.异丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯(DEPC) 处理的水

分子生物学常用实验技术(page 3)

分子杂交技术    互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN

实质等同性(转录组学)实验

实验材料:小麦  试剂、试剂盒:β-巯基乙醇                                   &nb

噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验

实验方法原理噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白,即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料载体tRNA抗体寡核苷酸试剂、试剂盒抗生素储存液BCIP葡萄糖储存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂RNase 抑制剂TEN

miRNA克隆实验

            实验方法原理 在细胞中表达的 RNA 除了我们所熟悉的 mRNA 以外,还有大量不编码蛋白质的非编码 RNA(noncoding RNA,ncRNA),非编码 RNA 在细胞中起

Northwestern筛选蛋白表达文库实验

Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库(融合蛋白的 N 端由载体序列编码,C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码),进而诱导融合蛋白表达,并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上,以标记的 RNA 探针进行筛选,最终获取能与靶 RNA 分子特异性结合

RNA-蛋白复合物中寡核苷酸靶向的RNaseH切割保护实验

寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解实验是分析 RNA 蛋合复合物(RNP,核糖核蛋白颗粒)的方法,无论是对于粗提物还是提纯后的样品,对分析 RNP 的结构域的结构都非常有效。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解实验是分析 RNA 蛋合复合

3.9 mRNA 3'末端体外加工

体外实验有两种策略;一是将 包 含 Po ly( A) 位点目标基因的质粒与无细胞提取物共同孵育,以 使 RNA 聚 合 酶 II 转录目标基因,并对最初的转录进行加工;另一种策略是利用标准的噬菌体聚合酶驱动系统合 成 前 mRNA,然后与无细胞提取物共同孵 育 。实验材料对数生长期的 HcLa 细

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

小分子RNA

RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”,但越来越多的证据清楚的表明,RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。RNA 干扰(RNA interference)的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识,更因为可以简化/替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具,

Q-PCR实验操作流程

Q-PCR实验流程一、 ①实验前准备,每天早上到实验室后,先把超净工作台的紫外灯打开15-20分钟。②超净台前做实验,需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套,RNA抽提需带口罩。③取EP管/枪头时需用镊子,不可以用使用过的手套直接取用。取完EP管/枪头后,袋子及时封好。④橡胶手套须放入超净台

用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针对RNA作图

核糖核酸酶保护分析用于度量特异性 mRNA 的丰度以及为它们的拓扑异构特征作图。这种方法包括测试 RNA 与互补的放射标记的 RNA 探针(核糖探针)杂交,然后未杂交的序列被一种或几种单链特异性的核糖核酸酶裂解。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理核糖核酸酶保护分析用于度量特

RNA-蛋白复合物中寡核苷酸靶向的RNaseH切割保护实验

            实验方法原理 寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解实验是分析 RNA 蛋合复合物(RNP,核糖核蛋白颗粒)的方法,无论是对于粗提物还是提纯后的样品,对分析 RNP 的结构域的结构都非

实质等同性(转录组学)实验

实验材料小麦试剂、试剂盒β-巯基乙醇氯仿异戊醇SSTE 缓冲液仪器、耗材SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验步骤3.1 芯片背景我们使用了 19846 个点,包含 9246 个 Unigene 序列的小麦 cDNA 芯片(http://www . cerealsdb. uk. net/index. htm

用寡聚(dT)作引物合成放射性标记的扣除cDNA探针

本方案描述通过与 mRNA 驱动方杂交,继之以羟基磷灰石层析纯化单链放射性标记的 cDNA,制备扣除 cDNA 探针。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案描述通过与 mRNA 驱动方杂交,继之以羟基磷灰石层析纯化单链放射性标记的 cDNA,制备扣除 cDNA 探针。实验

Northwestern筛选蛋白表达文库实验

            实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库(融合蛋白的 N 端由载体序列编码,C 端由克隆到载体的 cDNA 文

cDNA 文库的构建

此经典方案建立在 Gubler-Hoffman 法(Gulber-Hoffman 1983) 之上,分为六个阶段。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。实验材料λ噬菌体臂大肠杆菌菌株用于λ噬菌体的包装抽提物试剂、试剂盒放线菌素 D二硫苏糖醇EDTATris-ClMgCl2反转录酶