SequencingoffCosmid,BAC,PAC,withABIBigDyeTerminators
Big Dye Protocols and Notes - Cosmid, BAC, BAC, Fosmid TemplatesHi all,Over the past two months, we have been testing various reaction conditions for the ABI Big-Dye Terminators with double-stranded DNA templates ranging from pUC or pGEM without any insert up to bacterial genomes in the 2 Mbp size. Below are the results of these experiments and the conclusions we have reached. PLEASE BE ADVISED that any deviation fro......阅读全文
大量培养物中分离－BAC－DNA
BAC 重组子的精细分析，包括详细的限制酶切图谱、DNA 测序或亚克隆，所需 DNA 量都超过小量制备所能提供的量。本方案的制备流程适用于重组 BAC 的大规模培养物。500 ml BAC 转化菌的平均产量为 20~25 μg BAC DNA。还可用柱层析对 DNA 产物进一步纯化。本实验来源「分子
大量培养物中分离－BAC－DNA
实验方法原理 BAC 重组子的精细分析，包括详细的限制酶切图谱、DNA 测序或亚克隆，所需 DNA 量都超过小量制备所能提供的量。本方案的制备流程适用于重组 BAC 的大规模培养物。500 ml BAC 转化菌的平均产量为 20~25 μg BAC DNA。还可用柱层析对 DNA 产物进一步
小量培养物中分离－BAC－DNA
实验方法原理 小量 BAC DNA 是从 5 ml BAC 转化细胞培养物中制备的。DNA 的制备采用碱裂解法。BAC DNA 的产量可达 0.1~0.4 μg，足够用于限制酶切分析、PCR 或 Southern 印迹。实验材料 限制性内切核酸酶大肠杆菌试剂、试剂盒 乙醇异丙醇DNA提取液碱性裂解
大量培养物中分离－BAC－DNA
实验方法原理 BAC 重组子的精细分析，包括详细的限制酶切图谱、DNA 测序或亚克隆，所需 DNA 量都超过小量制备所能提供的量。本方案的制备流程适用于重组 BAC 的大规模培养物。500 ml BAC 转化菌的平均产量为 20~25 μ
小量培养物中分离－BAC－DNA
小量 BAC DNA 是从 5 ml BAC 转化细胞培养物中制备的。DNA 的制备采用碱裂解法。BAC DNA 的产量可达 0.1~0.4 μg，足够用于限制酶切分析、PCR 或 Southern 印迹。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理小量 BAC DNA 是从 5
高通量测序分的原理
对DNA分子进行序列测定。1.对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。2.根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony S
Streptomyces:Protocols/MiniMaxi－Prep
Small Scale Plasmid Isolation (Mini / Maxi Prep)Description A mini prep / maxi prep is used to isolate plasmid or cosmid DNA from bacteria, normally E
二代测序（Next－generation－sequencing）的定义
二代测序也被成为高通量测序指的是现代不同的测序技术，不同于之前的Sanger测序，它的速度更快，价格也更为便宜，主要有以下几个平台： － Illumina (Solexa) sequencing － Roche 454 sequencing － Ion torrent: Proton
单细胞测序技术(single－cell－sequencing)－综述（一）
单细胞生物学最近几年是非常热门的研究方向。在这一领域中，最前沿的则是单细胞测序技术。传统测序方法一次处理成千上万个细胞，得到的变异水平也是成千上万个细胞的平均后水平。但是，就如同世界上没有完全相同的两片树叶一样，没有两个细胞是完全相同的。所以，单细胞测序对于研究单个细胞就显得至关重要。单细胞测序可以
单细胞测序技术(single－cell－sequencing)－综述（二）
DroNC-seq10月，Broad研究所张锋教授团队在Nature Methods上发表题为“Massively Parallel Single-Nucleus RNA-Seq with DroNc-Seq (doi: 10.1038/nmeth.4407)” 的文章，提出了一个新的测
二代测序（Next－generation－sequencing）的原理
此处主要介绍Illumina 平台的工作原理。 从本质上而言，二代测序（NGS）和Sanger测序相同，都是在每一个测序周期中，利用计算机检测DNA聚合酶催化荧光标记的dNTP结合到DNA模板时产生的荧光信号。但与Sanger单位时间检测单片段不同的是，NGS能同时检测成千上万的孔道的信号，因
测序反应实验
要得到合适的信号强度，可根据 DNA 片段的大小调节 DNA 的用量。适用于 ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 和 GeneAmp PCR System9700(Applied Biosystems
Hybridization－of－High－Density－Arrayed－BAC－Nylon－Filter－Blots
Protocol for hybridization of high density arrayed Bacterial Artificial Chromosome nylon filter blots with 100 PCR isolated Unigene cDNA inserts, pool
SYBRGreen－QPCR－in－the－ABI－7700
MaterialsROX Passive Reference Dye 25 µM, 50x (Invitrogen, Cat. No. 12223-012)SYBR Green I, "10,000x" concentrate (Molecular Probes, Cat. No. S7563)Su
DNA测序仪：454测序仪
454测序仪的出现极大促进了测序业务的开展，科研人员已经将测序技术作为解决科研工作中许多常见 问题的利器。这是因为454测序仪在以下几个方面取得了质的突破：首先是解决了高通量测序问题；其次它简 化了样品准备步骤，将以往转化大肠杆菌扩增质粒的繁琐过程全部用简单的体外PCR扩增法替代了；最后， 它缩小了
高通量测序的相关介绍
高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（"Next-generation" sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。 名词解释 根据发展历史、影响力、测序原
OFF中心型神经节细胞的相关介绍
当在感受野中心把光点撤走时，它会有强烈的发放。（发放的小圆区域为ON区），相反的，如果给光在视野中心，就停止发放，在这个小的中心圆形区域以外，围绕它们有一个环形范围。在这个环形区域上，如果撤走小光点，则停止发放，这个区域称之为OFF区。由此来说，OFF中心型细胞属于“撤光型（撤走在视野中心的光点
定位候选克隆的基本步骤
定位候选克隆包括三个基本步骤：基因组定位、候选cDNA的获得、全长及功能分析。本文即对此策略的发展和应用作一概要介绍。基因组定位新发展起来的，尤其在分离肿瘤易感基因中常用的方法是用PCR方法检测多样本的杂合性丢失(LOH)或纯合性丢失的高发频率区，从而获得疾病候选基因定位。体细胞抑癌基因的失活是导致
关于高通量测序的基本介绍
高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（Next-generation sequencing technology），或大规模平行测序（Massively parallel sequencing，MPS）。区别于传统Sanger（双脱氧法）测
PCR基本实验方法（四）
Labelling PCR Products with DigoxigeninPCR products may be very conveniently labelled with digoxigenin-11-dUTP (Boehringer-Mannheim) by incorporating
PCR基本实验方法（四）
Labelling PCR Products with DigoxigeninPCR products may be very conveniently labelled with digoxigenin-11-dUTP (Boehringer-Mannheim) by incorporating
其它PCR方法
· Standard PCR Protocol (Molecular Biology Techniques Manual)The followings are described in detailRecommended Reagent ConcentrationsRecommend
abi2720－PCR使用方法
一. 运行环境和电源要求1. 请勿在冰室或冰箱中运行。2720 可在 5℃～40℃的环境下安全使用，最适环境温度为 15℃～30℃， 最适环境湿度为 20～80％。2．2720 的通风口位于机身正面和背面，为保持通风口的通畅，请勿在仪器的周围堆放杂物，并且必须将仪器的左、右及背面离开墙壁 10～
abi2720－PCR使用方法
一. 运行环境和电源要求1. 请勿在冰室或冰箱中运行。2720 可在 5℃～40℃的环境下安全使用，适环境温度为 15℃～30℃， 适环境湿度为 20～80％。2．2720 的通风口位于机身正面和背面，为保持通风口的通畅，请勿在仪器的周围堆放杂物，并且必须将仪器的左、右及背面离开墙壁 10～15
质谱技术－ABI的新舞台
应用大舞台 ABI的产品和技术不仅提供给生命科学研究，也面向国民经济的主战场——制药、食品安全、环境、化工、司法等领域。 Kunar先生告诉记者，在法医鉴定方面，中国着手较早，走在世界的前面，ABI积极参予其中，已经有300多位中国法医接受过
Invitrogen以67亿美元收购ABI
Invitrogen公司和ABI公司今天联合宣布，Invitrogen将以现金和股票交易的形式收购ABI的已发行股票，估价为67亿美元。 这次收购将把Invitrogen主要集中在分子、细胞生物学和蛋白研究市场的试剂和廉价仪器，同ABI广泛应用于DNA测序、蛋白质组学、RNAi、基因表达和应用测试
ABI实时定量PCR常见问题
1. 定量PCR仪的开关机顺序是怎样的？ 按照正确的开关机顺序操作，有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件，进行实验。关机顺序：确认实验已经结束后，首先关闭信号收集
将大片段插入－DNA－导入哺乳动物细胞和胚胎实验
基本方案1 通过质体融合将完整的 YAC 导入哺乳动物细胞 基本方案2 将细菌人工染色体（BAC或PAC)引入到哺乳动物细胞和小鼠胚胎中
PAC1基因编码的功能和结构描述
该基因编码的蛋白是一种GTP酶，属于小GTP结合蛋白的ras超家族。这个超家族的成员似乎调节着各种各样的细胞事件，包括控制细胞生长、细胞骨架重组和蛋白激酶的激活。两个编码不同亚型的转录变体已经被发现。The protein encoded by this gene is a GTPase which
PAC2基因编码的功能和结构描述
该基因编码小鸟苷三磷酸（gtp）代谢蛋白ras超家族的一个成员。编码的蛋白质定位于质膜，在质膜上调节各种过程，如分泌、吞噬和细胞极化。这种蛋白质的活性也与活性氧的产生有关。该基因突变与中性粒细胞免疫缺陷综合征有关。这个基因在第6号染色体上有一个假基因。This gene encodes a memb