用多聚甲醛固定细胞爬片、甩片或切片
当纯净甲醛在水溶液中溶解时，会自动聚合成长链的多聚甲醛。其长度不一，在水中同时进行聚合与解聚反应。甲醛易溶于脂类物质，因此能穿过细胞膜进入细胞内。用多聚甲醛固定细胞时，能使细胞内的自由氨基基团发生化学交联。当不同的分子发生交联时，形成一网状结构，把细胞的各个结构成分连接起来。 单独用多聚甲醛固定细胞不能使抗体进入细胞内，在检测细胞内抗原时，标本经多聚甲醛固定后必须用非离子去污剂透化标本。 *不主张使用商业甲醛溶液作为细胞染色的固定液，因为商业甲醛实际上是甲醛和甲醇（乙醇）的混合物，甲醇和乙醇的作用是防止甲醛分子聚合，使其保持单体状态。使用商业甲醛处理细胞有两个缺陷：不具有多聚甲醛固定细胞的优点；细胞却被甲醇固定。 多聚甲醛固定方法为： ①用PBS洗涤玻片或培养皿；如果是单个的载玻片或盖玻片，用镊子镊取，放入装有......阅读全文
生物安全柜使用标准操作程序
生物安全柜使用标准操作程序目的：建立生物安全柜的使用标准操作程序，使之标准化。 范围：适用于生物安全柜的使用。 职责：设备操作人员负责实施。 内容： 1 作业前准备： 1.1 检查设备是否有“设备完好/待运行”状态标示及“已清洁”状态标示。 1.2 检查电源供给及设备各操作开关完好。 1.3 打开安
钙钙调素对白杄花粉萌发和花粉管生长的调节
实验概要本实验以白杄花粉为实验材料，用不同浓度钙调素拮抗剂TFP及外施钙调素处理培养的花粉，结合荧光标记和免疫抗体标记技术分析游离钙离子和钙调素在花粉管中的定位，探讨钙-钙调素信使系统在花粉萌发和花粉管生长过程中的生理作用。主要试剂1. Ca2(NO)3和硼酸：以双蒸水溶解，配制成100×
骨组织的免疫组化染色应采用什么方法？
在对骨骼生理和病理的研究过程中，经常需要制备脱钙的骨免疫组化标本，然而由于骨骼组织的特殊性，制备好的骨组化标本也并不是一件容易的事。由于骨组织中60%以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶，脱钙是标本制备中至关重要的过程。一些强酸如盐酸，硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐，但对其中的抗原蛋白也产生了致命
生物制品中蔗糖作为脱水保护剂的应用
本期AVT小编与您分享：蔗糖作为脱水保护剂有着怎样的应用？AVT为您带来高纯度蔗糖辅料。说到脱水保护，AVT小编先来给大家分享一下脱水及脱水剂分类的一些知识。在疾病过程中，机体从外界摄入水分不足或体液丧失过多引起体液总量减少，出现循环血量减少和组织失水的现象，称为脱水。脱水剂按药其理作用不同，临床上
一种适于大鼠牙周膜I型胶原mRNA原位杂交的方法
实验概要本实验方法是选用大鼠为对象建立动物模型，采用地高辛标记的寡核苷酸探针的原位杂交。实验步骤1. 标本制备 选用80只体重为250±20g的雄性Wistar成年大鼠，给大鼠注射过量麻药后，左心室用4％多聚甲醛灌注。解剖出下颌骨，仅保留磨牙区骨段，浸泡于4％多聚甲醛中再固定6小时。将标本移入脱钙液
在什么情况下进行组织抗原修复及抗原修复的条件
（1）由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。 （2）修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的
用甘氨酸生产草甘膦的流程
在无水甲醇中，三乙胺催化下多聚甲醛碱性条件解聚，与甘氨酸、亚磷酸二甲酯发生曼尼希缩合反应，反应产物在浓盐酸溶液中水解得到草甘膦(PMG)，整个流程为溶剂体系“一锅法”（one-pot process）流程。甘氨酸经由乙酸氯化，氨取代后制得；亚磷酸二甲酯由PCl3与无水甲醇制得，亚磷酸二甲酯制备过程中
脑组织冰冻切片的步骤和注意事项
1.固定。大鼠或小鼠灌注取脑，取脑后用多聚甲醛浸泡固定，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。2.脱水。先后用15%，20%，30%的PB蔗糖溶液 进行脑组织梯度脱水，脑组织沉下去就是脱水好了。3.冰冻切片，推荐瑞沃德冷冻切片机。取出脑组织，用OCT胶包埋，一层层的包埋，注意:不能有气泡，否则营销切片；
免疫荧光实验方法2
（二）固定和通透 除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外，一般均应固定。固定的目的有三： ①防止细胞从玻片上脱落； ②除去防碍抗原-抗体结合的类脂； ③使标本易于保存。 标本的固定原则是： ①不能损伤细胞内的抗原；
免疫资料——免疫学常用简称介绍
1：抗体查询常用名词Reactivity （物种与抗体反应）：Species with which the antibody reactsHost Species （宿主）：Host in which the antibody was generatedApplications（应用） ：Speci
流式细胞仪检测实验用TUNEL流式细胞定量凋亡细胞
实验材料要分析的细胞试剂、试剂盒 PBS95%乙醇（不是100%乙醇）冰冷多聚甲醛固定液TdT反应液TdT 生物素-dUTP混合液异硫氰酸荧光素（FITC)-链霉亲和素（streptavidin)结合物仪器、耗材12 mm×75 mm圆底离心管配有269模型转子的IEC 6R6000离心机（或相当的
清华大学仪器共享平台Leica－冷冻超薄切片机
仪器名称：冷冻超薄切片机仪器编号：16002271产地：德国生产厂家：Leica型号：UC7+FC7出厂日期：201408购置日期：201602所属单位：生命学院>蛋白质研究技术中心>冷冻电镜平台样品制备>设施细胞冷冻电镜平台放置地点：清华大学生物译学馆U6-109(何添楼北侧，地下六层出1号电梯连
细胞免疫荧光步骤
细胞免疫荧光可应用于：可以观察组织或细胞内抗原物质的定位，以及一些特殊信号分子蛋白的出核/入核的定位变化。实验方法原理在进行细胞免疫荧光过程中，需要用到细胞爬片，通过将爬片浸在细胞培养基内，细胞在爬片上生长，进而进行细胞的免疫荧光。实验材料细胞样品试剂、试剂盒多聚甲醛70%甲醇丙酮PBSTriton
流式细胞仪检测实验_用TUNEL流式细胞定量凋亡细胞
实验材料要分析的细胞试剂、试剂盒 PBS95%乙醇（不是100%乙醇）冰冷多聚甲醛固定液TdT反应液TdT 生物素-dUTP混合液异硫氰酸荧光素（FITC)-链霉亲和素（streptavidin)结合物仪器、耗材12 mm×75 mm圆底离心管配有269模型转子的IEC 6R6000离心机（或相当的
流式细胞仪常用的几种检测方法
流式细胞仪常用的几种检测方法一、测定用乙醇固定的 DNA 的含量1 、培养细胞的 DNA 含量的测定制备单细胞悬液于200μl的PBS缓冲液中；加入2ml预冷的70%乙醇，4℃保存；附 : 细胞固定的一般步骤1) 取单细胞悬液1～2×106 个细胞于PBS（PH=7.2）缓冲液中；2) 300g离心
标本必须在抗体染色后30分内检测吗？
SOP是这么说的：（1）Keep samples after staining covered with aluminum foil and at 4 0C （in the refrigerator） until they are run for flow analysis. The sampl
LSCM细胞固定和染色
细胞固定和染色除了上述使用多聚甲醛固定细胞的方法外，还有一种普遍使用的方法是:培养细胞在 - 20 °C 预冷的甲醇中孵育 5 min。但这种方法对于固定表达荧光蛋白的细胞及 FRET 实验中并不推荐。这是因为:这种处理方法是沉淀细胞内的蛋白，而不是使蛋白质发生交联。此外，为了尽可能减少抗体的用量，
细胞凋亡检测流式细胞仪检测技术
一、固定细胞的染色方法 1）PI单染色法 方法一 1．收集细胞（1～5）×106个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。 2．3ml PBS洗一次。 3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。 4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。 5．400目的筛网过滤
细胞凋亡检测流式细胞仪检测技术
一、固定细胞的染色方法 1）PI单染色法 方法一 1．收集细胞（1～5）×106个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。 2．3ml PBS洗一次。 3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。 4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。 5．400目的筛网过滤
ELISA、WB、QPCR采样及取样注意事项
ELISA取样及运输注意事项一、血清提取方法：1.全血促凝管取血，轻轻颠倒两三次，放置片刻让全血凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。2.全血普通EP管取血，室温放置2h左右，让其凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。特别注意：取血清避免震荡，以防止溶血，溶血会对结果有影响。
调亡细胞的TUNEL的流式细胞仪分析
调亡细胞的TUNEL的流式细胞仪分析过程为：1．离心收集细胞，PBS洗1～2次。2．1%多聚甲醛低温下固定15min。3．3ml PBS洗1次，70%乙醇固定，冰箱内放置1～3天。4．PBS轻洗1次。5．细胞与TdT标记液37℃孵育，时间1～2h。6．PBS轻洗1次。7．细胞在黑暗中37℃与100μ
靶向－EGFR基因－siRNA表达载体的构建
实验材料靶向EGFR基因siRNA试剂、试剂盒pSilencer2.1-U6载体EcoR IBamH IT4 DNA连接酶鼠抗人anti-EGFRFITC标记兔抗小鼠IgGCy3标记兔抗小鼠IgG甘油多聚甲醛二甲基亚砜仪器、耗材流式细胞仪荧光显微镜二氧化碳细胞培养箱酶标仪培养板盖玻片载玻片利用Lip
调亡细胞的TUNEL的流式细胞仪分析
调亡细胞的TUNEL的流式细胞仪分析过程为：1．离心收集细胞，PBS洗1～2次。2．1%多聚甲醛低温下固定15min。3．3ml PBS洗1次，70%乙醇固定，冰箱内放置1～3天。4．PBS轻洗1次。5．细胞与TdT标记液37℃孵育，时间1～2h。6．PBS轻洗1次。7．细胞在黑暗中37℃与100μ
细胞免疫荧光操作步骤
1.细胞爬片；2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)；3.PBS漂洗5min；4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)；5.PBS漂洗2次，每次5min；6.1%BSA封闭30min；7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h；8.
原位PCR的基本方法
①固定组织或细胞:将组织细胞固定于预先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛处理，再灭活除去细胞内源性过氧化物酶.②蛋白酶K消化处理:用60ug/ml的蛋白酶K将固定好的组织细胞片55℃消化处理2h后，96℃2min以灭活蛋白酶K.③PCR扩增:在组织细胞片上，加PCR反应液，覆盖并加液体石蜡后，直接
ISNT的流式细胞仪分析
ISNT的流式细胞仪分析流程：1．离心收集细胞，PBS洗1～2次 2．1%多聚甲醛低温下固定15min。 3．3ml PBS洗1次，70%乙醇固定，冰箱内放置1～3天。 4．PBS轻洗1次。 5．2×105细胞与12.5μl的缺口平移缓冲液在15℃共孵育6h，每过15min振动1次。 6．
核酸探针标记及原位杂交3
3.注意事项（1）避光下准备反应体系：由于光敏生物素醋酸盐对光敏感，应避免光照。在分装试剂及核酸与光敏生物素混合时应在暗室安全灯下操作。（2）核酸纯度：由于光敏生物素能与任何有机物反应，因此用做标记探针的核酸要高度纯化。用作标记探针的核酸最好不用Tris溶液溶解，Tris中所含氨基会干扰标记。（3）
平板细胞克隆形成试验
实验方法原理克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一，贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量，可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。实验材料细胞样品试剂、试剂盒胰蛋白酶胎牛血清DME
平板细胞克隆形成试验
实验方法原理 克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一，贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量，可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个
平板细胞克隆形成试验
平板细胞克隆形成试验 实验方法原理 克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一，贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活