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流式细胞仪检测实验_用TUNEL流式细胞定量凋亡细胞

实验材料要分析的细胞试剂、试剂盒 PBS95%乙醇(不是100%乙醇)冰冷多聚甲醛固定液TdT反应液TdT 生物素-dUTP混合液异硫氰酸荧光素(FITC)-链霉亲和素(streptavidin)结合物仪器、耗材12 mm×75 mm圆底离心管配有269模型转子的IEC 6R6000离心机(或相当的设备)实验步骤1a)多色分析:进行免疫荧光染色。重悬染色细胞于PBS,转移含5×105个细胞的细胞液至一 12 mm×75 mm圆底离心管。必须确保用于多色染色的荧光团没有被TUNEL步骤的固定剂破坏。FITC、PE和Texas红不受影响。Duochromes (PE和Texas红的结合物,如Red 613)也不受影响,但是别藻蓝素(APC)会被固定剂破坏。1b) TUNEL检测:转移含5 ×105的细胞液至一 12 mm×75 mm圆底离心管。2)加入1〜2 ml PBS,然后 4℃,300 g (IEC 269转子则为1200 r......阅读全文

细胞凋亡实验

细胞凋亡(Apoptosis) 又称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death,PCD)是指细胞基因调控的一种自主性的自杀现象。即是在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自主结束生命的死亡方式。凋亡一词最早是由年澳大利亚组织病理学家John Kerr通过研究大鼠肝左叶细胞死亡时,

检测细胞凋亡的实验方法比较-2

二、细胞凋亡的细胞化学测定细胞凋亡的细胞化学测定包括细胞表面(细胞膜)的结构和通透性改变的测定和细胞核DNA改变的测定。根据应用的范围,又可分为细胞群休和单个细胞测定两种,以下仅介绍其中几种较为常用的方法。碘化丙啶(propidium iodide,PI)检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞

凋亡细胞核DNA片段检测方法进展(一)

摘  要:当今生物学领域的研究一个热点之一是细胞凋亡。开展对细胞凋亡的研究,首先要解决是方法学问题。作者从凋亡细胞的特征性核DNA片段检测着手,阐述了多种凋亡细胞核DNA片段检测方法以及近年来的一些新进展。细胞凋亡(apoptosis)又称细胞凋谢或称程序性细胞死亡(Programmed

牛艾美耳球虫子孢子抑制宿主细胞凋亡

实验概要专一性细胞内寄生虫有复杂的逃避方式,特别是在阻止宿主细胞凋亡方面。为了研究牛艾美耳的这种能力,我们进行了体外研究,分别用牛胎儿肠胃细胞(BFGC),牛脐静脉内皮细胞(BUVEC),非洲绿猴肾细胞(VERO)做宿主细胞。BUVEC和BFGC允许子孢子成熟为裂殖子,VERO细胞中子孢子存活几星期

细胞凋亡检测(Annexin-V-FITC 单染法)-2

2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA 特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三种染料与 DNA 的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA 的A

凋亡细胞核DNA片段检测方法进展

细胞凋亡(apoptosis)又称细胞凋谢或称程序性细胞死亡(Programmed cell death,PCD),是有别于细胞坏死而受基因控制的一种主动性细胞自杀过程。对细胞凋亡的研究已成为当今生物学领域的热点之一。开展对细胞凋亡的研究,首先要解决的是方法学问题。根据凋亡细胞的生化特征检测组织或培

凋亡细胞核DNA片段检测方法进展(二)

2.3 凋亡细胞的TUNEL和ISNT鉴定的流式细胞仪分析[16]对于培养的细胞,可以将TUNEL或ISNT鉴定同流式细胞仪结合起来分析其发生凋亡的情况。待检细胞与含有TdT或DNA聚合酶I或Klenow片段及生物素标记的dUTP反应液共孵育一段时间后,加入荧光素(常用FITC)标记的链霉抗生物

流式细胞术在血液学中的应用

  DNA倍体分析及细胞周期分析    在细胞周期内,DNA含量随细胞内时相发生周期性变化,正常情况下,大多数细胞处于休止期(Go), G1期细胞虽有DNA合成,但DNA含量仍为2N,为二倍体细胞,;处于活跃的DNA合成期(S期)的细胞DNA含量为2N-4N;正经历细胞分裂(G2/M期)的细胞

R&D Systems试剂 Q&A 常见问题解答 (1)

问:R&amD Systems有分装试剂吗?答:没有分装试剂。R&amD Systems公司不会分装,也没有授权任何公司进行分装。目前市场上所谓的“RD分装试剂”是没有品质保证的3无产品,R&amD Systems公司不承担任何“RD分装试剂”的售后服务。在此,建议广

R&D Systems试剂 Q&A 常见问题解答(二)

 细胞凋亡 问:为什么有两套不同的TUNEL试剂盒?答:因为有两种不同的TUNEL方法可检测细胞凋亡。第一种方法采用TdT酶(末端脱氧核苷酸转移酶)将生物素化的核苷酸加到组织中的DNA片段的3'-羟基端。加入正离子可使这种标记更有效,经生物素化的核苷酸可用streptav

凋亡聚焦:选择合适的TUNEL分析

  考虑检测方法   TUNEL分析一般采用显色法或荧光检测法。每一种都有其各自的优缺点,因此选择哪一种取决于您的需求。荧光检测感更为灵敏,但难以保留信号。由于成像时的光漂白,且随着时间的流逝,荧光信号会逐渐丧失。荧光信号也会有更高的背景问题,这要取决于组织类型。显色分析适用于组织切片,因为可以使

Circulation Research |器官特异性血管遗传靶向技术及应用

  5月15日,中国科学院生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组在国际学术期刊Circulation Research上发表了题为“Genetic Targeting of Organ-Specific Blood Vessels”的最新研究成果。该项工作建立一套新的遗传操作系统以实现更加精确的遗传靶

Circulation Research器官特异性血管遗传靶向技术及应用

  5月15日,中国科学院生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组在国际学术期刊Circulation Research上发表了题为“Genetic Targeting of Organ-Specific Blood Vessels”的最新研究成果。该项工作建立一套新的遗传操作系统以实现更加精确的遗传靶