区域特异性诱变实验
区域特异性诱变 实验方法原理 可在长达3‘的克隆化DNA片段上产生大量的随机分布的核苷酸替换突变，在将DNA克隆到一个可用来分离单链DNA的载体后，用各种可造成特定碱基损伤的化学试剂处理。 实验材料 DNA 试剂、试剂盒 乙酸钠 亚硝酸钠 TE 无水乙醇 dNTP 反转录酶 RNA酶 洗脱液 溴化乙锭 ......阅读全文
区域特异性诱变实验
区域特异性诱变 实验方法原理 可在长达3‘的克隆化DNA片段上产生大量的随机分布的核苷酸替换突变，在将DNA克隆到一个可用来分离单链DNA的载体后，用各种可造
区域特异性诱变实验
区域特异性诱变实验，用于（1）基因诱导改造（2）基因的特定表达（3）临床抗肿瘤等靶点的发挥。实验方法原理可在长达3‘的克隆化DNA片段上产生大量的随机分布的核苷酸替换突变，在将DNA克隆到一个可用来分离单链DNA的载体后，用各种可造成特定碱基损伤的化学试剂处理。实验材料DNA试剂、试剂盒乙酸钠亚硝酸
区域特异性诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 乙酸钠亚硝酸钠TE无水乙醇dNTP反转录酶RNA酶洗脱液溴化乙锭仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 用限制性内切核酸酶消化DNA以获得目的DNA片段，将靶片段双向克隆到M13噬菌体载体或含有M13复制起始子的质粒载体中。从100 ml 感染细抱培养物中提取单链DN
基因突变的诱变机制定向诱变
利用重组DNA技术使DNA分子在指定位置上发生特定的变化,从而收到定向的诱变效果。例如将DNA分子用某一种限制性核酸内切酶处理,再用分解DNA单链的核酸酶S1处理,以去除两个粘性末端的单链部分,然后用噬菌体T4连接酶将两个平头末端连接起来,这样就可得到缺失了相应于这一限制性内切酶的识别位点的几个核苷
USE－诱变实验
实验材料 带 mutS 表型（例如BMH71-18) 的转化用大肠杆菌感受态带 mut+表型的转化用大肠杆菌感受态试剂、试剂盒 退火缓冲液贮存液合成缓冲液噬菌体 T4DNA 连接酶噬菌体 T4DNA 聚合酶或测序酶单一位点的限制性内切核酸酶琼脂糖凝胶诱变引物选择引物质粒 DNA仪器、耗材 70°C
USE－诱变实验
实验材料 带 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的转化用大肠杆菌感受态 带 mut+表型的转化用大肠杆菌感受态 试剂、试剂盒
USE－诱变实验
本方法中，两条寡核苷酸引物杂交到变性重组质粒 DNA 双链的同一条链上。一条引物（诱变引物）携带一个拟引进靶 DNA 序列的突变，第二条引物携带一个能破坏质粒单一限制酶位点的突变。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料带 mutS 表型（
诱变－PCR－实验
诱变 PCR 最大的优势是以一种没有偏好的方式引入了各种类型的突变，而不是获得高水平的单一的扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒氯仿 异戊醇乙醇矿物油或者一个蜡珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突变 PCR 缓冲液DNA 聚合酶Nati
诱变－PCR－实验
试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇乙醇矿物油或者一个蜡珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突变 PCR 缓冲液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高纯度的脱氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物琼脂糖凝胶用溴化乙锭染色仪器、
诱变－PCR－实验
试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇 乙醇 矿物油或者一个蜡珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突变 PCR 缓冲液
关于基因诱变的γ射线诱变剂的介绍
γ-射线属于电离辐射，是电磁波.一般具有很高的能量，能产生电离作用，因而能直接或间接地改变DNA结构.其直接效应是，脱氧核糖的碱基发生氧化，或脱氧核糖的化学键和糖-磷酸相连接的化学键断裂，使得DNA的单链或双链键断裂.其间接效应是电离辐射使水或有机分子产生自由基，这些自由基与细胞中的溶质分子起作
关于基因诱变的激光诱变剂的介绍
激光在微生物诱变育种方面的研究与开发应用比较晚。激光诱变育种技术研究始于20世纪60年代，经过世界各国40多年的开发应用研究，不仅证明激光和普通光在本质上都是电磁波，它们发光的微观机制都与组成发光物质的原子、分子能量状态和变化密切相关。激光是一种与自然光不同的辐射光，它具有能量高度集中、颜色单一
定点诱变与盒式诱变的比较介绍
构建一个位点导向的文库涉及使用含有一个或多个简并密码子的合成DNA片段替代一个基因片段。这可以通过双链盒式诱变或单链寡核苷酸定向诱变来实现。我们相对倾向于寡核苷酸定向诱变，因为不同于盒式诱变，它不需要在目的区域附近有独特的限制性酶切位点，并且构建一个文库只需要一个寡核苷酸片段。因此，这个方法相当
关于基因诱变的微波诱变剂的介绍
微波辐射属于一种低能电磁辐射，具有较强生物效应的频率范围在300MHz~300GHz，对生物体具有热效应和非热效应。其热效应是指它能引起生物体局部温度上升，从而引起生理生化反应；非热效应指在微波作用下，生物体会产生非温度关联的各种生理生化反应。在这两种效应的综合作用下，生物体会产生一系列突变效应
酵母菌细胞的诱变实验——甲乙硫醚诱变
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD磷酸钠缓冲液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸钠仪器、耗材试管摇床离心机平板实验步骤1. 将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×108细胞/ml。2. 转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5~10
关于诱变的化学诱变剂的介绍
1、碱基类似物 碱基类似物是与DNA正常碱基结构类似的化合物，能在DNA复制时取代正常碱基掺入并与互补碱基配对。如5-溴尿嘧啶（BU）和2-氨基嘌呤（AP），都能引起AT碱基对转换为GC碱基对。 2、氯化锂 氯化锂诱变，普遍认为是它导致AT-GC碱基对的转换或导致碱基的缺失。 3、叠氮化
酵母菌细胞的诱变实验——紫外光诱变
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD刀豆氨酸仪器、耗材紫外光杀菌灯紫外光放射量测定器实验步骤1. 将过夜培养的酵母菌培养液接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养。离心5~10 s，用1 ml 无菌水重悬沉淀细胞，重复洗涤1次，再用1 ml 无菌水重悬。 2. 检查细胞密度，记录数据后将细胞密度调
定点诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE寡核苷酸引物质粒dNTPDNA聚合酶氯仿石蜡油无水乙醇仪器、耗材 离心管热循环仪离心机实验步骤 1. 利用突变区两侧的限制性内切酶位点将待诱变的DNA片段亚克隆进高拷贝数的载体中。 2. 用小量制备的质粒提取模板DNA，用TE缓冲液重悬100 ng DNA至终浓
定点诱变实验
基本方案 利用PCR引物点突变 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
复合诱变的概念
复合诱变包括：两种或多种诱变剂的先后使用，同一种诱变剂的重复作用和两种或多种诱变剂的同时使用.普遍认为，复合诱变具有协同效应.如果两种或两种以上诱变剂合理搭配使用复合诱变较单一诱变效果好. 如贺筱蓉等采用紫外同平板梯度浓度的亚硝基胍、纯铜蒸气混合诱变，筛选到高产菌株效价提高了53.2%，其原理可能是
诱变育种的概念
是人为的措施诱导植物遗传基因产生变异，然后在产生变异的植株中按照需要选育出新的优良品种。诱变育种常用的有物理因素和化学因素，物理因素如各种射线、微波或激光等处理诱变材料，习惯上称之为辐射育种；化学因素是运用能导至遗传物质改变的一些化学药物——诱变剂处理诱变材料促使变异，常称之为化学诱变。
关于基因诱变的离子束诱变剂的介绍
离子注入是20世纪80年代初兴起的一项高新技术，主要用于金属材料表面的改性。1986年以来逐渐用于农作物育种，近年来在微生物育种中逐渐引入该技术 [2] 离子注入诱变是利用离子注入设备产生高能离子束（40~60keV）并注入生物体引起遗传物质的永久改变，然后从变异菌株中选育优良菌株的方法。离子束
关于基因诱变的紫外线诱变剂的介绍
我们知道，DNA和RNA的嘌呤和嘧啶有很强的紫外光吸收能力，最大的吸收峰在260nm，因此波长260nm的紫外辐射是最有效的诱变剂.对于紫外线的作用已有多种解释，但研究的比较清楚的一个作用是使DNA分子形成嘧啶二聚体，即两个相邻的嘧啶共价连接，二聚体出现会减弱双键间氢键的作用，并引起双链结构扭曲
定点诱变(DpnI法)
1、引物设计：每条引物都要携带有所需的突变位点，引物一般长25~45bp,设计的突变位点需位于引物中部。2、反应：使用高保真的pyrobest DNA聚合酶 ;循环次数少，一般为12个循环。反应体系：10x pyrobest Buffer 5 uldN
盒式诱变的简介
盒式诱变(cassette mutagenesis)是一种定点诱变技术，其方法是利用一段人工合成的具有突变序列的双链寡核苷酸片段，取代野生型基因中相应序列。这种诱变的双链寡核苷酸片段是由两条人工合成的寡核苷酸链组成的，当它们退火时，会按照设计要求产生出克隆需要的粘性末端。这些合成的寡核苷酸片段就
定点诱变(DpnI法)
1、引物设计：每条引物都要携带有所需的突变位点，引物一般长25~45bp,设计的突变位点需位于引物中部。2、反应：使用高保真的pyrobest DNA聚合酶 ;循环次数少，一般为12个循环。反应体系：10x pyrobest Buffer 5 uldNTP Mixture(10mM) 1ul模板DN
饱和诱变的定义
对基因的某一小区域内碱基进行所有形式或所有可能存在形式的诱变。
关于诱变的化学诱变剂抗生素的介绍
如平阳霉素（PYM），PYM是一种抗生素，属于博莱霉素的一类。目前主要作为抗肿瘤药应用于临床，对多种癌症具有较好的疗效。抗生素具有高度选择性，能抑制细胞的生长，其中的大多数对维持生命有重要意义。作为一种新的诱变剂，平阳霉素能直接作用于DNA，高浓度时可使DNA链断开，低浓度时能抑制连接酶，阻止胸
关于基因诱变的室温等离子体诱变剂的介绍
常压室温等离子体（Atmospheric and Room Temperature Plasma）的简称，（缩写为ARTP）能够在大气压下产生温度在25-40 °C之间的、具有高活性粒子（包括处于激发态的氦原子、氧原子、氮原子、OH自由基等）浓度的等离子体射流。按照热力学平衡状态，等离子体可分为
关于基因诱变的化学诱变剂烷化剂的介绍
烷化剂通常带有1个或多个活性烷基，此基团能够转移到其它电子密度高的分子上去，使碱基许多位置上增加了烷基，从而在多方面改变氢键的能力。例如EMS被证明是最为有效而且负面影响小的诱变剂。与其他烷化诱变剂类似，是通过与核苷酸中的磷酸、嘌呤和嘧啶等分子直接反应来诱发突变。EMS诱发的突变主要通过两个步骤