USE诱变实验
实验材料 带 mutS 表型（例如BMH71-18) 的转化用大肠杆菌感受态带 mut+表型的转化用大肠杆菌感受态试剂、试剂盒 退火缓冲液贮存液合成缓冲液噬菌体 T4DNA 连接酶噬菌体 T4DNA 聚合酶或测序酶单一位点的限制性内切核酸酶琼脂糖凝胶诱变引物选择引物质粒 DNA仪器、耗材 70°C 水浴和适合限制酶消化反应溫度的水浴LB 琼脂平板和含合适抗生素的 LB 液体培养基实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的成分请参阅附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。10x 退火缓冲液200 mmol/LTris-Cl(pH7.5)100 mmol/LMgCl2500 mmol/LNaCl10X 合成缓冲液100 mmol/L Tris-Cl (pH7-5)dTTP、dATP、dCTP、dGTP 每种浓度为 5 mmol/L10 mmol/LATP20 mmol/LDTT酶和缓冲液噬菌体 T4DNA 连接酶噬菌体 T4DNA......阅读全文
USE－诱变实验
本方法中，两条寡核苷酸引物杂交到变性重组质粒 DNA 双链的同一条链上。一条引物（诱变引物）携带一个拟引进靶 DNA 序列的突变，第二条引物携带一个能破坏质粒单一限制酶位点的突变。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料带 mutS 表型（
USE－诱变实验
实验材料 带 mutS 表型（例如BMH71-18) 的转化用大肠杆菌感受态带 mut+表型的转化用大肠杆菌感受态试剂、试剂盒 退火缓冲液贮存液合成缓冲液噬菌体 T4DNA 连接酶噬菌体 T4DNA 聚合酶或测序酶单一位点的限制性内切核酸酶琼脂糖凝胶诱变引物选择引物质粒 DNA仪器、耗材 70°C
USE－诱变实验
实验材料 带 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的转化用大肠杆菌感受态 带 mut+表型的转化用大肠杆菌感受态 试剂、试剂盒
诱变－PCR－实验
试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇乙醇矿物油或者一个蜡珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突变 PCR 缓冲液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高纯度的脱氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物琼脂糖凝胶用溴化乙锭染色仪器、
诱变－PCR－实验
试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇 乙醇 矿物油或者一个蜡珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突变 PCR 缓冲液
诱变－PCR－实验
诱变 PCR 最大的优势是以一种没有偏好的方式引入了各种类型的突变，而不是获得高水平的单一的扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒氯仿 异戊醇乙醇矿物油或者一个蜡珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突变 PCR 缓冲液DNA 聚合酶Nati
Use－of－a－Hemacytometer
A hemacytometer (also spelled hemocytometer) is an etched glass chamber with raised sides that will hold a quartz coverslip exactly 0.1 mm above the c
Use－of－Micropipets
A. Gilson-style Pipetmen Micropipets (and similar models)We primarily use the Gilson micropipets in the core course labs. We have four sizes identifie
定点诱变实验
基本方案 利用PCR引物点突变 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
定点诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE寡核苷酸引物质粒dNTPDNA聚合酶氯仿石蜡油无水乙醇仪器、耗材 离心管热循环仪离心机实验步骤 1. 利用突变区两侧的限制性内切酶位点将待诱变的DNA片段亚克隆进高拷贝数的载体中。 2. 用小量制备的质粒提取模板DNA，用TE缓冲液重悬100 ng DNA至终浓
USE－OF－THE－LIGHT－MICROSCOPE
USE OF THE LIGHT MICROSCOPE Each time the microscope is to be used it should be set up correctly to give a good image. Most often users forget to
酵母菌细胞的诱变实验——甲乙硫醚诱变
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD磷酸钠缓冲液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸钠仪器、耗材试管摇床离心机平板实验步骤1. 将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×108细胞/ml。2. 转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5~10
酵母菌细胞的诱变实验——紫外光诱变
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD刀豆氨酸仪器、耗材紫外光杀菌灯紫外光放射量测定器实验步骤1. 将过夜培养的酵母菌培养液接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养。离心5~10 s，用1 ml 无菌水重悬沉淀细胞，重复洗涤1次，再用1 ml 无菌水重悬。 2. 检查细胞密度，记录数据后将细胞密度调
区域特异性诱变实验
区域特异性诱变实验，用于（1）基因诱导改造（2）基因的特定表达（3）临床抗肿瘤等靶点的发挥。 实验方法原理 可在长达3‘的克隆化DNA片段上产生大量的随机分布的核苷酸替换突变，在将DNA克隆到一个可用来分离单链DNA的载体后，用各种可造成特定碱基损伤的化学试剂处理。 实验材料
DNA的接头分区诱变实验
实验材料 DNA 试剂、试剂盒 雾水乙醇 EDTA T4 DNA连接酶 TE
区域特异性诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 乙酸钠亚硝酸钠TE无水乙醇dNTP反转录酶RNA酶洗脱液溴化乙锭仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 用限制性内切核酸酶消化DNA以获得目的DNA片段，将靶片段双向克隆到M13噬菌体载体或含有M13复制起始子的质粒载体中。从100 ml 感染细抱培养物中提取单链DN
DNA的接头分区诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 雾水乙醇EDTAT4 DNA连接酶TENaCl仪器、耗材 培养箱水浴锅实验步骤 1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在质粒的目的区域产生一嵌套式的5’或3端'缺失突变体。首先在目的序列附近用一限制酶使质粒线性化，在用Bal 31消化时，应确定其切割效
DNA的接头分区诱变实验
Linker scanner mutations （接头分区突变）：体外在限制性片段加上位点，使两个DNA分子发生重组产生，结果在重组的位点加上连接序列。实验材料DNA试剂、试剂盒雾水乙醇EDTAT4 DNA连接酶TENaCl仪器、耗材培养箱水浴锅实验步骤1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核
区域特异性诱变实验
区域特异性诱变 实验方法原理 可在长达3‘的克隆化DNA片段上产生大量的随机分布的核苷酸替换突变，在将DNA克隆到一个可用来分离单链DNA的载体后，用各种可造
Use－of－the－GUS－Reporter－Gene
One of the most important considerations in the expression of heterologous proteins in plants is the choice of promoter. The study of promoter ac
Use－of－Transmission－Electron－Microscopy
Use of Transmission Electron Microscopy Overview A protocol describing the use of Zeiss EM9-S transmission electron microsco
简并寡核苷酸诱变实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材 水浴锅离心机分光光度计实验步骤 1. 设计寡核苷酸，其3‘端含有由8个核苷酸组成的回文结构，且包含某一限制性内切酶的识别位点；如果可能的话，5’端也应有一含某个限制性内切酶位点的序列。中间区段则应含目
诱变物质的微核测定实验
实验方法原理：微核（micronuclei)简称（MCN）是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具有伍万DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝
诱变物质的微核测定实验
1、了解微核测定的方法与意义2、寻找新的测试系统及新的更安全有效的植物诱变剂实验方法原理微核（micronuclei)简称（MCN）是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性
酵母菌细胞的诱变实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD磷酸钠缓冲液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸钠仪器、耗材 试管摇床离心机平板实验步骤 1. 将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×108细胞/ml。2. 转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5
诱变物质的微核测定实验
实验方法原理 微核（micronuclei)简称（MCN）是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具有伍万DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝
简并寡核苷酸诱变实验
本方法的一个重要特点就是将单链的简并寡核苷酸转变成同源双链分子后直接克隆进常规载体。由于不同的寡核苷酸可通过其3’末端的回文结构杂交，因此，寡核苷酸实际上起互为引物的作用，在大肠杆菌DNA聚合酶I klenow片段作用下延伸。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS
定点诱变实验——基本方案
定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。实验材料DNA试剂、试剂盒TE寡核
简并寡核苷酸诱变实验
小段DNA序列中产生大量突变 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒
Use－an－IgG－antiIgM...
实验概要This method involves coupling an IgG anti-IgM antibody to protein A or G beads (see method below). These beads can then be used in the normal