基因置换实验
—步基因破坏法 两步基因置换法 质粒改组 构建融合蛋白 实验材料 酵母菌株7-1 BY4741 质粒pFA6a-kanMX6 试剂、试剂盒 DNA 引物 仪器、耗材 YPD 平板 SC-ura平板 实验步骤 ......阅读全文
基因置换实验——两步基因置换法
实验步骤
基因置换实验
—步基因破坏法 两步基因置换法 质粒改组 构建融合蛋白 实验材料 酵母菌株7-1 BY4741
基因置换实验——质粒改组
实验材料酵母菌株7-2 2404质粒pDB141pRG68试剂、试剂盒诱变的pDB141 DNA仪器、耗材YPD 平板HC-leu平板5-FOA平板实验步骤第 1 天将菌株 7-2 在 YPD 平板上划线，30°C 培养。第 3 天挑一个丰满的菌株 7_2 菌落，接种到 5 mlYPD 培养液，30
基因置换实验———步基因破坏法
基因置换是酵母研究中最有效和最重要的技术之一。这种技术能使一个在染色体正常位置的基因与其离体条件下构建的等位基因进行置换，使置换前后的菌株仅仅在这个特殊的等位基因上存在遗传差异。利用这种方法可以分析在基因克隆中由无效突变 (null mutationr) 或其他任何类型突变所引起的表型变化。无论在理
酵母菌基因克隆实验
实验材料 酵母菌实验步骤 1. 用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2. 影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过
基因平均置换时间的概念
中文名称基因平均置换时间英文名称average gene substitution time定 义一个等位基因被另一个等位基因替换的平均世代数。应用学科遗传学（一级学科），进化遗传学（二级学科）
基因置换实验——构建融合蛋白
实验材料菌株BY4741质粒PDB118试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液仪器、耗材YPD 平板YPD 液体培养基血球计数板SC-his平板实验步骤YPD 平板 第 1 天将菌株 7-3 在 YPD 平板上划单克隆，30°C 下培养两天。第 3 天挑取单克隆，在 5 mlYPD 液体培养基中培养，30°C 过
基因置换的概念和功能
基因置换就是用正常基因通过体内基因同源重组,原位替换病变细胞内的致病基因,使细胞内的DNA完全恢复正常状态。属于基因治疗的一种方法。
酵母菌基因克隆实验——互补法
实验材料酵母菌实验步骤1. 用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2. 影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过夜培养之
酵母菌基因组DNA的提取实验
基本方案 实验材料 酵母菌 试剂、试剂盒
酵母菌基因组DNA的提取实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 SE缓冲液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K缓冲液 Tris仪器、耗材 高速冷冻离心机台式离心机恒温水浴低温冰箱冷冻真空干燥器取液器电泳仪水平电泳槽紫外观测仪实验步骤 1. 1.5 ml 对数生长期细菌细胞。2. 离心，12 000 rpm，1-2 min。3.
酵母菌絮凝基因研究取得系列成果
蛋白酶A缺失及抗老化啤酒酵母工程菌的构建 6月底，《西安晚报》以《细菌吃淤泥 城河水变清》为题，报道了西安护城河玉祥门到西门清淤示范区内，运用菌种清淤，在1个多月的时间里，让河水重新变清的消息。这显示了微生物在污水治理方面的巨大威力。 科学家发现一种絮凝基因，把它转入到具有污水处
克隆化酵母DNA的操作实验——基因置换技术
实验材料酵母实验步骤一、整合性破坏1. 将基因的内部片段亚克隆到YIP载体。2. 在此内部片段中将质粒线性化。3. 继续整合性转化步骤3（见基本方案1）。二、基因破坏一步法1. 将合适的选择性基因亚克隆到目的基因上，必要时，可在亚克隆的同时引入一个缺失。2. 采用合适的限制性位点，从步骤1
基因突变的诱变机制碱基置换突变
可以通过两个途径即碱基结构类似物的参入和诱变剂或射线引起的化学变化来进行。① 类似物的参入 5-溴尿嘧啶(BU)是胸腺嘧啶的结构类似物。它只是在第5位碳原子上以溴原子代替了胸腺嘧啶的甲基(─GH3),并且因此更易以烯醇式出现。大肠杆菌在含有BU的培养基中培养后,细菌的 DNA中的一部分胸腺嘧啶被BU
方法三：酵母菌基因组DNA的提取
方法三：酵母菌基因组DNA的提取一：仪器：同方法一二：试剂：SE缓冲液（1M山梨醇，0.1MEDTA pH7.5）；溶菌酶（50mg/ml）；20％PVP；蛋白酶K缓冲液（10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA）；其余同前三：操作 1.5ml 对数生长期细菌细胞
酵母菌
提起酵母菌这个名称，也许有人不太熟悉，但实际上人们几乎天天都在享受着酵母菌的好处。因为我们每天吃的面包和馒头就是有酵母菌的参与制成的；我们喝的啤酒，也离不开酵母菌的贡献，酵母菌是人类实践中应用比较早的一类微生物，我国古代劳动人民就利用酵母菌酿酒；酵母菌的细胞里含有丰富的蛋白质和维生素，所以也可以做
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
实验方法原理 实验材料 包含lacZ融合基因的酵母菌株试剂、试剂盒 选择培养基平板液氮Z缓冲液20 mg mL×-gal溶于二甲基甲酰胺仪器、耗材 30℃孵育箱圆形硝酸纤维素滤膜Whatman 3MM 滤纸实验步骤 1)在含有适当选择培养基的培养平板上点接种或者划线接种酵母菌克隆，在30℃培养直至生
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
构建LacZ融合载体研究酵母菌基因调控。由于这种检测方法简便而且灵敏度高，因此，酵母菌基因经常以LacZ基因的功能 部分作标签，来指示待研究酵母菌基因的表达调节功能。融合蛋白被这样构建：酵母基因的启动子加上这个基因编码蛋白的N端的几个氨基酸残基融合在LacZ基因的羧基 端，由此编码的蛋白质片段仍保持
酵母菌基因组转座子的诱变实验
实验方法原理 实验材料 诱变转座子基因组文库质粒DNA试剂、试剂盒 10×TE缓冲液 pH 8.0无菌 E. coli tets kans (如 DH5c×)14 cm的LB培养基平板培养基中加入3 mg mL的四环素和40μg mL的卡那霉素LB培养基丙三醇无菌NotⅠ非限制性内切核酸酶及
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
实验方法原理 实验材料 包含lacZ融合基因的酵母菌株 试剂、试剂盒 选择培
酵母菌基因组转座子的诱变实验
基本方案 小载体聚合酶链反应 mTn诱变基因产物的表位标记 实验方法原理 实验材料
酵母菌概述
提起酵母菌这个名称，也许有人不太熟悉，但实际上人们几乎天天都在享受着酵母菌的好处。我们每天吃的面包和馒头就是有酵母菌的参与制成的；我们喝的啤酒也离不开酵母菌的贡献。酵母菌是人类实践中应用比较早的一类微生物，我国古代劳动人民就利用酵母菌酿酒。酵母菌的细胞里含有丰富的蛋白质和维生素，所以也可以做成高级营
日本研究测定酵母菌所有基因的复制次数上限
日本冈山大学日前发表公报说，研究人员利用独创的方法测定了酵母菌所有基因的复制次数上限，发现大多数基因即使复制100次以上，细胞仍能维持正常功能，而一些基因只复制数次就会引发细胞死亡。 这项成果将有助于弄清唐氏综合征、癌症等因染色体数异常而导致的疾病。 冈山大学特聘副教授守屋央朗率领的
酵母菌基因组DNA的提取实验——基本方案
实验材料酵母菌试剂、试剂盒SE缓冲液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K缓冲液Tris仪器、耗材高速冷冻离心机台式离心机恒温水浴低温冰箱冷冻真空干燥器取液器电泳仪水平电泳槽紫外观测仪实验步骤1. 1.5 ml 对数生长期细菌细胞。2. 离心，12 000 rpm，1-2 min。3. 沉淀。4
置换色谱的置换展开方式的优点与局限
虽然传统洗脱色谱和置换色谱的分离作用都是由于样品对固定相的作用力不同来实现的, 但两者的分离机理不同。洗脱色谱中, 样品各组分的分离是由于它们对固定相作用的平衡常数不同, 导致各组分随流动相的流动有不同的移动速度。改变流动相的组成、离子强度或pH 值可以改变样品的吸附特性, 从而达到组分分离的目的。
CoreValve瓣膜置换优于主动脉瓣置换术
美国心脏病学会年会（ACC2014）上， David H Adams博士(纽约西奈山医疗中心)展示了CoreValve High-Risk Study研究结果。结果表明对于严重主动脉瓣狭窄且外科手术高危患者，经导管CoreValve瓣膜置换优于外科主动脉瓣置换 CoreValve Hi
加氢反应系统置换
加氢反应系统置换分为两个阶段，即空气环境置换为氮气环境、氮气环境置换为氢气环境。在空气环境置换为氮气环境时需要注意，置换完成后系统氧含量应
置换反应的概念
置换反应是单质与化合物反应生成另外的单质和化合物的化学反应，是化学中四大基本反应类型之一，包括金属与金属盐的反应，金属与酸的反应等。它是一种单质与一种化合物作用，生成另一种单质与另一种化合物的反应。氧化还原反应不一定为置换反应，置换反应一定为氧化还原反应。
置换反应的介绍
置换反应可表示为A+BC=B+AC 或 AB+C=AC+B，通常认为置换反应都是氧化还原反应，但是一些特殊的反应，例如金属羰基化合物间的置换，则不是氧化还原反应。除此之外，也可以指路易斯酸间的置换反应，此时并不需要单质参与反应。（出处：高等教育出版社的《无机化学》（第四版）下册第460页正文第3行：
冷冻置换的定义
中文名称冷冻置换英文名称freeze substitution定 义电镜标本冷冻固定中的一种脱水技术。用溶剂（如丙酮）去除标本中冰冻状态的水分，更好地保持细胞的细微结构。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）