粘粒和质粒克隆的纯化实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒 LB 抗生素 仪器、耗材 涂布棒 硝酸纤维滤膜 实验步骤 1. 通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。 2. 用无菌的牙签挑出阳性克隆，接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中，保存在4℃抑制细菌生长。 3. ......阅读全文
粘粒和质粒克隆的纯化实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
粘粒和质粒克隆的纯化实验
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料质粒试剂、试剂盒LB抗生素仪器、耗材涂布棒硝酸纤维滤膜
粘粒和质粒克隆的纯化实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LB抗生素仪器、耗材 涂布棒硝酸纤维滤膜实验步骤 1. 通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。2. 用无菌的牙签挑出阳性克隆，接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中，保存在4℃抑制细菌生长。3. 取1~25 μl 菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上，37
粘粒和质粒文库的扩增实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LB甘油仪器、耗材 硝酸纤维素膜培养箱实验步骤 1. 在含抗生素的平板上加一层硝酸纤维素膜，将抗药性细菌铺在硝酸纤维素膜上，培养细菌至菌落边缘正好相接。2. 往长满菌落的平板中加入LB培养液，10 cm 平板约加2 ml，15 cm平扳约加4 ml。用一支灭菌的细胞刮
粘粒和质粒文库的扩增实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
粘粒
Preparation of Cosmid DNAPreparation of Cosmid DNA from 50 ml Cultures (Donis Keller Lab)Cosmid vectors containing foreign DNA inserts are known to re
粘粒
Preparation of Cosmid DNAPreparation of Cosmid DNA from 50 ml Cultures (Donis Keller Lab)Cosmid vectors containing foreign DNA inserts are known to re
粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LBNaOH氯霉素Tris·ClNaCl仪器、耗材 硝酸纤维素滤膜离心机布氏漏斗培养箱实验步骤 1. 在含抗生素的平板上，通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度，计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。 2. 准备一层无菌的10 cm
粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
粘粒和质粒文库的扩增实验_基本方案
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料质粒试剂、试剂盒LB甘油仪器、耗材硝酸纤维素膜培养箱实
粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验——基本方案
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料质粒试剂、试剂盒LBNaOH氯霉素Tris·ClNaC
分子克隆常用载体（质粒、单链丝状噬菌体和噬粒）
DNA 片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获
质粒DNA的纯化
聚乙二醇沉淀法质粒DNA氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA(一)聚乙二醇沉淀法提取质粒DNA1)将核酸溶液所得]转入15mlCorex 管中，再加3ml 用冰预冷的5mol/L LiCl溶液，充分混匀，用合适转头于4℃下以10 000转/分离心10分钟。LiCl可沉淀高分子RNA。2)将上
纯化DNA实验_纯化质粒（碱裂解法）
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LB葡萄糖缓冲液乙酸钾仪器、耗材离心管实验步骤1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心
纯化质粒（碱裂解法）
1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心机上离心 2 分钟以沉淀大肠杆菌。吸掉培养液。4. 用 100 μl 葡萄
概述λ噬菌体载体的主要用途
利用λ噬菌体作载体，主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列，使其随左右臂一起包装成噬菌体，去感染大肠杆菌，并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。现在广泛使用的λ噬菌体载体也是已作过许多人工改造的，主要的改造是： ①设计去除λDNA上的一些限制性酶切点。这是因为λDNA较大，序列中的限制性酶切点过多，妨
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体2
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增，②细菌菌体的裂解，③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方
柱离心法纯化质粒DNA
实验原理1. 离心柱结构：特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环境中，核酸与硅胶膜能有效结合，而蛋白质、代谢产物和其他污染物则不
质粒DNA的制备和纯化
实验概要质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1~200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞内的复制一般有两种类型：
柱离心法纯化质粒DNA
实验概要本实验介绍了柱离心法纯化质粒DNA的原理及操作流程。实验原理1. 离心柱结构：特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环境中
质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。 提取质粒的基本步骤分为三步： ①细菌的培养和质粒的扩增 ②细菌菌体的裂解 ③质粒DNA的纯化 本实验采取的菌体
多克隆抗体纯化实验
实验材料 动物血清样品试剂、试剂盒 正辛酸醋酸缓冲液PBS仪器、耗材 透析袋高速低温离心机实验步骤 一、材料和试剂 1. 正辛酸 2. 60 mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液，PBS 3. 透析袋 4. 高速低温离心机 二、操作步骤 1. 将待提取样品用60 mmol/L，pH4.0醋
单克隆抗体的纯化实验——单克隆抗体的纯化实验
1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A280监测。 3. 依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所
质粒DNA的分离、纯化和鉴定
材料、设备及试剂 一、材料 含质粒的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料离心管(又称eppendorf管),离心管架。 二、设备 微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 台式高速离心机，恒温振荡摇床， 高压蒸汽消毒器(灭菌锅)， 涡旋振荡器， 电泳仪，琼脂糖平板
质粒DNA纯化和内毒素去除
质粒是在染色体或核区之外能够自主复制的双链闭合环状DNA分子，以超螺旋状态存在，几乎完全裸露，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。 质粒DNA广泛应用于基因工程、生物医学的研究以及生物产品的开发和应用。质粒DNA纯化
柱离心法纯化质粒DNA实验
实验原理1. 离心柱结构：特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环境中，核酸与硅胶膜能有效结合，而蛋白质、代谢产物和其他污染物则不
质粒DNA的抽提与纯化
目的 ： 采用碱变性法，学习小规模制备质粒DNA的技术原理 ： 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完
单克隆抗体的纯化
一、腹水型单抗的纯化在单抗纯化之前，一般均需对腹水进行预处理，目的是为了进一步除去细胞及其残渣、小颗粒物质、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和过滤离心法，以前者处理效果为佳，而且操作简便。1、二氧化硅吸附法新鲜采集的腹水（或冻存的腹水），2000r/min 15分钟，除去细胞成分（或
噬菌体克隆的纯化实验
噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的细菌病毒的总称，作为病毒的一种，噬菌体具有病毒特有的一些特性：个体微小；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已知的噬菌体都是在细菌细胞中利用细菌的核糖体、蛋白质合成时所需的各种因子、各种氨基酸和能量产生系统来实现其自身