粘粒和质粒文库的扩增实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LB甘油仪器、耗材 硝酸纤维素膜培养箱实验步骤 1. 在含抗生素的平板上加一层硝酸纤维素膜，将抗药性细菌铺在硝酸纤维素膜上，培养细菌至菌落边缘正好相接。2. 往长满菌落的平板中加入LB培养液，10 cm 平板约加2 ml，15 cm平扳约加4 ml。用一支灭菌的细胞刮棒从硝酸纤维素膜上将菌落刮下来，形成菌悬液。3. 将平板中的菌悬液收集到一个50 ml 塑料管中，加无菌的甘油至终浓度15%，充分混匀后分装到1 ml的小管中，每管500 μl，于-70℃冻存（这样分装的小份保存超过一年仍能存活）。 4. 筛选文库时，取出一冻存小管，解冻并滴定细菌浓度，然后将细菌铺在筛选的滤膜上。注意事项 任何扩增步骤最值得关注的问题是每一个初始重组子要得到均等的扩增的机会，若重组菌的增殖率有所不同，将导致扩增文库的表现度过量或不足。 ......阅读全文
粘粒和质粒文库的扩增实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LB甘油仪器、耗材 硝酸纤维素膜培养箱实验步骤 1. 在含抗生素的平板上加一层硝酸纤维素膜，将抗药性细菌铺在硝酸纤维素膜上，培养细菌至菌落边缘正好相接。2. 往长满菌落的平板中加入LB培养液，10 cm 平板约加2 ml，15 cm平扳约加4 ml。用一支灭菌的细胞刮
粘粒和质粒文库的扩增实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
粘粒和质粒文库的扩增实验_基本方案
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料质粒试剂、试剂盒LB甘油仪器、耗材硝酸纤维素膜培养箱实
粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LBNaOH氯霉素Tris·ClNaCl仪器、耗材 硝酸纤维素滤膜离心机布氏漏斗培养箱实验步骤 1. 在含抗生素的平板上，通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度，计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。 2. 准备一层无菌的10 cm
粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验——基本方案
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料质粒试剂、试剂盒LBNaOH氯霉素Tris·ClNaC
粘粒和质粒克隆的纯化实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
粘粒和质粒克隆的纯化实验
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料质粒试剂、试剂盒LB抗生素仪器、耗材涂布棒硝酸纤维滤膜
粘粒和质粒克隆的纯化实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LB抗生素仪器、耗材 涂布棒硝酸纤维滤膜实验步骤 1. 通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。2. 用无菌的牙签挑出阳性克隆，接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中，保存在4℃抑制细菌生长。3. 取1~25 μl 菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上，37
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
实验方法原理 应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保 存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
实验方法原理 应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保 存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。实验材料 λ 噬
黏粒文库的扩增和贮存(在液体培养基内扩增)
实验方法原理 不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不稳定的克隆会发生重排，而生长慢的克隆可能会从文库中完全消失。 实验材料
黏粒文库的扩增和贮存(在液体培养基内扩增)
实验方法原理 不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不稳定的克隆会发生重排，而生长慢的克隆可能会从文库中完全消失。实验材料 λ 噬菌体包装反应大肠杆菌接种菌株试剂、试剂盒 甘油仪器、耗材 卡那霉素的琼脂平板TB 培养基Sorvall GSA 转头或同
黏粒文库的扩增和贮存(在液体培养基内扩增)
不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不稳定的克隆会发生重排，而生长慢的克隆可能会从文库中完全消失。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不
噬菌体文库的扩增实验
基本方案 实验材料 噬菌体 试剂、试剂盒
噬菌体文库的扩增实验
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但
噬菌体文库的扩增实验
实验材料 噬菌体试剂、试剂盒 MgSO4麦芽糖琼脂糖氯仿DMSOSM仪器、耗材 离心机分光光度计水浴锅实验步骤 1. 制备铺平板菌（1）2.5 ml 新鲜过夜培养的宿主菌液接种于250 ml 含0.2%麦芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培养液中。（2）在37℃恒温摇床剧烈摇荡2~4 h，
粘粒
Preparation of Cosmid DNAPreparation of Cosmid DNA from 50 ml Cultures (Donis Keller Lab)Cosmid vectors containing foreign DNA inserts are known to re
粘粒
Preparation of Cosmid DNAPreparation of Cosmid DNA from 50 ml Cultures (Donis Keller Lab)Cosmid vectors containing foreign DNA inserts are known to re
通过杂交筛选未扩增的黏粒文库（滤膜影印）
实验方法原理 经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选（Hanahan and Meselon 1980)。 实验步骤
通过杂交筛选未扩增的黏粒文库（滤膜影印）
实验方法原理 经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选（Hanahan and Meselon 1980)。实验步骤 一、材料1. 培养基含 25 μg/ml 卡那霉素的 TB 琼脂平板（150 mm )TB 培养基2. 专用设备厚玻璃板皮下注射针头（17号）
通过杂交筛选未扩增的黏粒文库（滤膜影印）
经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选（Hanahan and Meselon 1980)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选（Hanahan and
基因组文库的扩增实验
通过平板培养可对重组噬菌体文库进行扩增，平板培养的原种可直接来源于本方案所述的包装混合物。但只要可能，该扩增过程可被省略，而感兴趣的 DNA 序列可从原始文库直接筛选。扩增将不可避免地降低文库的复杂性，部分原因在于在连续几轮的噬菌体生长中，对生长缓慢的重组噬菌体来说是十分不利的。本实验来源「分子克隆
基因组文库的扩增实验
实验方法原理 通过平板培养可对重组噬菌体文库进行扩增，平板培养的原种可直接来源于本方案所述的包装混合物。但只要可能，该扩增过程可被省略，而感兴趣的 DNA 序列可从原始文库直接筛选。扩增将不可避免地降低文库的复杂性，部分原因在于在连续
基因组文库的扩增实验
实验方法原理 通过平板培养可对重组噬菌体文库进行扩增，平板培养的原种可直接来源于本方案所述的包装混合物。但只要可能，该扩增过程可被省略，而感兴趣的 DNA 序列可从原始文库直接筛选。扩增将不可避免地降低文库的复杂性，部分原因在于在连续几轮的噬菌体生长中，对生长缓慢的重组噬菌体来说是十分不利的
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液 氯仿 裂解缓冲液 检测抗原-抗体复合物所用试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓冲液 125I 标记的蛋白质 A 或 125I 标记的免疫球蛋白放射性碘化第二抗体第一抗体LB 或 SOB 琼脂平板仪器、耗材 空气培养箱平头镊子 装有防水黑墨水（印度墨水）并带有 18 号针头的注射器硝酸纤维
筛选质粒载体构建表达文库实验
检测结合抗体的方法有以下 3 种：放射化学筛选，生色反应筛选及化学发光反应筛选。3 种方法的优缺点在本章导言中有所论述。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓
如何优雅的完成噬菌体的扩增和定量实验
Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术，其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术，在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用，极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用，还能和传统的动物免疫技术相结合，与纳米抗体、