粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LBNaOH氯霉素Tris·ClNaCl仪器、耗材 硝酸纤维素滤膜离心机布氏漏斗培养箱实验步骤 1. 在含抗生素的平板上，通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度，计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。 2. 准备一层无菌的10 cm 或15 cm的Whatman 3 MM 滤纸，故在玻璃布氏漏斗或瓷质过滤漏斗中，加入10~20 ml LB培养基。3. 将标记好方向的硝酸纤维素滤膜放入含抗生素的LB平板中，并移至过滤装置，再将细菌悬液用吸管加到滤膜上，注意不要往滤膜边缘4~5 mm 处加液体。 4. 慢慢抽吸液体，待菌悬液被吸干之后，揭下滤膜并移至含抗生素的平板中，置于37℃培养，直至长出直径达1~2 mm 的菌落。5. 标记并浸湿另一张硝酸纤维素滤膜。6. 先将长有克隆的滤膜（......阅读全文
粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LBNaOH氯霉素Tris·ClNaCl仪器、耗材 硝酸纤维素滤膜离心机布氏漏斗培养箱实验步骤 1. 在含抗生素的平板上，通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度，计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。 2. 准备一层无菌的10 cm
粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验——基本方案
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料质粒试剂、试剂盒LBNaOH氯霉素Tris·ClNaC
粘粒和质粒文库的扩增实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
粘粒和质粒文库的扩增实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LB甘油仪器、耗材 硝酸纤维素膜培养箱实验步骤 1. 在含抗生素的平板上加一层硝酸纤维素膜，将抗药性细菌铺在硝酸纤维素膜上，培养细菌至菌落边缘正好相接。2. 往长满菌落的平板中加入LB培养液，10 cm 平板约加2 ml，15 cm平扳约加4 ml。用一支灭菌的细胞刮
粘粒和质粒文库的扩增实验_基本方案
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料质粒试剂、试剂盒LB甘油仪器、耗材硝酸纤维素膜培养箱实
粘粒和质粒克隆的纯化实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 LB抗生素仪器、耗材 涂布棒硝酸纤维滤膜实验步骤 1. 通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。2. 用无菌的牙签挑出阳性克隆，接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中，保存在4℃抑制细菌生长。3. 取1~25 μl 菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上，37
粘粒和质粒克隆的纯化实验
基本方案 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
粘粒和质粒克隆的纯化实验
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料质粒试剂、试剂盒LB抗生素仪器、耗材涂布棒硝酸纤维滤膜
噬菌体文库的铺平板和转移实验
实验材料 噬菌体试剂、试剂盒 琼脂糖LBNaOHSSCTris·Cl仪器、耗材 硝酸纤维素膜培养箱实验步骤 1. 通过系列等比稀释滴定噬菌体文库的滴度。 2. 重组噬菌体与铺平板的宿主菌混合于培养试管中（表一），于37 ℃温育20 min。 表一、噬菌体文库铺平板组分最佳配制方法 3. 按每个
噬菌体文库的铺平板和转移实验
基本方案 实验材料 噬菌体 试剂、试剂盒
噬菌体文库的铺平板和转移实验——基本方案
文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。实验材料噬菌体试剂、试剂盒琼脂糖LBNaOHSSCTris·C
粘粒
Preparation of Cosmid DNAPreparation of Cosmid DNA from 50 ml Cultures (Donis Keller Lab)Cosmid vectors containing foreign DNA inserts are known to re
粘粒
Preparation of Cosmid DNAPreparation of Cosmid DNA from 50 ml Cultures (Donis Keller Lab)Cosmid vectors containing foreign DNA inserts are known to re
筛选质粒载体构建表达文库实验
检测结合抗体的方法有以下 3 种：放射化学筛选，生色反应筛选及化学发光反应筛选。3 种方法的优缺点在本章导言中有所论述。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓冲液 125I 标记的蛋白质 A 或 125I 标记的免疫球蛋白放射性碘化第二抗体第一抗体LB 或 SOB 琼脂平板仪器、耗材 空气培养箱平头镊子 装有防水黑墨水（印度墨水）并带有 18 号针头的注射器硝酸纤维
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液 氯仿 裂解缓冲液 检测抗原-抗体复合物所用试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
实验方法原理 应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保 存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
实验方法原理 应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保 存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。实验材料 λ 噬
双杂交和其他双成分系统实验（五）
离心机和转子Sorvall RT6000 离心机，H1000B MPC 和 H6000A MPC 转子（离心微量滴定板用）专用设备玻璃珠（直径 0.45 mm, 无菌；Sigma)微量滴定板（24 孔或 96 孔 [可选])重复用移液管可选，请参见步骤 1。附加试剂此方案的步骤 2 需要第 1 章方
外显子捕获与扩增（一）
实验材料 大肠杆菌菌株 HB101 质粒 pSPL3COS-7 细胞载体 pBluescriptⅡ大肠杆菌 DH5α试剂、试剂盒 pSPL3 多克隆位点图谱限制性内切核酸酶PvuⅡT4DNA 连接酶LB 琼脂平板黏粒载体TESOC 培养基琼脂糖凝胶LB 肉汤培养基PBS胰酶-EDTA 溶液D
概述λ噬菌体载体的主要用途
利用λ噬菌体作载体，主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列，使其随左右臂一起包装成噬菌体，去感染大肠杆菌，并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。现在广泛使用的λ噬菌体载体也是已作过许多人工改造的，主要的改造是： ①设计去除λDNA上的一些限制性酶切点。这是因为λDNA较大，序列中的限制性酶切点过多，妨
基因组文库和cDNA文库的构建及筛选
刘芝华 中国医学科学院肿瘤研究所 分子肿瘤学国家重点实验室 概念： 基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体；cDNA文库是指含有所有重组cDNA的克隆群体。 基因组文库：来源于基因组DNA，反映基因组的全部信息，用于基因组物理图谱的构建，基因组序列分析，基因在染色体上
重组质粒的筛选（抗生素平板筛选和α互补筛选）
重组DNA转化受体细胞后，须在不同水平上进行筛选，以区别转化子与非转化子、重组子与非重组子以及鉴定所需的特异性重组子。在转化过程中，并非每个受体细胞都被转化；即使获得转化细胞，也并非都含有目的基因，所以需采用有效方法进行筛选。筛选的方法包括根据遗传表型筛选、限制性内切酶分析筛选、核酸探针筛选、PCR
外显子捕获与扩增1
本方案以哺乳动物穿梭载体 pSPL3 为例，描述了外显子扩增的方法，内容分为以下五个阶段。阶段 1: 文库的构建; 阶段 2: 电穿孔法将文库转染 COS-7 细胞; 阶段 3:mRNA 的提取; 阶段 4: 反转录 PCR; 阶段 5: 克隆分析。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：
黏粒文库的扩增和贮存(在液体培养基内扩增)
实验方法原理 不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不稳定的克隆会发生重排，而生长慢的克隆可能会从文库中完全消失。 实验材料
黏粒文库的扩增和贮存(在液体培养基内扩增)
实验方法原理 不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不稳定的克隆会发生重排，而生长慢的克隆可能会从文库中完全消失。实验材料 λ 噬菌体包装反应大肠杆菌接种菌株试剂、试剂盒 甘油仪器、耗材 卡那霉素的琼脂平板TB 培养基Sorvall GSA 转头或同
黏粒文库的扩增和贮存(在液体培养基内扩增)
不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不稳定的克隆会发生重排，而生长慢的克隆可能会从文库中完全消失。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不
相互作用蛋白鉴定实验——相互作用蛋白捕获
实验方法原理实验要经过两次连续大量的酵母菌平板筛选过程。酵母菌含有 LexA 融合探针、报道基因和插入PJG4-5（见图19.1.6）的 GAL 启动子控制下的 cDNA 表达文库。最近，已有可供用于这个系统的文库。实验材料携带适当质粒组合的酵母菌试剂、试剂盒完全（CM）缺失成分液体培养基含有如下指