用GST融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验
实验材料 结合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 试剂、试剂盒 碱性缓冲液 封闭缓冲液 相互作用缓冲液PK 缓冲液 还原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中 洗涤缓冲液 1 洗涤缓冲液 2 蛋白酶 蛋白激酶 A [y-32P]ATP 仪器、耗材 与待筛选蛋白结合的膜或滤膜 Sephadex G-50 转柱 实验......阅读全文
融合蛋白的具体步骤介绍
1、进行目的基因的克隆：根据基因序列互补原则，设计合适的引物序列，以cDNA为模板，利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段。2、在载体中进行重组：通过限制内切酶将两个DNA片段进行酶切并回收，然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片段进行体外连接，并克隆到高表达质粒载体中，构建重组质粒。3、
融合蛋白酶解实验
实验方法原理 实验材料 1 mg／ml 融合蛋白试剂、试剂盒 200 μg Xa 因子／ml 反应缓冲液2 × SDS 样品缓冲液仪器、耗材 沸水浴实验步骤 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间。反应 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白反应
融合蛋白的酶解实验5
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒SDSGST清洗缓冲液GST洗脱缓冲液仪器、耗材水浴锅培养箱离心机实验步骤1. 在20或50 ml 带球旋盖的试管中，用20倍体积含1%Triton X-100的PBS液洗涤结合在谷胱甘肽-琼脂糖珠的GST融合蛋白。室温下，在台式离心机上以500 g 离心10 s 沉淀
融合蛋白的酶解实验2
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒SDS盐酸胍CaCl2仪器、耗材水浴锅培养箱离心机实验步骤1. 将融合蛋白在≥10倍体积的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 盐酸胍中透析4 h，或将盐酸胍加入融合蛋白中至终浓度为6 mol/l。2. 将样品在100倍体积的20 mmol
融合蛋白的设计有几种方式
融合蛋白的设计大致分为基于重复结构、基于生长因子以及基于细胞粘附分子3类。第1类融合蛋白中最典型的是来源于弹性蛋白( Elastin-Like Polymers，ELPs) 及丝素蛋白( Silk-Like Polymers，SLPs) 的融合蛋白。ELPs 是一种由数个重复的氨基酸序列组成的细胞外
关于融合蛋白的操作要点介绍
在构建融合蛋白中，一个关键的问题是两蛋白间的接头序列( Linker )，即连接肽。它的长度对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短，可能影响两蛋白高级结构的折叠，从而相互干扰；如果接头序列太长，又涉及免疫原性的问题，因为接头序列本身就是新的抗原。 一般来说， 3-5个氨基酸的Link
线粒体融合蛋白2决定细胞生死
有机体的每个细胞中都有一种传感器，能检测自身“内部”环境是否健康。这种“报警器”存在于内质网(ER)中，能感知细胞所受的压力，引发修复反应或让细胞走向死亡。据物理学家组织网近日报道，西班牙巴塞罗那生物医学研究所(IRB)科学家最近发现，线粒体融合蛋白2(Mfn2)对于正确检测细胞压力水平起着关键
融合蛋白酶解实验
基本方案 用 Xa 因子 实验方法原理 实验材料 1 mg／ml 融合蛋白
融合蛋白化学降解实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 CNBr甲酸SDS仪器、耗材 离心机分光光度计水浴锅实验步骤 1. 进行预试验以确定最短温育反应时间。冻干两小份50 μl 的融合蛋白溶液，将其中一份重悬于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一份重悬于50 μl 含CNBr 的70%甲酸中，室温下
融合蛋白的免疫筛选实验
基本方案 IPTG法 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒
融合病毒蛋白的基本信息
中文名称融合病毒蛋白英文名称fusin定 义淋巴细胞表面趋化因子受体蛋白。是人类免疫缺陷病毒感染CD4细胞的最初结合位点，结合后病毒与细胞融合进入细胞。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞免疫（二级学科）
融合蛋白的制备具体步骤
1、进行目的基因的克隆：根据基因序列互补原则，设计合适的引物序列，以cDNA为模板，利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段。2、在载体中进行重组：通过限制内切酶将两个DNA片段进行酶切并回收，然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片段进行体外连接，并克隆到高表达质粒载体中，构建重组质粒。3、
融合蛋白技术的目的是什么？
融合蛋白技术是为获得大量标准融合蛋白而进行的有目的性的基因融合和蛋白表达方法，利用融合蛋白技术，可构建和表达具有多种功能的新型目的蛋白。
GSTpulldown操作流程
实验目的：体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。实验原理：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。因此，
GSTpulldown操作流程
实验目的：体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。实验原理：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。因此，
GSTpull－down－技术
实验概要本实验详细介绍了GST-pull down 技术的操作流程，主要包括：GST蛋白的大量制备，谷胱甘肽-琼脂糖树脂的处理，GST蛋白的结合，细胞裂解液的预清除及细胞裂解液的探测。实验步骤1. 大量制备GST蛋白 1) 活化冻存菌种GST和GST-X：按1：50比例将表达蛋白的冻存菌液加入5
GSTpulldown操作流程
实验目的：体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。 实验原理：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。
GSTpulldown操作流程
实验材料 探针蛋白原核蛋白细胞蛋白组织蛋白提取物试剂、试剂盒 NaClKClNa2HPO4KH2PO4Triton-100IPTGPMSF（苯甲基磺酰氟）CocktaierImmobilized Glutathione无水乙醇仪器、耗材 定容瓶锥形瓶高速离心机低温冰箱超声仪EP管层析柜
GSTpulldown操作流程
实验目的：体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。 实验原理：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）
GSTpulldown操作流程
实验概要体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。实验原理利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。因此，当与
GSTpull－down－技术
实验概要本实验详细介绍了GST-pull down 技术的操作流程，主要包括：GST蛋白的大量制备，谷胱甘肽-琼脂糖树脂的处理，GST蛋白的结合，细胞裂解液的预清除及细胞裂解液的探测。实验步骤1. 大量制备GST蛋白 1) 活化冻存菌种GST和GST-X：按1：50比例将表达蛋白的冻存菌液加入5
蛋白质分析技术(WesternBlot－ELISA免疫荧光与免疫组化技术)4
四免疫组织化学技术原理：是指酶标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的成色反应，对相应的抗原进行定性、定位和定量测定的一项技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙的结合起来，借助显微镜（包括荧光显微镜、电子显微镜等）的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋
亲和层析－－GST标签（谷胱甘肽）
低耐压：谷胱甘肽琼脂糖微球大包装填料谷胱甘肽琼脂糖凝胶提供了一步纯化方法，并允许对含有谷胱甘肽结合序列的蛋白质进行快速、温和以及高特异性的纯化。通过使用含有还原型谷胱甘肽的缓冲液洗脱，已结合的 GST融合蛋白容易从填料中被取代。 该填料用于纯化谷胱甘肽 -S- 转移酶(GST) 以及带有 GST 标
谷胱甘肽琼脂糖凝胶的使用方法
实验概要本实验介绍了谷胱甘肽琼脂糖凝胶的使用方法。Pgex载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶溶合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。Pgex是一类以谷胱甘肽(γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸)作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚豪摩尔级的，因此谷胱甘肽
重组蛋白表达的几种常用标签介绍
重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。本文将简要介绍几个常用载体标签及其功能和优点。一. GST标签GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为26KD。将它应用在原
硫氧还原蛋白融合蛋白的表达和纯化实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 氨苄青霉素甘油色氨酸仪器、耗材 电泳仪培养箱摇床试管实验步骤 1. 将编码目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS质粒上的trxA基因3‘末端，构建符合读框的融合基因，或者于pALtrxA-781的单一Rsr 2位点上插入短肽编码序列。2. 用含
硫氧还原蛋白融合蛋白的表达和纯化实验
基本方案 实验材料 融合蛋白 试剂、试剂盒
硫氧还原蛋白融合蛋白的表达和纯化实验
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒氨苄青霉素甘油色氨酸仪器、耗材电泳仪培养箱摇床试管实验步骤1. 将编码目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS质粒上的trxA基因3‘末端，构建符合读框的融合基因，或者于pALtrxA-781的单一Rsr 2位点上插入短肽编码序列。2. 用含有重组硫
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
pGEX 载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽 S 转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒二硫苏糖醇谷胱甘肽洗脱缓冲液磷酸缓冲钠盐溶液Tri
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
实验材料 表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞 试剂、试剂盒 二硫苏糖醇 谷胱甘肽洗脱缓冲液 磷酸