谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
pGEX 载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽 S 转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒二硫苏糖醇谷胱甘肽洗脱缓冲液磷酸缓冲钠盐溶液TritonX-100DNase溶菌酶RNase凝血酶、肠激酶或 Xa 因子溶液SDS-聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材SorvallSS-34 转头或相当的转头谷胱甘肽-琼脂糖树脂皮下注射针头实验步骤材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的成分参见附录 1。贮存液稀释至适当浓度。二硫苏糖醇（1mol/L)谷胱甘肽洗脱缓冲液10mmol/L 还原型谷胱甘肽50 mmol/LTris-Cl(pH8.0)磷酸缓冲钠盐溶液（PBS)(4°C)TritonX-100(0.2%V/V)酶和缓冲液DNase(5 mg/ml)溶菌酶RNase(5 mg/ml)凝血......阅读全文
表达蛋白检测实验
实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性（细胞内）蛋白的，如果重组蛋白是分泌到培养基中的，可按注解中的步骤操作。实验材料 生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒
脑脊液蛋白电泳实验
1、原理 与血清蛋白电泳相同，利用各种蛋白质在电场作用下迁移率不同来进行检测。由于CSF蛋白质含量较低，电泳前须进行浓缩处理。一般采用透析法浓缩，将CSF加入透析袋内，置于吸水的透析液中，CSF中的水分移至透析液内，CSF的蛋白质浓度增加后，再进行电泳分析医`学教育网搜集整理。 2、试剂与器材
核蛋白提取实验
实验材料水稻悬浮细胞 试剂、试剂盒匀浆液 裂解缓冲液
核蛋白提取实验
实验材料 水稻悬浮细胞试剂、试剂盒 匀浆液裂解缓冲液SDS 样品缓冲液磷酸缓冲液实验步骤 ( 1 ) 按照 Morre 和 Anderson 的方法从水稻悬浮细胞中分离细胞核，本文对方法进行了一些改动。所有分离细胞核的步骤都在冰上或 4°C 进行。( 2 ) 3000 g 离心 5 min 收集约
核蛋白提取实验
实验材料水稻悬浮细胞试剂、试剂盒匀浆液裂解缓冲液SDS 样品缓冲液磷酸缓冲液实验步骤( 1 ) 按照 Morre 和 Anderson 的方法从水稻悬浮细胞中分离细胞核，本文对方法进行了一些改动。所有分离细胞核的步骤都在冰上或 4°C 进行。( 2 ) 3000 g 离心 5 min 收集约 3 g
表达蛋白检测实验
免疫印迹法 免疫沉淀法 点印迹法 实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是
诱饵蛋白特性鉴定实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒CM培养基仪器、耗材水浴锅培养箱电转仪实验步骤一、lacZ激活试验 1. 采用标准的亚克隆技术，将编码目的蛋白质的DNA插入pEG202的多接头中，构建一个符合读框的融合蛋白。2. 将下列组合的质粒，分别按“乙酸锂转化法”转化酵母菌EGY48。（1）pBait+pSH1
DNA结合蛋白测定实验
实验方法原理 本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时，与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移，因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。
蛋白质分离实验
实验方法原理 实验材料 含10 mg蛋白质／ml 的溶于水的样品试剂、试剂盒 硼酸钠仪器、耗材 50 μm 内径的包被的融合硅毛细管柱CE 仪器实验步骤 1. 用 50 mmol/L 硼酸钠缓冲液 1/10（V/V） 稀释蛋白质样品，使终浓度 1.0 mg/ml，也可在 50 mmol/L 硼酸钠缓
蛋白质定量实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G250乙醇磷酸实验步骤 (1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品，可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比
蛋白质合成实验
实验步骤 材料无菌细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要，因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定）非无菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH
GST－融合蛋白沉降实验
GST 沉降实验与 far western(方案 2) 相比有—个优点：探针蛋白是在更自然的环境下与可能的搭档蛋白孵育，因而增强了相互作用的有效性。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料细胞裂解液其中蛋白质 35S 用标记试剂、试剂盒裂解
蛋白质染色实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 聚丙烯酰胺凝胶固定液染色液脱色液仪器、耗材 滤纸培养箱实验步骤 1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以3~5倍体积的固定液覆盖，在旋转摇床中缓慢揺动2 h。 2. 倾去固定液，以考马斯亮蓝染色液覆盖凝胶，并缓慢摇动4 h。3. 倾去染色液，用约50 ml 固定液冲
蛋白质合成实验
实验步骤 材料 无菌 细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板 3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要
GST－融合蛋白沉降实验
实验材料 细胞裂解液 其中蛋白质 35S 用标记 试剂、试剂盒 裂解缓冲液 SDS 聚丙烯酰胺凝胶
诱饵蛋白特性鉴定实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 CM培养基仪器、耗材 水浴锅培养箱电转仪实验步骤 一、lacZ激活试验 1. 采用标准的亚克隆技术，将编码目的蛋白质的DNA插入pEG202的多接头中，构建一个符合读框的融合蛋白。2. 将下列组合的质粒，分别按“乙酸锂转化法”转化酵母菌EGY48。（1）pBait+
制备肌动蛋白实验
从肌肉制备丙酮粉用于纯化肌动蛋白 由骨骼肌丙酮粉制备肌动蛋白 将肌动蛋白纯化成纯品 实验材料 肌球蛋白
膜蛋白的纯化实验
实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能
诱饵蛋白特性鉴定实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质回收实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDSDTT脱色液染色液仪器、耗材电泳仪透析膜实验步骤1. 凝胶浸泡在染色液中于室温缓慢摇动染色15~20 min，然后移至脱色液中于4℃温和摇动下脱色2~3 h。2. 切下染色后的凝胶条带，于4℃水中浸泡2~3 h，期间换几次水。然后分别将每条胶移入Petri培养皿中
脑脊液总蛋白测定实验
实验方法原理 磺基水杨酸为生物碱试剂，能沉淀蛋白质，但对白Pr的沉淀能力比球Pr强，加入Na2SO4后，同样浓度的ALB和球Pr呈浊，趋于一致，与标准Pr浓度对比定量测定．试剂、试剂盒 磺基水杨酸－硫酸钠试剂Pr标准液实验步骤 1. 取4支试管，分别标明标本管，标本空白管标准管，试剂空白管，向标本管
蛋白质抽取实验
蛋白质在细菌中表现后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。仪器用具：恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管 （使用20,000 rpm离心陀）使用高速离心机要注意： 离心机及离心陀的温度要预冷完全，相对位置的两只离心管要平衡好
蛋白共沉淀检测实验
用蛋白A／G-琼脂糖 备择 用GST融合蛋白 实验方法原理实验材料 全细胞抽提物 试剂、试剂盒 抗体 免疫共沉淀缓冲液
蛋白产物的检测实验
一、组织蛋白的裂解提取：1.分别取-70℃保存的各组动物的样品（半个脑、0.5g肌肉），放入小离心管中，在冰浴上以PBS充分洗涤2次，除去残留血液。2.用无菌手术剪和镊子将大鼠肌肉剪碎（脑样品不用剪碎），放入另一小离心管中，于0℃以PBS充分洗涤，4℃，3000 rpm离心5分钟。3.吸出上清夜，尽
血清粘蛋白测定实验
实验方法原理0.6 mol/L 过氯酸测定血清中蛋白质时粘蛋白不被沉淀，而存留于滤液中，再加磷钨酸使粘蛋白沉淀，然后以酚试剂测定其中蛋白质的含量。实验步骤注意事项1、本法影响因素很多。正常值观察报告不一，故无论用蛋白或酪AA表示结果，均须说明所采用的方法及正常值。2、操作中血清与154mmol/L氯
蛋白质定量实验
考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法 碱性铜还原分析法 胺衍生法 实验方法原理 蛋白质分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基，其化学结构中
制备肌动蛋白实验
实验材料 肌球蛋白试剂、试剂盒 肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材 离心机实验步骤 1. 抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用 3 倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提 10 分钟。肌球蛋白抽提溶液：0.5 mol/L KCl0.1 mol/L K2HPO42. 抽提物离心（GSA 转头，13000 r/min，1
蛋白质染色实验
考马斯亮蓝染色 银染法 非氨盐银染法 快速银染法 实验方法原理 1. 凝胶中蛋白质的定位可用考马斯亮蓝染料染色或银染色。前者简便
蛋白质分离实验
分离未知 pI 蛋白质 分离已知pI 的蛋白质 实验方法原理 实验材料 含10
血清粘蛋白测定实验
实验方法原理0.6 mol/L 过氯酸测定血清中蛋白质时粘蛋白不被沉淀，而存留于滤液中，再加磷钨酸使粘蛋白沉淀，然后以酚试剂测定其中蛋白质的含量。实验步骤一、实验试剂：1. 154mmol/L氯化钠溶液．2. 1.8mol/L过氯酸：取含水量为70％－72％过氯酸28ml，加蒸馏水稀释200ml并标