融合蛋白酶解实验
实验方法原理 实验材料 1 mg／ml 融合蛋白试剂、试剂盒 200 μg Xa 因子／ml 反应缓冲液2 × SDS 样品缓冲液仪器、耗材 沸水浴实验步骤 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间。反应 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白反应 2:5 μl 不含 Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白（模拟消化）室温下反应。2. 分别在 2、4、8 和 24 h 取出 5 μl 反应液，加 2 × SDS 样品缓冲液 5μl ，-20℃ 下冻存。3. 在 24 h 时，将 5 μl 反应 2 （模拟消化）液与 5 μl 2 × SDS 样品缓冲液混合。4. 将 5 μl 原始融合蛋白溶液与 5 μl 2 × SDS 样品缓冲液混合（未裂解对照）。5. 将所有样品于沸水浴中加热 10 min，加样到 SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，根据裂解程度确......阅读全文
融合蛋白酶解实验
实验方法原理 实验材料 1 mg／ml 融合蛋白试剂、试剂盒 200 μg Xa 因子／ml 反应缓冲液2 × SDS 样品缓冲液仪器、耗材 沸水浴实验步骤 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间。反应 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白反应
融合蛋白酶解实验
基本方案 用 Xa 因子 实验方法原理 实验材料 1 mg／ml 融合蛋白
融合蛋白酶解实验_－用－Xa－因子
使用基因融合表达系统在大肠杆菌中表达外源基因已越来越受欢迎。其原因在很大程度上归因于融合系统能够产生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽转移酶以及硫氧还蛋白均被证实能非常成功地生产正确折叠、有生物活性的蛋白质。其中每一种都备有方便的纯化方法，可将融合蛋白与细胞污染物分开。所产生的蛋白质适用于进行其生物学
细胞融合实验
实验概要掌握细胞融合原理、应用融合细胞的方法以及细胞融合率的计算。实验原理细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也
细胞融合实验
实验方法原理细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和电脉冲。目前应用zui广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结
细胞融合实验的实验原理
根据Burnet的抗体选择学说，一个B淋巴细胞只能产生一种针对它能够识别的特异性抗原决定簇的抗体。从一个祖先B细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系称为克隆。来自克隆系的细胞基因是完全相同的，产生的抗体也完全相同。这种从一株克隆系产生的性质相同的均一抗体称为单克隆抗体。但这种具有分泌功能的B淋巴细胞难以在
体细胞融合实验——悬浮培养细胞的融合
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG1000仪器、耗材离心管实验步骤1. 从无血清培养基中沉淀杂交前体细胞。2. 倒尽上清。3. 用手指弹拨管底或双手搓转离心管，使细胞重新悬浮。4. 加入 1 ml PEG1000，待 2 分钟。5. 加入 5 ml 含 10% FBS 的培养基稀释 PEG。于室温，20
体细胞融合实验——单层培养细胞的融合
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG-1000仪器、耗材培养基实验步骤1. 以适当的培养基培养细胞至接近汇合成片的密度（80% 汇合率）。2. 吸干 60 mm 规格平皿或 T-25 培养瓶中的培养基，加 2 ml 50% PEG-1000，轻轻转动 1 分钟让该粘稠液体覆盖所有细胞。3. 往培养皿或瓶中
体细胞融合实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 PEG-1000仪器、耗材 培养基实验步骤 1. 以适当的培养基培养细胞至接近汇合成片的密度（80% 汇合率）。2. 吸干 60 mm 规格平皿或 T-25 培养瓶中的培养基，加 2 ml 50% PEG-1000，轻轻转动 1 分钟让该粘稠液体覆盖所有细胞。3. 往培养
体细胞融合实验
单层培养细胞的融合 悬浮培养细胞的融合 实验材料 细胞 试剂、试
体细胞融合实验
单层培养细胞的融合 悬浮培养细胞的融合 实验材料 细胞 试剂、试
GST－融合蛋白沉降实验
实验材料 细胞裂解液 其中蛋白质 35S 用标记 试剂、试剂盒 裂解缓冲液 SDS 聚丙烯酰胺凝胶
GST－融合蛋白沉降实验
实验材料 细胞裂解液其中蛋白质 35S 用标记试剂、试剂盒 裂解缓冲液SDS 聚丙烯酰胺凝胶探针GST 蛋白仪器、耗材 沸水浴翻转祥品旋转仪谷胱甘肽琼脂糖球珠实验步骤 材料缓冲液和溶液将缓冲液稀释到适当浓度。裂解缓冲液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
GST－融合蛋白沉降实验
GST 沉降实验与 far western(方案 2) 相比有—个优点：探针蛋白是在更自然的环境下与可能的搭档蛋白孵育，因而增强了相互作用的有效性。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料细胞裂解液其中蛋白质 35S 用标记试剂、试剂盒裂解
细胞融合实验的实验原理简介
根据Burnet的抗体选择学说，一个B淋巴细胞只能产生一种针对它能够识别的特异性抗原决定簇的抗体。从一个祖先B细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系称为克隆。来自克隆系的细胞基因是完全相同的，产生的抗体也完全相同。这种从一株克隆系产生的性质相同的均一抗体称为单克隆抗体。但这种具有分泌功能的B淋巴细胞难以在
细胞融合实验的实验步骤介绍
1. DMEM或1640基础培养基、PEG溶液置于37℃水浴中预温； 2. 将Balb/c小鼠摘眼球处死后，浸入75%洒精； 3. 无菌取免疫小鼠的脾脏； 4. 脾脏用PBS洗涤后，放入无菌过滤的网筛，再把网筛放在盛有完全培养基的玻璃平皿中用研磨棒（或注射器针管）轻轻研磨或挤压，使其通过网
融合蛋白的酶解实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 SDS仪器、耗材 水浴锅培养箱离心机实验步骤 1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间： （1）反应1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室温下反应（2）反应2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（
基因置换实验——构建融合蛋白
实验材料菌株BY4741质粒PDB118试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液仪器、耗材YPD 平板YPD 液体培养基血球计数板SC-his平板实验步骤YPD 平板 第 1 天将菌株 7-3 在 YPD 平板上划单克隆，30°C 下培养两天。第 3 天挑取单克隆，在 5 mlYPD 液体培养基中培养，30°C 过
动物细胞融合实验
一、实验目的细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。在自然情况下，体内和体外培养的细胞均能发生自发融合现象。人工方法诱导细胞融合开始于50年，现在这项技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫，肿瘤及细胞工程的重要手段。通过实验，了解细胞融合的原理，掌握细胞融合的基本方法。二、实验原理在诱导物
动物细胞融合实验
细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。在自然情况下，体内和体外培养的细胞均能发生自发融合现象。人工方法诱导细胞融合开始于50 年，现在这项技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫，肿瘤及细胞工程的重要手段。在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的细胞发生凝集，随后在质膜接
融合蛋白的酶解实验
基本方案 辅助方案 备选方案1 辅助方案 备选方案2 备选方案3 实验材料 融合蛋白
冷胰蛋白酶解离组织
实验方法原理 剪碎的组织放在胰蛋白酶中于4°C 放置16~18h ，去除胰蛋白酶后温育并于温培养基中分散细胞。实验材料 组织DBSS粗制胰蛋白酶试剂、试剂盒 生长培养基皮氏平皿仪器、耗材 培养瓶镊子移液管锥形瓶剪刀冰浴实验步骤 1. 将组织（1~5 g，预先称重）移入加有新配制的无菌 DBSS 的皮
冷胰蛋白酶解离组织
实验方法原理剪碎的组织放在胰蛋白酶中于4°C 放置16~18h ，去除胰蛋白酶后温育并于温培养基中分散细胞。实验材料组织DBSS粗制胰蛋白酶试剂、试剂盒生长培养基皮氏平皿仪器、耗材培养瓶镊子移液管锥形瓶剪刀冰浴实验步骤1. 将组织（1~5 g，预先称重）移入加有新配制的无菌 DBSS 的皮氏培养皿中
冷胰蛋白酶解离组织
经验交流（0）实验方法原理剪碎的组织放在胰蛋白酶中于4°C 放置16~18h ，去除胰蛋白酶后温育并于温培养基中分散细胞。实验材料组织 DBSS
温胰蛋白酶解离组织
实验方法原理 组织切碎后于胰蛋白酶中搅拌数小时，每隔半小时收集已分离的细胞，离心后加入含血清的培养基。 实验材料 组织 DBSS
温胰蛋白酶解离组织
实验方法原理组织切碎后于胰蛋白酶中搅拌数小时，每隔半小时收集已分离的细胞，离心后加入含血清的培养基。实验材料组织DBSS粗制胰蛋白酶D-PBSA试剂、试剂盒生长培养基皮氏平皿仪器、耗材培养瓶离心管瓶子磁力搅拌机镊子移液管血球计数仪实验步骤1. 将组织（1~5 g）移入加有新配制的无菌 DBSS （5
冷胰蛋白酶解离组织
实验方法原理 剪碎的组织放在胰蛋白酶中于4°C 放置16~18h ，去除胰蛋白酶后温育并于温培养基中分散细胞。 实验材料 组织 DBSS
温胰蛋白酶解离组织
方案12.5 温胰蛋白酶解离组织实验方法原理组织切碎后于胰蛋白酶中搅拌数小时，每隔半小时收集已分离的细胞，离心后加入含血清的培养基。实验材料组织 DBSS
融合蛋白化学降解实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 CNBr甲酸SDS仪器、耗材 离心机分光光度计水浴锅实验步骤 1. 进行预试验以确定最短温育反应时间。冻干两小份50 μl 的融合蛋白溶液，将其中一份重悬于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一份重悬于50 μl 含CNBr 的70%甲酸中，室温下
融合蛋白的酶解实验2
实验材料融合蛋白试剂、试剂盒SDS盐酸胍CaCl2仪器、耗材水浴锅培养箱离心机实验步骤1. 将融合蛋白在≥10倍体积的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 盐酸胍中透析4 h，或将盐酸胍加入融合蛋白中至终浓度为6 mol/l。2. 将样品在100倍体积的20 mmol