免疫球蛋白纯化技术——SepharoseCL4B亲和柱层析纯化IgG
实验方法原理葡萄球菌A蛋白（SPA）具有与多种哺乳动物IgG分子Fc段结合的能力，并与不同IgG亚类的结合力有所差别。利用改变PH及离子强度可洗脱结合于SPA-Sepharose CL-4B柱上的IgG或不同的IgG亚类，可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。实验材料SPA-Sepharose CL-4B试剂、试剂盒磷酸缓冲液NaN3枸椽酸缓冲液Tris溶液再生缓冲液仪器、耗材玻璃柱实验步骤1. 用0.1 M PH8.0 磷酸缓冲液浸泡SPA-Sepharose CL-4B凝胶，15 min。按1 g干胶200 ml上述缓冲液充分洗涤凝胶（用玻璃漏斗过滤或置烧杯中洗涤）2. 装柱后用0.1 M PH8.0磷酸缓冲液平衡 3. 标本可用硫酸铵粗提物，先10000 g离心除去杂质，必要时用0.22 μm滤膜过滤。上样前用1 M PH9.0 Tris液调整标本液PH至8.1或对......阅读全文
钙调蛋白的苯基Sepharose－层析实验
试剂、试剂盒 含钙调蛋白的组分CaCl2(固体)碳酸氢铵缓冲液 E缓冲液 F仪器、耗材 透析袋苯基-Sepharose*4B 填料玻璃层析柱 蠕动泵紫外线检测器、分部收集器和硼硅玻璃试管冻干机 冷冻干燥器实验步骤 材料与设备含钙调蛋白的组分，从 DEAE 柱收集后合并所得（见实验 4)透析袋（标称截
钙调蛋白的苯基Sepharose－层析实验
钙调蛋白的苯基-Sepharose 层析实验 试剂、试剂盒 含钙调蛋白的组分 CaCl2(固体)
钙调蛋白的苯基Sepharose－层析实验
试剂、试剂盒含钙调蛋白的组分CaCl2(固体)碳酸氢铵缓冲液 E缓冲液 F仪器、耗材透析袋苯基-Sepharose*4B 填料玻璃层析柱蠕动泵紫外线检测器、分部收集器和硼硅玻璃试管冻干机 冷冻干燥器实验步骤材料与设备含钙调蛋白的组分，从 DEAE 柱收集后合并所得（见实验 4)透析袋（标称截留分子量
肝素Sepharose－CL2B－的制备实验
试剂、试剂盒SepharoseCL-2B乙腈溴化氰甘氨酸NaOH肝素Na2CO3NaHCO3盐酸乙醇胺NaAcNaCl尿素NaCl3Tris-HClEDTA叠氮钠实验步骤材料SepharoseCL-2B(PharmaciaBiotech,Inc.)乙腈溴化氰（CNBr)(AldrichChemica
肝素Sepharose－CL2B－的制备实验
试剂、试剂盒 SepharoseCL-2B乙腈溴化氰甘氨酸NaOH肝素Na2CO3NaHCO3盐酸乙醇胺NaAcNaCl 尿素NaCl3Tris-HClEDTA叠氮钠实验步骤 材料SepharoseCL-2B(PharmaciaBiotech,Inc.)乙腈溴化氰（CNBr)(AldrichChem
免疫沉淀实验——制备抗体Sepharose－偶联物
实验材料蛋白质试剂、试剂盒NaClNa2CO3乙腈溴化腈甘氨酸仪器、耗材透析管滤纸实验步骤1. 1 ~30 mg/ml 的抗体在 4℃对 0.1 mol/l NaHCO3 / 0.5 mol/l NaCl透析 24 h，期间换液3次。透析液的体积应500倍于抗体溶液。2. 于4℃10 000 g
肝素Sepharose－CL2B－的制备实验
肝素-Sepharose CL-2B 的制备实验 试剂、试剂盒 SepharoseCL-2B 乙腈
抗体纯化：SPAsepharose－cl4b－亲合层析法
一、原理葡萄球菌a蛋白（SPA）具有与多种哺乳动物IgG分子fc段结合的能力，并与不同IgG亚类的结合力有所差别。改变pH及离子强度可洗脱结合于SPA-sepHarose cl-4b 柱上的IgG或不同的IgG亚类，可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。二、试剂器材1、spa-sepharose
抗体纯化：SPAsepharose－cl4b亲合层析法
一、原理 葡萄球菌a蛋白（SPA）具有与多种哺乳动物IgG分子fc段结合的能力，并与不同IgG亚类的结合力有所差别。改变pH及离子强度可洗脱结合于 SPA-sepHarose cl-4b 柱上的IgG或不同的IgG亚类，可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。 二、试剂器材 1、spa-sephar
用亚氨基二乙酸（铁螯合）Sepharose6B－分离磷酸肽实验
在进行蛋白质（phosphorylated protein) 的结构与功能分析时，接蛋白质水解后即能将磷酸肽与未修饰的（未磷酸化的）肽分开是很有助益的。可利用的最有效的方法之一是使用载有铁 (正铁离子）的金属螯合填料。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。暂未评分点评实验，有机会获丁当
用亚氨基二乙酸（铁螯合）Sepharose6B－分离磷酸肽实验
用亚氨基二乙酸（铁螯合）Sepharose6B 分离磷酸肽实验 试剂、试剂盒 EDTA 乙酸铵
免疫球蛋白纯化技术——Sepharose－CL4B亲和柱层析纯化IgG
实验方法原理葡萄球菌A蛋白（SPA）具有与多种哺乳动物IgG分子Fc段结合的能力，并与不同IgG亚类的结合力有所差别。利用改变PH及离子强度可洗脱结合于SPA-Sepharose CL-4B柱上的IgG或不同的IgG亚类，可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。实验材料SPA-Sepharose C
GST融合蛋白纯化——筛选表达株
Purification of GST fusion proteins in E.coli GSTSugden lab,McArdle Laboratory for Cancer Research ,University of Wisconsin-Madison Medical SchoolScre
层析法常用数据表及性质(4)
（五）离子交换层析介质的技术数据 离子交换介质名称 最高载量 颗粒
免疫沉淀实验
基本方案 制备抗体Sepharose 偶联物 抗Ig血清免疫沉淀放射性标记抗原 免疫沉淀放射性标记抗原 实验材料
SPA提取IgG原理和操作方法
(一) 原理将SPA偶联至Sepharose-4B上后，利用亲和层析来提取人和某些动物的IgG，这样可以省去制备第二抗体。该法特别适用于单克隆抗体的研究。该法提取IgG与利用IgG纯化SPA原理是一致的。(二) 材料与试剂1．Sepharose－4B 琼脂糖2．SPA3．溴化氰4．0.10Mol/L
如何选择凝胶？（一）
生物分子下游纯化的对象一般包括蛋白、酶、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、核酸等。纯化前首先需要测定生物分子的各物理和化学特性，然后通过实验选择出最有效的纯化流程。测定------分子量、PI 当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围
Bacterial－Expression－of－IRS1－containing－GSTfusion－Proteins
1. Grow cells in 5ml (or more) of LB-Amp overnight for a starter culture. 2. Grow larger culture using the overnight culture as a seeding culture.
DNA－亲和介质的制备实验（二）
寡核苷酸的连接1) 取 10ul 10X 接头-激酶缓冲液加入 65ul 水中，将 DNA 震荡溶解于此溶液。2) 加 20ul 20 mmol/L ATP(pH7.0) 及 5ulT4 DNA 连接酶（30Weiss 单位)，得最终反应体积为 100ul。3) 在室温下孵育≥2 h。若 AP-1
单克隆抗体的纯化实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris腹水液宁酸盐缓冲液甘氨酸乙酸盐缓冲液仪器、耗材超滤器滤膜实验步骤1. 将10 ml 经CNBr活化Sepharose 4B溶胀于1 mmol/l HCl中，然后转移至玻璃沙漏斗中，并用：①200~500 的1 mmol/l HCl和②200~500 ml 偶联缓冲
免疫沉淀实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 裂解缓冲液稀释缓冲液SDSTrisTSA仪器、耗材 转子离心机实验步骤 1. 表面标记或生物合成标记的细胞在裂解缓冲液中于4℃放置1 h 后，再于4℃3 000 g 离心10 min 除去细胞核，然后将所得上清在10000 g 离心1 min。 2. 一次性对上清进
DNA偶联于溴化氰活化的琼脂糖上
试剂、试剂盒盐酸用前新鲜配制溴化氰活化 Sepharose 4B (Pharmacia Biotech)实验步骤1) 制备标记的被连接的寡核苷酸探针2) 称出3 g溴化氰活化的Sepharose 4B (1 g冻干树脂可得到终体积约3. 5 mL的凝胶体积)。3) 将干树脂置于一个15 mL的锥形聚
纯化凝胶选择的具体方法(1)
生物分子下游纯化的对象一般包括蛋白、酶、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、核酸等。纯化前首先需要测定生物分子的各物理和化学特性，然后通过实验选择出最有效的纯化流程。1.测定——分子量、PI当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Su
DNA－亲和介质的制备实验
DNA 亲和介质的制备实验 试剂、试剂盒 ATP [y-32P]ATP T4多核苷酸激酶
DNA－亲和介质的制备实验
试剂、试剂盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶缓冲液乙醇胺-
纯化凝胶选择的具体方法(3)
15.脱盐、小分子去除使用凝胶过滤介质Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，处理量可达床体积30%。只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液，就可以去除该填料分离范围上限以下的小分子，简单直接。由于只是去除小分子，柱高10cm以上即可。整个过程一般可于数分钟
亲和层析凝胶指南
GE HealthcareBenzamidine Sepharose™ 6B is p-aminobenzamidine covalentlyattached to Sepharose 6B by the epoxy coupling method.p-Aminobenzamidine (PAB),
免疫沉淀实验——基本方案
经典的免疫沉淀是可溶性抗原与其抗体产生可见沉淀反应的血清学试验。后来发展为抗原抗体结合后，用固相化的蛋白A或蛋白G小珠等来吸附分离抗原抗体复合体，达到检测微量抗原或抗体的目的。实验材料蛋白质试剂、试剂盒裂解缓冲液稀释缓冲液SDSTrisTSA仪器、耗材转子离心机实验步骤1. 表面标记或生物合成标记
方案11－利用脱水胰酶亲和捕获蛋白质实验
试剂、试剂盒乙酸牛胰酶CaCl2溴化氰活化的 Sepharose 4BHClKOHNaHCO3NaOHPMSFPBS硫酸鲑精蛋白乙酸钠三氟乙酸Tris-Cl仪器、耗材透析膜烧结的玻璃漏斗水浴锅实验步骤一、ST-Sepharose 亲和树脂的制备二、脱水胰酶的制备三、脱水胰酶亲和柱的制备四、样品制备、
离子交换色谱（一）
实验方法原理 离子交换色谱是将离子交换基因（CM、SP、Q、DEAE等）键合于一定的惰性载体（纤维素、交联葡聚糖，交联琼脂糖等）之上，并以此作为固定相，依据样品所带电荷的不同，从而与固定相上的离子交换基团相互作用的程度不同而进行分离的一种色谱方法。离子交换色谱技术已广泛用于蛋白质、多肽、寡核苷酸、病