调亡细胞的TUNEL的流式细胞仪分析过程

相关专题实验室的CT-流式细胞仪调亡细胞的TUNEL的流式细胞仪 分析过程为:1.离心收集细胞,PBS 洗1~2次。2.1%多聚甲醛低温下固定15min。3.3ml PBS 洗1次,70%乙醇固定,冰箱内放置1~3天。4.PBS 轻洗1次。5.细胞与TdT标记液37℃孵育,时间1~2h。6.PBS 轻洗1次。7.细胞在黑暗中37℃与100μl的染色缓冲液孵育30min。8.含0.1%Triton-X 100的PBS轻洗1次。9.1ml PBS(含5mg/ml PI,0.1% RNase A)重悬。10. 流式细胞仪分析红色(PI)对绿色荧光(FITC)的地形图。......阅读全文

TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的

TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的(1)石蜡包埋的组织切片预处理:将组织切片置于染色缸中,用二甲苯洗两次,每次5min.用无水乙醇洗两次,每次3min.用95%和75%乙醇各洗一次,每次3min.用PBS洗5min 加入蛋白酶K溶液(20ug/ml),于室温水解15min,去除组织蛋白.用蒸馏水洗4

TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的

TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的(1)石蜡包埋的组织切片预处理:将组织切片置于染色缸中,用二甲苯洗两次,每次5min.用无水乙醇洗两次,每次3min.用95%和75%乙醇各洗一次,每次3min.用PBS洗5min 加入蛋白酶K溶液(20ug/ml),于室温水解15min,去除组织蛋白.用蒸馏水洗4

流式检测细胞周期

线粒体膜电位(MMP):使用几种染料中的其中一种就可以检测到细胞在凋亡过程中MMP的降低,如双氰基-双己氧基羰基靛蓝,它能够隐藏在活细胞的线粒体内。当MMP体系崩溃时,细胞的荧光就会减少。磷脂酰丝氨酸(PS)在细胞表面的分布情况:PS一般分布在质膜的内侧上。在细胞凋亡过程中,PS残余物会曝露在细胞表

流式细胞仪的原理和操作过程

  原理:  流式细胞仪可同时进行多参数测量,信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的,所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时,受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线,散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分

流式细胞仪的原理和操作过程

  原理:  流式细胞仪可同时进行多参数测量,信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的,所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时,受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线,散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分

LN229人胶质瘤细胞凋亡和细胞焦亡的比较

细胞凋亡和细胞焦亡的比较1、概念(1)细胞焦亡(Pyroptosis)细胞焦亡是一种炎症程序性细胞死亡,由各种病理刺激引发,如中风、心脏病发作、癌症、微生物感染等。其它已知类型的程序性细胞死亡包括凋亡和坏死。    研究发现,细胞焦亡依赖于caspase-1,这从根本上将细胞焦亡与其它细胞死亡途径区

细胞凋亡检测实验——TUNEL法

实验方法原理脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端,与dATP形成异多聚体,并可与连接了报告酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)的抗地高辛抗体结合。在适合底物存在下,过氧化物酶可产生很强的颜色反应,特异准确

流式细胞仪定量分析细胞凋亡

流式细胞仪定量分析,细胞凋亡检测原理细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。流式细胞仪定量分析细胞凋亡,应用价值流式细胞仪检测具有以下特点:1)

流式细胞仪定量分析细胞凋亡

流式细胞仪定量分析,细胞凋亡检测原理细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。流式细胞仪定量分析细胞凋亡,应用价值流式细胞仪检测具有以下特点:1)

细胞凋亡与细胞焦亡区别在哪?

1、概念(1)细胞焦亡(Pyroptosis)细胞焦亡是一种炎症程序性细胞死亡,由各种病理刺激引发,如中风、心脏病发作、癌症、微生物感染等。其它已知类型的程序性细胞死亡包括凋亡和坏死。研究发现,细胞焦亡依赖于caspase-1,这从根本上将细胞焦亡与其它细胞死亡途径区分开来。由于caspase-1是

关于流式细胞仪的数据-分析介绍

  数据分析的方法总的可分为参数方法和非参数方法两大类。当被检测的生物学系统能够用某种数学模型技术时则多使用参数方法。数学模型可以是一个方程或方程组,方程的参数产生所需要的信息来自所测的数据。例如在测定老鼠精子的DNA含量时,可以获取细胞频数的尖锐波形分布。如果采用正态分布函数来描述这些数据,则参数

流式细胞仪的分析及分选原理

流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和数字信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成。在对细胞悬液中的单个细胞或其超微结构进行多参数快速自动分析过程中,每秒钟能测量数千个至数万个细胞,能在分析过程中按实验设计要求对特定细胞进行分析,带细胞分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征

如何计数TUNEL切片上的总细胞数

你是计算凋亡细胞总数还是所有肿瘤细胞总数?还是你的检测方法 荧光显微镜检测还是流式细胞仪?检测的是HE切片上 还是细胞爬片 还是细胞悬浮液?细胞悬浮液通常用流式,其他的都可直接镜检。按理论讲,显微镜数荧光点就是你所需要的凋亡细胞数了,但细胞总数的话可以再荧光淬灭后做HE染色,然后利用计算灰度的方法让

hoechst-和tunel法检测细胞凋亡的区别

hoechst法看凋亡,主要是看sub-G1期的细胞数量。原理就是凋亡的细胞,由于DNA正在降解,所以含量比正常细胞要少。在以PI荧光强度(代表DNA量)为横坐标的柱状图上,一般会有2个峰,G1和G2,G1就是正常细胞,G2是正在分裂的2倍体。2者间是S期细胞。如果有凋亡的细胞,在G1前会有细胞出现

邵峰系统介绍细胞焦亡的分子机制

  gasdermins是最近发现的致孔蛋白效应蛋白家族,可引起膜通透性和细胞凋亡,这是一种裂解性促炎性细胞死亡。 gasdermins含有通过柔性接头连接的细胞毒性N末端结构域和C末端阻遏物结构域。 这两个结构域之间的蛋白水解切割释放了对细胞毒性结构域的分子内抑制作用,使其能够插入细胞膜并形成大的

细胞周期的过程分析

  间期  间期又分为三期、即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。  1.G1期(first gap)  从有丝分裂到DNA复制前的一段时期,又称合成前期,此期主要合成RNA和核糖体。该期特点是物质代谢活跃,迅速合成RNA和蛋白质,细胞体积显著增大。这一期的主要

流式细胞仪细胞周期结果分析

第一张是未转染的第12代,第二章是转染后的第22代。第一张图:增值率S(合成期)+G2/M(合成后期/分裂期 ):21.7%第二张图:增值率S(合成期)+G2/M(合成后期/分裂期):19.6%据此分析两者的增值没有明显的差别。虽然第二张图比第一张图的S期有所增高,但G2期下降了。细胞周期 是基于细

关于TUNEL检测的常见问题分析介绍

  一、出现非特异性荧光标记  a. 有些细胞或组织,例如平滑肌细胞或组织,nuclease或polymerase的酶活性水平较高,易导致出现非特异性的荧光标记。解决方法是,取细胞或组织后立即固定并且要充分固定,以阻止这些酶导致假阳性。  b. 使用了不适当的固定液,例如一些酸性固定液,导致出现假阳

流式细胞仪血小板分析

 流式细胞仪血小板分析应用范围通过分析信号传递、细胞骨架结构、颗粒释放、糖蛋白构形、膜磷脂、与抗凝因子的结合和微粒形成,分析血小板活化,血小板对刺激物的反应性通过分析受激后表面结合蛋白触发凝血链式反应和表面糖蛋白缺陷检测,分析血小板止血功能的获得性和遗传性缺陷结合血小板大小,检测血小板RNA含量,分

流式细胞仪血小板分析

流式细胞仪血小板分析流式细胞仪血小板分析应用范围 通过分析信号传递、细胞骨架结构、颗粒释放、糖蛋白构形、膜磷脂、与抗凝因子的结合和微粒形成,分析血小板活化,血小板对刺激物的反应性 通过分析受激后表面结合蛋白触发凝血链式反应和表面糖蛋白缺陷检测,分析血小板止血功能的获得性和遗传性缺陷 结合血小板大小,

流式细胞仪血小板分析

一、流式细胞仪血小板分析应用范围1、通过分析信号传递、细胞骨架结构、颗粒释放、糖蛋白构形、膜磷脂、与抗凝因子的结合和微粒形成,分析血小板活化,血小板对刺激物的反应性。2、通过分析受激后表面结合蛋白触发凝血链式反应和表面糖蛋白缺陷检测,分析血小板止血功能的获得性和遗传性缺陷。3、结合血小板大小,检测血

罗氏TUNEL细胞凋亡检测程序

一、 原理:TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素(fluorescein)标记的 dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,

TUNEL检测的原理

细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transfera

应用过程中流式细胞仪的数据显示方式

  数据显示:FCM的数据显示方式包括单参数直方图、二维点图、二维等高图、假三维图和列表模式等。  直方图是一维数据用作最多的图形显示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析,形同一般X—Y平面 描图仪给出的 曲线。根据选择放大器类型不同,坐标可以是 线性标度或对数标度,用“道数”来表示,实质上是所

流式细胞仪操作过程样本的质量控制

  用于流式分析的样本种类很多,包括外周血、骨髓穿刺液、骨髓活检物、组织活检物、浆膜腔积液、脑脊液、皮肤、黏膜(内窥镜活检物)、细针穿刺物等等。样本的条件控制可能是免疫表型分析质控最困难的环节之一。每种样本都有不同的采集、保存、运输和制备要求。首先,观测样本外观:有严重溶血、凝聚或坏死的样本应弃用。

细胞凋亡的检测方法

(一)   测原理细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。(二)   用价值流式细胞仪检测有下列特点:(1)检测的细胞数量大,因此其反映群体细胞的凋亡

三种流式方法检测细胞凋亡

一、检测原理细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。流式细胞仪检测有下列特点1、检测的细胞数量大,因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确2、可用许多相关

细胞凋亡的三种流式检测方法

一、检测原理细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。流式细胞仪检测有下列特点:1、检测的细胞数量大,因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确2、可用许多相

细胞凋亡的检测方法

(一) 测原理细胞发生凋亡时,其细胞膜 的通透性也增加,但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。(二) 用价值流式细胞仪检测有下列特点:(1)检测的细胞数量大,因此其反映群体细胞的凋亡状态比

Caspase活化、核染色质固缩及DNA片段化

Life Technologies提供了用于细胞功能和健康检测的各种试剂。其中许多分析以荧光或比色法为基础,具有灵敏性、便利性和安全性。这些产品已经过多种仪器平台验证,包括显微镜、流式细胞仪、酶标仪和高内涵筛选,能够实现各种细胞功能的分析:细胞活性和细胞毒性细胞增殖和细胞周期细胞凋亡自噬氧化应激内吞