RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends，RACE）是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法，以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。经典的RACE技术是由Frohman等（1988）发明的一项技术，主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5'和3'端，包括单边PCR和锚定PCR。该技术提出以来经过不断发展和完善，克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点（Frohman等，1995：Schaefer，l995： Chen，1998： Bespalo......阅读全文
帽子转换－RACE－实验
试剂、试剂盒 寡核苷酸引物 cDNA 文库 HerculesHot-Start 聚合酶 HerculesHot-Start 聚合酶缓冲液 dNTP 溶液
帽子转换－RACE－实验
这里介绍的方法，是用一个生物素化的引物来帮助纯化第一链产物。这些纯化技术是可以互换的。与之类似，使用这里所介绍的基于寡核苷酸-(dT) 的引物，在反转录的起始阶段使用的基因特异性引物（如上所述）也是可以互换的。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒寡核苷酸引物cD
3’RACE－实验心得
引子：从06年12月份开始，断断续续做了一个多月的3’RACE，有了一些心得和体会。期间看了很多前辈们分享的经验，受益匪浅。在这里，我就自己的经历略作总结，希望能给像我一样的新人们有点启示，少走些弯路，不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择：3’RACE从原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所
非标记抗体免疫电镜技术原理、材料和操作方法
（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
防水卷材测厚仪的原理和操作
防水卷材测厚仪专业适用于量程范围内的塑料薄膜、薄片、隔膜、纸张、箔片、硅片等各种材料的厚度测量 防水卷材测厚仪测试原理： 将预先处理好的薄型试样的一面置于下测量面上，与下测量面平行且中心对齐的上测量面，以一定的压力，落到薄型试样的另一面上，同测量头一体的传感器自动检测出上下测量面之间的距离，即为薄型
脱色摇床的原理和操作使用
脱色摇床是一种作振荡振动的实验室设备，广泛应用于电泳凝胶分离谱带的固定，考马斯亮蓝染色和脱色时的振荡晃动，硝酸银染色的固定、染色、显影等，放射自显影实验中X光底片的显影、定影，电泳转移后纤维素膜的进一步处理，抗原体的反应和染色，分子杂交，细胞培养等。 脱色摇床的原理： 脱色摇床主要是指跑电泳时染色、
脱色摇床的原理和操作使用
脱色摇床是一种作振荡振动的实验室设备，广泛应用于电泳凝胶分离谱带的固定，考马斯亮蓝染色和脱色时的振荡晃动，硝酸银染色的固定、染色、显影等，放射自显影实验中X光底片的显影、定影，电泳转移后纤维素膜的进一步处理，抗原体的反应和染色，分子杂交，细胞培养等。 脱色摇床的原理： 脱色摇床主要是指跑电泳时染色、
固相萃取的原理和操作
固相萃取仪就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。 与液-液萃取相比固相萃取有很多优点：固相萃取不需要大量互不相溶的溶剂，处理过程中不会产生乳化现象，它采用高效﹑高选择性的吸附剂(固定相)，能显著
间接法的原理和操作步骤
间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：⑴将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。⑵加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体
脑脊液蛋白电泳原理和操作
、原理 与血清蛋白电泳相同，利用各种蛋白质在电场作用下迁移率不同来进行检测。由于CSF蛋白质含量较低，电泳前须进行浓缩处理。一般采用透析法浓缩，将CSF加入透析袋内，置于吸水的透析液中，CSF中的水分移至透析液内，CSF的蛋白质浓度增加后，再进行电泳分析。 2、试剂与器材 （1）器材透析膜可商品化购
Southern杂交分析原理和操作
【原理】Southern杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。一．基因组DNA的限制
铁蛋白免疫电镜技术原理、材料试剂和操作方法
（一） 原理免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。（二）材料与试剂1．马脾铁蛋白2．硫酸铵3．硫酸镉4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante ，XC)以0.30mol/L pH9.5硼酸盐缓冲液
荧光抗体技术的原理和技术特点
荧光抗体技术，用荧光物标记抗体来检测细胞或组织中相应抗原或抗体的技术。荧光物种类一般有异硫氰酸荧光素、罗丹明荧光素、二氯三嗪基氨基荧光素等。一般是将待测标本固定于玻片表面，滴加已知荧光抗体后再以缓冲液冲洗，干燥后于荧光显微镜下观察阳性是可见带荧光的抗原抗体复合物; 阴性无荧光(因为带荧光的抗体不能与
低温培养箱的原理和操作
低温培养箱 制冷工作原理：制冷循环采用逆卡若循环，该循环出两个等温过程和两个绝热过程组成，其过程如下：制冷剂经压缩机绝热压缩到较高的压力，消耗了的功使排气温度升高，之后制冷剂经冷凝器等温地和四周介质进行热交换将热量传给四周介质。后制冷剂经截流阀绝热膨胀做功，这时制冷剂温度降低。最后制冷剂通过蒸发器等
湿膜轮的原理和操作介绍
湿膜概述 涂层厚度是涂装施工需要控制的一项重要指标，涂层厚度控制得是否合理，将直接影响涂层的其他性能。 在涂层的防蚀机理中，其屏蔽作用是主要因素，而涂层的屏蔽作用是与涂层厚度密切相关的。 此外，在对各涂料产品的性能比较方面也只有在相同的涂层厚度下才具有可比性；
熔点仪的工作原理和操作步骤
工作原理 熔点仪是按照药典规定的熔点检测方法而设计的，该仪器利用电子技术实现温度程控，初熔和终熔数字显示。应用了线性校正的铂电阻作检测元件，并用电子线路实现了快速“起始温度”设定及四档可供选择的线性的升温速率。仪器采用药典规定的毛细管作为样品管，通过高倍率的放大镜观察毛细管内样品的熔化过程，清
熔点仪的工作原理和操作步骤
工作原理 熔点仪是按照药典规定的熔点检测方法而设计的，该仪器利用电子技术实现温度程控，初熔和终熔数字显示。应用了线性校正的铂电阻作检测元件，并用电子线路实现了快速“起始温度”设定及四档可供选择的线性的升温速率。仪器采用药典规定的毛细管作为样品管，通过高倍率的放大镜观察毛细管内样品的熔化
HAAKE流变仪的特点和操作原理
HAAKE流变仪是一种多功能的测试仪器，是研究材料的流动、塑化、热稳定、剪切稳定的理想设备，仪器运行时，连续测量并记录转矩、温度、压力与时间关系，描绘流变曲线，并通过数据计算得到剪切、黏度、稳定性等一系列流变关系。也可以把HAAKE流变仪看成是在将生产工艺装备（机器）小型微型化后，在各监测点安装
HAAKE流变仪的特点和操作原理
HAAKE流变仪是一种多功能的测试仪器，是研究材料的流动、塑化、热稳定、剪切稳定的理想设备，仪器运行时，连续测量并记录转矩、温度、压力与时间关系，描绘流变曲线，并通过数据计算得到剪切、黏度、稳定性等一系列流变关系。也可以把HAAKE流变仪看成是在将生产工艺装备（机器）小型微型化后，在各监测点安装
熔点仪的工作原理和操作步骤
工作原理 熔点仪是按照药典规定的熔点检测方法而设计的，该仪器利用电子技术实现温度程控，初熔和终熔数字显示。应用了线性校正的铂电阻作检测元件，并用电子线路实现了快速“起始温度”设定及四档可供选择的线性的升温速率。仪器采用药典规定的毛细管作为样品管，通过高倍率的放大镜观察毛细管内样品的熔化
HAAKE流变仪的特点和操作原理
HAAKE流变仪是一种多功能的测试仪器，是研究材料的流动、塑化、热稳定、剪切稳定的理想设备，仪器运行时，连续测量并记录转矩、温度、压力与时间关系，描绘流变曲线，并通过数据计算得到剪切、黏度、稳定性等一系列流变关系。也可以把HAAKE流变仪看成是在将生产工艺装备（机器）小型微型化后，在各监测点安装
cDNA的合成实验原理和操作步骤
一、实验目的掌握植物cDNA合成的原理和方法二、实验原理反转录酶主要用于体外cDNA的合成。目前最常用的反转录酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它们具有依赖于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性，可以以RNA分子
分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺
分子标记—AFLP原理和操作步骤
AFLP可用于：（1）构建遗传连锁图谱；（2）利用AFLP快速鉴别与目的基因紧密连锁的分子标记；（3）AFLP辅助的轮回选择育种；（4）研究基因表达与调控；（5）分类和进化研究；（6）甲基化研究等。实验方法原理AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行
细菌转化（bacterial－transformation）原理和操作
1．目的学会质粒DNA转化感受态受体菌的技术。2．原理质粒DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA。然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微
分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺
分子标记—AFLP原理和操作步骤
实验方法原理 AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后
化学吸附仪工作原理和操作
一、化学吸附仪的基本功能 化学吸附仪具有多种表征功能，能够对新鲜催化剂进行程序升温脱附(TPD)、程序升温还原（TPR)、程序升温表面反应（TPSR)等研究，也可对失活催化剂、干燥催化剂进行程序升温氧化（TPO）研究。利用化学吸附仪中的脉冲吸附技术还可对催化剂的酸性、表面金属分散度、金属与载体
气象色谱内标法原理和操作
转载：《分析测试百科网》内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样
生物芯片的技术原理和技术流派
生物芯片（biochip或bioarray）是根据生物分子间特异相互作用的原理，将生化分析过程集成于芯片表面，从而实现对DNA、RNA、多肽、蛋白质以及其他生物成分的高通量快速检测。狭义的生物芯片概念是指通过不同方法将生物分子（寡核苷酸、cDNA、genomic DNA、多肽、抗体、抗原等）固着于硅