单分子技术解析促凋亡蛋白tBid引发膜通透的动力学过程
10月9日，国际学术期刊Nano Letters 发表了中国科学院生物物理研究所卫涛涛课题组与中国科学院物理研究所李明课题组题为Detection of tBid Oligomerization and Membrane Permeabilization by Graphene-Based Single-Molecule Surface-Induced Fluorescence Attenuation 的合作研究论文。文中通过应用新的单分子研究技术——基于纳米材料氧化型石墨烯表面诱导荧光衰逝的单分子荧光技术（single-molecule surface-induced fluorescence attenuation，smSIFA），解析了Bcl-2家族蛋白tBid与模型膜的相互作用，并揭示了tBid在膜表面通过同源寡聚化形成类孔道结构的动力学过程。 细胞凋亡是一种由多基因调控、在进化上保守的程序性死亡过程，是维持多细胞......阅读全文
单分子技术解析促凋亡蛋白tBid引发膜通透的动力学过程
10月9日，国际学术期刊Nano Letters 发表了中国科学院生物物理研究所卫涛涛课题组与中国科学院物理研究所李明课题组题为Detection of tBid Oligomerization and Membrane Permeabilization by Graphene-Based Si
单分子技术解析促凋亡蛋白tBid引发膜通透的动力学过程
10月9日，国际学术期刊Nano Letters 发表了中国科学院生物物理研究所卫涛涛课题组与中国科学院物理研究所李明课题组题为Detection of tBid Oligomerization and Membrane Permeabilization by Graphene-Based Si
单分子荧光检测
单分子检测被称为分析化学的极限，近年来取得了重要进展。其中，单分子荧光分析是实现单分子检测最灵敏的光分析技术。单分子荧光检测的关键在于确保被照射的体积中只有一个分子与激光发生作用以及消除杂质荧光的背景干扰。通常采用高效滤光片，利用共焦、近场合消失波激发，可以达到此目的。单分子荧光检测可提供单分子水平
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制
类似解旋酶的蛋白与核酸相互位置的转变具有重要的细胞生物学意义，但是至今科学家们还并不清楚这个过程如何解开DNA结合蛋白，而且这一过程的基本特征迄今为止仍然倍受争议。 DNA修复指双链DNA上的损伤得到修复的现象，这个过程可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能，DNA修复是探索生命的一个重要
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制：类似解旋酶的蛋白与核酸相互位置的转变具有重要的细胞生物学意义，但是至今科学家们还并不清楚这个过程如何解开DNA结合蛋白，而且这一过程的基本特征迄今为止仍然倍受争议。 DNA修复指双链DNA上的损伤得到修复的现象，这个过程可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制
类似解旋酶的蛋白与核酸相互位置的转变具有重要的细胞生物学意义，但是至今科学家们还并不清楚这个过程如何解开DNA结合蛋白，而且这一过程的基本特征迄今为止仍然倍受争议。 DNA修复指双链DNA上的损伤得到修复的现象，这个过程可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能，DNA修复是探索生命的一个
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制
类似解旋酶的蛋白与核酸相互位置的转变具有重要的细胞生物学意义，但是至今科学家们还并不清楚这个过程如何解开DNA结合蛋白，而且这一过程的基本特征迄今为止仍然倍受争议。 DNA修复指双链DNA上的损伤得到修复的现象，这个过程可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能，DNA修复是探索生命的一个
单分子荧光染料——ATTO荧光染料
单分子荧光检测技术是近十年来迅速发展起来的一种超灵敏的检测技术，其检测尺度可以精确到纳米量级，是单分子检测的首选方法。该检测技术利用荧光标记来显示和追踪单个分子的构象变化、动力学、单分子之间的相互作用以及进行单分子操纵。而荧光染料作为重要的标记物在单分子检测中起到了举足轻重的作用。荧光染料，指吸收某
单分子荧光染料——ATTO荧光染料
单分子荧光检测技术是近十年来迅速发展起来的一种超灵敏的检测技术，其检测尺度可以精确到纳米量级，是单分子检测的首选方法。该检测技术利用荧光标记来显示和追踪单个分子的构象变化、动力学、单分子之间的相互作用以及进行单分子操纵。而荧光染料作为重要的标记物在单分子检测中起到了举足轻重的作用。荧光染料，指吸收某
细胞凋亡检测(单染法)
实验概要本实验介绍了细胞凋亡检测(Annexin-V-FITC 单染法)(Assay of Cell Apoptosis)的原理及操作流程。实验原理细胞凋亡或称程序性细胞死亡（Programmed Cell Death，PCD）是细胞的生命现象之一，它在机体的胚胎发育、组织修复及自身反应性T淋巴
单分子荧光检测的介绍
单分子检测是近十年来迅速发展起来的一种超灵敏的检测技术，为分析化学工作者打开了一扇新的大门。单分子检测(SMD)及其分析是一个考察细胞系统内动力学变化以及物质相互作用的精妙方法。现在，人们不仅可以在溶液中对单个分子进行检测和成像，而且可以通过对单分子的光谱性质进行测量，从而对化学反应的途径进行实时监
单分子荧光检测法实现生物膜界面的精密物理测量
膜蛋白在细胞代谢中起着至关重要的作用。研究膜蛋白特定区域在生物膜上的位置，尤其是沿垂直于膜方向的位置及其动态变化，对于理解膜蛋白的功能及相关的分子机制有重要意义。一些传统的生物物理技术如核磁共振(NMR)等可以给出时间和系综平均的数据，但如何实时追踪单个膜蛋白在约4纳米厚的膜内或膜表面几纳米范围
基于量子点的单分子荧光示踪技术揭示分子马达的行走...
基于量子点的单分子荧光示踪技术揭示分子马达的行走机制在生物体内，分子马达参与肌肉收缩、胞质运输、DNA转录以及有丝分裂等一系列重要的生命活动。在执行上述功能过程中，分子马达需要借助ATP水解释放的能量，完成在细胞骨架上的特定运行轨迹。因此，关于分子马达沿着细胞骨架的行走机制的研究，对于深刻认识分子马
关于细胞凋亡的膜受体通路介绍
各种外界因素是细胞凋亡的启动剂，它们可以通过不同的信号传递系统传递凋亡信号，引起细胞凋亡，我们以Fas -FasL为例： Fas是一种跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员，它与FasL结合可以启动凋亡信号的转导引起细胞凋亡。它的活化包括一系列步骤：首先配体诱导受体三聚体化，然后在细胞膜上形
荧光染色观察药物诱导细胞凋亡
【原理】 Hoechst 33258 为特异性 DNA 染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或经 70% 冷乙醇固定的细胞可立即染色。而活细胞的着色是渐进性的，在 10min 内可达饱和。在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状
细胞凋亡检测操作流程三JC1检测凋亡细胞线粒体膜电...
细胞凋亡检测操作流程三--JC-1检测凋亡细胞线粒体膜电位改变凋亡检测操作流程 三、JC-1检测凋亡细胞线粒体膜电位改变BD™ MitoScreen (JC-1)线粒体膜电位检测试剂盒（551302）：组分描述JC-1(染料)4瓶，每瓶用于25个样本。冻干粉，使用前稀释至储存液（Stock Sol
细胞凋亡晚期检测技术
晚期检测： 细胞凋亡晚期中，核酸内切酶（某些Caspase的底物）在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180-200 bp 。对于这一现象的检测通常有以下两种方法： 1.TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d
单分子荧光成像概述：TIRF和FRET
经典的生物研究技术侧重于分子和细胞集群的研究——即研究含有大量相同形态或功能的分子或细胞的活动。但是，这种方法会忽略集群中的单个分子或子群的特异性。事实上在细胞周期的不同阶段或在不同的环境中，单个分子或细胞的活动很可能与集群表现出的整体活动不同。要对单个分子或亚群的活动进行观察，必须严格控制实验条件
细胞凋亡检测实验——线粒体膜势能的检测
实验方法原理线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA 断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt 崩溃，则细胞凋亡不可逆转。 线粒体跨膜电位的存在，使
荧光光谱仪单分子荧光检测方法分析
单分子荧光检测。单分子荧光分析是实现单分子检测最灵敏的光分析技术。单分子荧光检测的关键在于确保被照射的体积中只有一个分子与激光发生作用以及消除杂质荧光的背景干扰。单分子荧光检测可提供单分子水平上生物分子反应的动力学信息，分子构象以及构象随时间的变化，因此尤其在生命科学领域中具有广阔的应用前景，为
staurosporine诱导小鼠心肌细胞凋亡模型构建
原代心肌细胞的培养及实验方案取出生后0~24 h C57BL/6cr小鼠心脏，按改良的Lader方法进行细胞的分离。 获取博动的心脏迅速放置于无Ca2+、Mg2+的Hank’s平衡液中。剪碎心脏，放置在4℃条件下100 g/L的Trypsin溶液中消化16~18 h，用Trypsin抑制剂中止消化。
关于细胞凋亡的抑制分子的介绍
迄今为止，人类已发现多种凋亡抑制分子，包括P53，CrmA,IAPs，FLIPs以及Bcl-2家族的凋亡抑制分子。 1)P35和CrmA是广谱凋亡抑制剂，体外研究结果表明P35以竞争性结合方式与靶分子形成稳定的具有空间位阻效应的复合体并且抑制Caspases活性，同时P53在位点DMQD！G被
什么是生物单分子技术
单分子技术是可孤立或用于实验或分析研究某一个分子。单分子研究，对比测量一个整体或大量分子，其中个体行为无法区分收集测量对比，只有一般特征才可以衡量。虽然大多数测量技术在观察单分子还不够灵敏，单分子荧光已成为一种探测尚不能充分理解的位于大量分子层面上，如肌球蛋白在肌肉组织或肌动蛋白丝运动，还有个体位于
用荧光激活的细胞分类仪检测凋亡细胞
1）原位缺口翻译检测裂解的DNA片段：1、取106经促调亡物质处理的细胞，用1％ BSA-PBS洗涤细胞后加入0.1ml FITC标记的抗CD4或抗CD8单克隆抗体，4℃ 20分钟。用1％ BSA-PBS洗涤细胞。置冰上。2、加入0.1ml 1％多聚甲醛，置冰上5分钟，加入60％（v/v）甲醇溶液，
生物膜的分子结构模型的介绍
生物膜的主要化学成分是脂类和蛋白质，还有少量糖类。关于这些组分在膜中是如何排列和组织的、以及它们之间是如何相互作用的等问题，许多学者进行了多方面的研究，先后提出了数十种不同的生物膜分子结构模型，下面介绍公认的流动镶嵌模型。 这一模型是Singer和Nicolson在1972年提出的。流动镶嵌模
细胞凋亡检测技术与方法
细胞凋亡（Apoptosis），又称细胞程序性死亡（PCD: Programmed Cell Death），是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的，高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。细胞凋亡概念提出至今还不到30年的时间，但由于它在保证多
细胞凋亡及其检测技术3
2、RT-PCR法检测细胞bcl-2 mRNA的表达：（1）总RNA提取：为了获得高质量的真核细胞mRNA，必须使用RNA酶抑制剂。操作过程中应避免RNA酶污染器材和试剂，因此所有剥离、塑料器材先用0.1%DEPC水溶液浸泡12h，然后用无菌的新鲜蒸馏水淋洗数次，塑料器材应采用高压蒸汽灭菌。玻璃器材
细胞凋亡及其检测技术1
细胞凋亡又称程序性细胞死亡（PCD）,是细胞衰老自然死亡的主要方式之一，在机体中承担着重要的调控作用。它不仅在维持细胞群体数量的稳定、胚胎发育和免疫系统的克隆选择方面，而且在肿瘤发生、发展、抗肿瘤药物的治疗等方面具有十分重要的作用。细胞凋亡是由基因编程控制的细胞主动参与的自杀过程没事一种生理性调节机
激光全息技术检测细胞凋亡
如何检测细胞凋亡？细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。细胞凋亡的研究方
细胞凋亡及其检测技术2
（二）荧光法：选用上述最佳浓度作用于肿瘤细胞，培养细胞48h后，收货细胞用PBS洗2-3次后用0.4%多聚甲醛室温下固定30min。弃去固定液，并用PBS洗2次后，用1%Triton X-100作用4min加入适量的0.5mg/L DAPI荧光染色60min，用PBS冲洗3次，取10ul滴片，干燥后