RNA聚合酶在大肠杆菌细胞内的空间组织及其与转录的关系
2019年9月16日，PNAS杂志在线发表了约翰霍普金斯大学医学院肖杰博士团队的研究成果，题为“Spatial organization of RNApolymerase and its relationship with transcription in Escherichia coli”。该工作揭示了RNA聚合酶（RNAP）簇的特征及其在细胞内空间分配模式不仅依赖于rRNA合成，并且更可能决定于类核的结构组织。 作者主要通过使用定量超分辨率单分子荧光成像来研究大肠杆菌细胞内RNAP的空间组织和转录活性，从而更进一步地检测了RNAP转录工厂的假设。作者使用了可光活化的荧光蛋白融合在活细胞内定位RNAP，使用单分子荧光本为杂交来定位细胞内的新生rRNA，并使用三维结构光超分辨成像SIM探测了细胞内染色体DNA的结构组织。作者观察到RNAP簇大概率位于细胞的中长轴，并在高营养媒介生长条件下和新生rRNA形成的簇高度重合，显示......阅读全文
荧光RNA随机引物触发的聚合酶链反应实验（一）
实验步骤 ##一、 从组织和培养细胞中分离RNA1.TRIzol试 剂（Invitrogen)。该试剂含有苯酚和硫氰酸盐化合物，操作时应穿实验服，戴手套，存放于 4°C 。2.氯仿。3.异丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯（DEPC) 处理的水。6.无DNA试剂盒（Ambion)。贮存于一 20°C
MCB：RNA聚合酶III调控巨噬细胞功能促进肿瘤存活
近日，来自英国的科学家在生物学期刊Molecular and Cellular Biology在线发表了他们关于RNA聚合酶III调控巨噬细胞功能的最新研究进展。 研究人员指出，肿瘤微环境中的炎症具有许多促癌症发展效应。特别是肿瘤相关巨噬细胞（TAM）能够产生许多细胞因子，促进恶性肿瘤细胞存活
我国科学家发现RNA病毒聚合酶独特催化机制
RNA病毒包括SARS冠状病毒、高致病性流感病毒、埃博拉病毒、寨卡病毒等，在过去十五年间多次造成全球性影响，对人类健康构成严重威胁，而针对RNA病毒的药物和疫苗目前严重匮乏。聚合酶作为RNA病毒所必需的复制酶，在病毒RNA基因组复制过程中发挥核心作用，深入了解其催化机制，将为有效应对RNA病毒提
T7－RNA聚合酶/启动子表达实验2
实验材料蛋白质试剂、试剂盒氨基酸混合物M9培养基甲硫氨酸甲醇仪器、耗材荧光显微镜离心机分光光度计实验步骤1. 将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，转化一种标准大肠杆菌菌株，此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿，于37℃温育培养过
研究发现鞘磷脂能够激活丙型肝炎病毒RNA聚合酶
HCV聚合酶的鞘磷脂结合结构域 10月，病毒研究领域著名学术期刊Journal of Virology在线发表了中科院上海巴斯德所最新研究成果，该研究揭示了作为脂筏主要结构成分之一的鞘磷脂能够以基因型特异性的方式激活丙型肝炎病毒（HCV）1b亚型的RNA聚合酶，并且找到了其结合和激
T7－RNA聚合酶/启动子表达实验3
实验材料噬菌体试剂、试剂盒PEGIPTG仪器、耗材培养箱离心机实验步骤1. 制备从M13噬菌体mGP1-2原种，加PEG溶液沉淀浓缩噬菌体。重悬噬菌体于M9培养基，滴定其滴度。 2. 将由“基本方案”步骤1所得的含T7 启动子表达质粒转化M13许可性大肠杆菌细胞，转化物涂布于氨苄青霉素平皿上，3
荧光RNA随机引物触发的聚合酶链反应实验（二）
##六、从组织或培养细胞提取 RNARNA可以从各种来源的样本包括培养的细胞（例如神经元细胞、肝细胞等）和组织中分离得到（见 注 释 1) 。 mRNA 的 纯 化 对 FRAP-PCR 方法来说并不需要，因为mRNA 仅占细胞总 R N A 的 3 % 〜5 % (13)。因而在本章所描述
Nature－Microbiology：流感病毒聚合酶调控RNA合成机制
流感病毒是危害全球公共卫生健康的重要病原之一，能在人群中引起大规模流行和季节性流感，每次暴发都会引起人类死亡并造成巨大的经济损失。流感病毒（Influenza virus）是分节段的负链RNA病毒（Segmented Negative-Sense RNA virus, sNSV），属于正粘病毒科
我国科学家发现RNA病毒聚合酶独特催化机制
RNA病毒包括SARS冠状病毒、高致病性流感病毒、埃博拉病毒、寨卡病毒等，在过去十五年间多次造成全球性影响，对人类健康构成严重威胁，而针对RNA病毒的药物和疫苗目前严重匮乏。聚合酶作为RNA病毒所必需的复制酶，在病毒RNA基因组复制过程中发挥核心作用，深入了解其催化机制，将为有效应对RNA病毒提
T7－RNA聚合酶/启动子表达实验1
在适宜的条件下，T7 RNA聚合酶/启动子系统表达的基因产物可占细胞总蛋白的25%以上，但多数情况下产量比这个比例要低得多。实验材料载体试剂、试剂盒氨苄青霉素卡那霉素pGP裂解缓冲液仪器、耗材培养箱分光光度计离心机实验步骤1. 将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，转化
关于聚合酶的分类介绍
可分为以下几个类群: (1)依赖DNA的DNA聚合酶； (2)依赖RNA的DNA聚合酶； (3)依赖DNA的RNA聚合酶； (4)依赖RNA的RNA聚合酶。 前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，Pol
DNA聚合酶的相关介绍
可分为以下几个类群: (1)依赖DNA的DNA聚合酶； (2)依赖RNA的DNA聚合酶； (3)依赖DNA的RNA聚合酶； (4)依赖RNA的RNA聚合酶。 前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为P01Ⅰ，P01
聚合酶的基本分类
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA
聚合酶的分类介绍
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；D
聚合酶的分类
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；D
聚合酶的分类
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA
关于强启动子的基本介绍
强启动子（strong promoter），指对RNA聚合酶有很高亲和力的启动子，它能指导合成大量的mRNA。 [1] 是对转录酶有较高的亲和力，可高效启动转录的启动子。主要有lacP（来源于大肠杆菌的乳糖操纵子，有乳糖存在可激活 [2] ）、trpP（来自于大肠杆菌的色氨酸操纵子 [2] ）
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ－Klenow片段实验——修复突出的3’或5‘末端
Klenow酶是大肠杆菌八聚合酶I的羧基端片段，它具有DNA聚合酶和3’到5’方向的外切酶活性，不含5’到3”方向的外切酶活性。实验材料DNA试剂、试剂盒限制性内切酶EDTA仪器、耗材水浴锅实验步骤1. 在20 μl 反应体积中，用限制性内切酶消化0.1~4 μg DNA。2. 加入1 μl 0
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ－Klenow片段实验—随即寡核苷酸引物介导
实验方法原理此法是一种用以产生高放射比活、放射标记均匀分布的04八片段的切口平移方法。实验材料DNA试剂、试剂盒TEdNTP仪器、耗材水浴锅实验步骤1. 用合适的限制性内切酶消化DNA，DNA片段经电泳纯化或乙醇沉淀，用TE缓冲液重悬。 2. 在冰浴中混合下列物质：（1）2.5 μl 0.5mm
用大肠杆菌－DNA－聚合酶－I－Klenow－片段及单链－DNA－模板进行...
用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及单链 DNA 模板进行双脱氧测序实验试剂、试剂盒 dATP去离子蒸馏水EDTA延伸 终止混合液和示踪混合液甲酰胺上样缓冲液Tris-Cl酶和缓冲液大肠杆菌 DNA 聚合酶ⅠKienow 片段核酸和寡聚核苷酸寡核苷酸引物单链 DNA 模板放射性化合物
用大肠杆菌DNA聚合酶IKlenow片段标记合成的寡核苷酸
在某些情况（例如用寡核苷酸作Southern印迹杂交的探针）下，重要的是要将寡核苷酸标记至尽可能高的放射性比活度。磷酸化反应最多能使每一寡核苷酸分子中掺入一个32P原子。但用大肠杆菌DNA聚合酶IKlenow片段3合成与合成寡核苷酸互补的DNA链， 则可得到比活度更高探针（Studencki 和Wa
科学家揭示RNA聚合酶III转录起始动态过程
复旦大学研究员徐彦辉、青年研究员陈曦子团队，重建了人源RNA聚合酶Pol III转录起始的完整动态过程，揭示了转录因子与聚合酶催化活性协同驱动Pol III由转录起始向延伸过渡的分子机制，为理解真核短链非编码RNA合成的调控提供了关键结构基础。6月4日，相关研究发表于《自然》。RNA聚合酶（RNAP
Nature：重磅！抑制RNA聚合酶III可延长寿命
在一项新的研究中，来自英国伦敦大学学院、肯特大学和荷兰格罗宁根大学的研究人员发现抑制一种所有动物都拥有的酶的活性可延长果蝇和线虫的寿命。相关研究结果于2017年10月29日在线发表在Nature期刊上，论文标题为“RNA polymerase III limits longevity downs
三域生物RNA聚合酶“最后一块拼图”被补上
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/3/518213.shtm2016年1月，回国不满半年的张余，在《中国科学院分子植物科学卓越创新中心人员遴选申请书》里写到：“申请人拟开展的工作是运用结构生物学研究叶绿体编码的RNA聚合酶（PEP）的工作机理和
如何做原核表达（prokaryotic－expression）(二)
几个常用的启动子和诱导调控表达系统最早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵子，由 启动子Plac + 操纵基因lacO +结构基因组成。其转录受CAP正调控和lacI负调控。lacUV5突变能够在没有CAP的存在下更有效地起始转录，该启动子在转录水平上只受lacI 的调控，因而随后得到了更广泛采用。la
原核表达载体的重要调控元件（启动子、SD序列与终止子）
1．启动子 启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。 原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，
核糖核酸酶H的基本豪华版介绍
核糖核酸酶H（RNase H）最早是从小牛胸腺组织中发现的，其编码基因已被克隆到大肠杆菌中。它能特异地降解DNA：RNA杂交双链中的RNA链，产生具有3’一OH和5’一磷酸末端的寡核苷酸和单核苷酸，它不能降解单链或双链的DNA或RNA。 在分子克隆中，核糖核酸酶H的主要用途是与大肠杆菌DNA聚
用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端
实验材料 限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA试剂、试剂盒 乙酸铵乙醇dNTP 溶液仪器、耗材 Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵（10 mol/L )乙醇2. 酶和缓冲液适宜的限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚
用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端
实验材料 限制性内切核酸酶 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 模板 DNA 试剂、试剂盒
用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端
实验材料限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA试剂、试剂盒乙酸铵乙醇dNTP 溶液仪器、耗材Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵（10 mol/L )乙醇2. 酶和缓冲液适宜的限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 I