PCR实验中DNA聚合酶的选择及实验方法
一、 DNA聚合酶的选择实验室常用 DNA聚合酶有三种：TaKaRa TaqTM，TaKaRa EXTaqTM和 PyrobestTMDNA Polymerase。TaKaRaTaqTM是一般的DNA 聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。TaKaRaEXTaqTM是具有 Proof reading活性的耐热性 DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物 3’端附有一个 “A ”碱基，如果希望直接将产物克隆 到 T -vector可以用此酶。PyrobestTMDNA Polymerase 也是具有Proof reading 活性的耐热性DNA 聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的 PCR产物为平滑末端。如果进行基因的扩增 请使用此酶。二、按下列组成在PCR 反应管中调制反应液TaKaRaTaqTM或TaKaRaE XTaqTM的配方ReagentQuantity,for 50µ ......阅读全文
PCR实验中的污染预防及处理（二）
（二）环境污染：在排除试剂污染的可能性外，更换试剂后，若不久又发现试剂被污染了，如果预防措施比较严密，则考虑可能为环境污染。 环境污染中常见的污染源主要有： 1. 模板提取时真空抽干装置； 2. 凝胶电泳加样器； 3. 电泳装置；
用于PCR的模板DNA制备实验——酚氯仿法提取石蜡组织中DNA
模板 DNA 质量直接影响 PCR 结果，是 PCR 成功的关键之一。根据其检测对象（组织细胞材料）的不同，有不同的制备方法，常用的材料有石蜡切片、冰冻切片、血细胞、胸腹水等。实验步骤1. 10 mm 厚石蜡切片 10～15 张，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲
PCR扩增DNA（PCR－Amplify－DNA）实验原理、材料和操作步骤
【实验原理】聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）是一种体外 DNA扩增技术，1985年由Mullis等人创立。该技术能在几小时的实验操作中，将人为选定的一段DNA扩增几百万倍，具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等优点，目前已成为分子生物学及基因工程中极为
实验室中几种常见的干燥方法及选择技巧
实验室中的干燥法没有哪种最好，只有哪种最适合，不论哪种干燥方法都有其独特的价值，都有其展现生命力的地方。一、真空干燥箱 原理：真空干燥箱专为热敏性、易分解和易氧化物质及较复杂成分物品而设计，能够向内部充入惰性气体，特别是一些成分复杂的物品也能进行快速干燥。应用：应用于生物化学、化工制药、医疗卫生、农
PCR技术（三）：Taq－DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的.(一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa.其比
聚合酶链反应(PCR)详细实验操作步骤
一、实验原理 聚合酶链反应(PCR)技术是在体外进行的由引物介导的酶促DNA扩增反应。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四种脱氧核糖核苷酸(dNTP)及适当浓度的Mg2+存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的体外酶促合成反应。两个引物分别位于靶序列两端，同两条模板的3’端互补，由此限定扩增片
分子克隆实验载体DNA的选择
①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的
DNA提取中EB的去除实验方法
Removal of Ethidium Bromide from DNA by Extraction with Organic SolventsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourn
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ－Klenow片段实验
实验方法原理 选用本方法可产生用于放射自显影的32P末端标记分子量标志物。放射自显影带的强度与片段长度无关，标记DNA可稳定数月之久。 实验材料 DNA试剂、试剂盒 dNTP仪器、耗材 水浴锅实验步骤 1. 在20 μl 反应体积中，用可产生5’突出端的限制性内切酶消化0.1~0.4 μg DNA
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ－Klenow片段实验
标记DNA的3‘末端 修复突出的3’或5‘末端 随即寡核苷酸引物介导 实验方法原理 选用本方法可产生用于放射自显影的32P末端标记分子量
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
实验方法原理 dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 产物微量滴定板，尼龙膜，紫外交联装置，96 孔或 384 孔复制器，热循环仪，PCR 管或反应板
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
对于高通量的筛选，推荐使用几个热循环仪厂家提供的 96 孔或 384 孔 PCR 板，或者使用单个的管子。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验方法原理dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
实验方法原理 dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 产物微量滴定板，尼龙膜，紫外交联装置，96 孔或 384 孔复制器，热循环仪，PCR 管或反应板试剂、试剂盒 dNTP PCR 缓冲液聚合酶混合液嵌套引物LB-氨苄
实验室中滤膜滤器的选择方法
针筒式滤器在实验室中应用广泛，它不需要换膜和清洗滤器，省去了复杂费时的准备工作，主要应用于样品 预滤、澄清除颗粒、液体和气体的除菌过滤。是过滤HPLC、GC小量样品的首选方法。针式滤器外壳材质为 聚碳酸酯塑料，上、下部由超声波焊接成一体，防滑设计，耐高压，不存在产品的泄露问题。 实验室中滤
一文知晓PCR，定量PCR与数字PCR的实验方法与选择（一）
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。第一代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过将P
一文知晓PCR，定量PCR与数字PCR的实验方法与选择（二）
数字 PCR数字 PCR 是通过将样本DNA随机分布至独立的反应单元中，每个反应单元中包含或者不包含1个或多个拷贝的目标分子，所有独立的反应单元进行平行扩增后，对每个反应单元的阴性或者阳性荧光信号进行检测并进行统计学分析，就可以计算出原始样本的拷贝数，无需参考标准品或内源性对照品，也不需要标准曲
如何选择实验抗体（一抗的选择原理及方法）？
检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，在同一个抗体公司，可能会有好几种，甚至好几十种；在不同的抗体公司，那就更多了。那怎样在琳琅满目的抗体中，选择自己实验需要的抗体呢？主要考虑如下几种因素：分析自己实验应用的实验方法是哪种？分析自己实验中标本的种属是哪种动物或人的？分析样本中的蛋白质的结构性质
激活的热稳定－DNA－聚合酶进行反转录和－DNA－扩增实验
试剂、试剂盒 RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dye仪器、耗材 琼脂糖凝胶的电泳设备实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂琼脂糖二甲基亚砜（见注释 1)(DMSO)溴化乙锭
激活的热稳定－DNA－聚合酶进行反转录和－DNA－扩增实验
试剂、试剂盒 RNA寡核苷酸引物 脱氧核苷三磷酸 RT RNA PCR 酶 AccuRT 缓冲液 UNG 琼脂糖 溴化乙锭
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ－Klenow片段实验——标记DNA的3‘末端
实验方法原理选用本方法可产生用于放射自显影的32P末端标记分子量标志物。放射自显影带的强度与片段长度无关，标记DNA可稳定数月之久。 实验材料DNA试剂、试剂盒dNTP仪器、耗材水浴锅实验步骤1. 在20 μl 反应体积中，用可产生5’突出端的限制性内切酶消化0.1~0.4 μg DNA。 2.
激活的热稳定－DNA－聚合酶进行反转录和－DNA－扩增实验
本实验介绍激活的热稳定 DNA 聚合酶进行反转录和 DNA 扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dy
浅谈实验中BSA的选择
牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一种球蛋白，包含607个氨基酸残基，分子量为66.446KDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用。按照等级从低到高分为：牛血清白蛋白，牛血清白蛋白第五组分，牛血清白蛋白（无必须脂肪酸），牛血清白蛋白（无蛋白酶），牛血清白蛋白（细胞培养级），金标级
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验——含血标本
实验步骤1. 3 ml 外周血或 1 ml 骨髓液放入含 50 μl 0.5mol/L EDTA 的无菌离心管（15 ml 管）中。2. 2000 r/min 离心 10 min。吸去血浆，用指弹匀剩余的有核细胞和红细胞，加入红细胞溶解液 10 ml 并混匀，常温下放置 30 min。红细胞溶解液配
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验——冰冻片
实验步骤1. 将 10 μl 冰冻切片直接放入含组织裂解液的离心管中。2. 无菌尖头刀片刮下，放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以上。3. 其间用指轻弹离心管以利裂解。若有沉淀，再加入 5～10 μ
通过PCR方法对微量DNA进行定量分析实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 蛋白酶消化缓冲液20 mg ml蛋白酶K (储于-20℃)用 50 mmol L Tris . Cl 10 mmol L EDTA pH 7.4 缓冲的酚（储于室温）24 ：1（V V)氯仿 异戊醇10 mol L乙酸按冰冷的100%乙醇70%乙醇TE缓冲液pH
通过PCR方法对微量DNA进行定量分析实验
基本方案 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
通过PCR方法对微量DNA进行定量分析实验
PCR被用于从每样品的1〜20 000个分子中定量某一特定DNA序列的 数量。此外，它可辅助评估那些造成这类实验失败的污染序列的存在。来源：《精编分子生物学实验指南》第五版实验材料DNA试剂、试剂盒蛋白酶消化缓冲液20 mg ml蛋白酶K (储于-20℃)用 50 mmol L Tris . Cl
用于PCR的模板DNA制备实验——直接法（DNA－免提法）
实验步骤1. 标本太少时，可将一张石蜡切片经脱蜡，水化，蒸馏水清洗，无菌蒸馏水浸泡，取出晾至半干。2. 加入 20～80 μl 直接裂解液中，加 20 mg/ml 蛋白酶 K 0.2～1 μl，放置 55℃ 裂解 3 h 以上；100℃10 min 灭活蛋白酶 K；10000 r/min 离心 10
PCR实验中内参基因的作用
1. 判断样品提取是否成功。假如你提取了总RNA然后再做逆转录得到cDNA，然后再去跑PCR发现没有结果，是不是表示样品中没有你的目的基因呢？答案是：不一定。要根据使用同一模板跑出的内参基因的结果才可判断。内参基因的CT在一个合理范围（比如20左右）的前提下，才能说明样品制备没问题，在这个前提下，做
PCR实验方法步骤
PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面小编就向大家介绍PCR实验方法步骤：方法1/4在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix （2mM）