一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多重PCR的主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定和病原微生物,某些遗传病及癌基因的分型鉴定。多种病原微生物的同时检测或鉴定,是在同一PCR反应管中同时加上多种病原微生物的特异性引物,进行PCR扩增.可用于同时检测多种病原体或鉴定出是那一型病原体感染,可组合系统的有:①肝炎病毒的感染,在同一病人或同一供血者体内,有时存在多种肝炎病毒重叠感染,有时是甲乙丙型肝炎病毒重叠;有时可能是甲乙型肝炎病毒重叠;有时是乙丙型肝炎病毒重叠.②肠道致病性细菌的检测,如伤寒,痢疾和霍乱,有时具有较相同的肠道症状,有时痢疾霍乱同......阅读全文
Fig. 25. Multiplex PCR of mixtures A-D comparing PCR programs with 2 (green) and 1 (yellow) minute extension time at 54° C annealing temperature.
CONTENTPCR guide: a discussion of the main parameters influencing the outcome of the PCR and multiplex PCR reaction in 16 pages/sections and using ove
Non-denaturing PAA gelsTo separate PCR products differing in only a few bp in length (for example, microsatellite markers), 6-10% PAA gels need to be
Fig. 11. Example of the influence of extension temperature. Multiplex PCR with mixtrues A-B using two different PCR programs. Reactions on the ri
MgCl2 concentrationRelationship between MgCl2 and dNTP concentrationdNTP concentrations of about 200µM each are usually recommended for the
Influence of annealing temperature and number of loci amplifiedLike any other PCR, multiplex reactions should be done at a stringent enough temperatur
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles. COMPONENTVOLUMEFINA
11. All products in my multiplex reaction are weak. How can I improve the yield?Decrease annealing time in small steps (2º C)Decrease extension temper
作者:徐华1,叶世辉1,王宝燕2,刘孟黎1,吴大洲1,贺晨1 作者单位:(1. 陕西省血液中心血型研究室,陕西西安710061;2. 西安交通大学医学院第一附属医院输血科,陕西西安710061) 【摘要】 目的建立一种
8月广州国际生物技术大会 艾博抗、近岸、通用等百家抗体药企亮相 自1986年FDA批准第一个治疗性单克隆抗体药物以来,单克隆抗体药物从靶点开发到技术改进,从临床研究到商业化策略,各个方面均日趋成熟,已经成为医药领域的主流新秀;2018年,全球医药销售排名前二十名主要是有关肿瘤以及类风湿性疾
一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 
PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速、应用之广泛,表明其具有强大的生命力.近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术 原位PCR就是在组织
PCR技术自1985年建立以来,发展之迅速、应用之广泛,表明其具有强大的生命力.近些年来,基于PCR的基本原理,许多学者充分发挥创造性思维,对PCR技术进行研究和改进,使PCR技术得到了进上步地完善,并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术 原位PCR就是在组织细胞里进行PCR
随着分子生物学和植物基因工程的不断发展,越来越多的育种工作者开始利用转基因技术获得常规育种技术难以得到的新种质和新品种。植物转基因技术最大的好处在于可以打破自然界物种间原有的生殖隔离,促进基因在不同物种间的交流,极大地丰富变异类型,增大遗传多样性,为植物新品种的培育提供丰富的育种资源。通过对基因功能
Illumina测序仪通常也被称作Solexa测序仪(Illumina测序仪的特点见表5)。它适用于采用各种方 法制备的DNA文库,文库中DNA片段可以长达数百bp,并可通过桥式PCR来扩增模板片段。在 桥式PCR反应中,正向引物和反向引物都被通过一个柔性接头(flexible linker)固定在
多元 PCR (多重PCR,Multiplex PCR,MPCR) 是指在一个 PCR 反应中使用一个模板和几对引物同时扩增多个目的片段的 PCR 反应。这项技术非常有用,他不仅可以提高 PCR 的产率还能提高 DNA 样品的利用率。另一种形式的 MPCR 是组合 PCR, 组合 PCR 是在同一
多元 PCR (多重PCR,Multiplex PCR,MPCR) 是指在一个 PCR 反应中使用一个模板和几对引物同时扩增多个目的片段的 PCR 反应。这项技术非常有用,他不仅可以提高 PCR 的产率还能提高 DNA 样品的利用率。另一种形式的 MPCR 是
Highly variable intergenic spacer and intron regions from nuclear and cytoplasmic DNA have been used for species identification. Noncoding internal
实验方法原理 多重PCR(multiplex PCR),其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同。一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子
多重PCR扩增实验可以用于:(1)在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物,或对有多个型别的目的基因进行分型,特别是用一滴血就可检测多种病原体;(2)多重PCR很适宜于成组病原体的检测,如肝炎病毒,肠道致病性细菌,性病,无芽胞厌氧菌,战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检;(3)多种病原体在同一反应管内
近年来,随着微生物基因组学的发展,微生物基因检测迎来了新的机遇。2000年,Makino等已经完成V.p的基因组测序,V.p毒力基因及特异的基因序列得到进一步确定。根据V.p特异基因序列,设计引物,进行PCR检测,是现阶段检测V,p的最快速准确的方法。目前应用于检测V.p的PCR方法主要有任意引物
PCR常见问题 一.没有扩增产物 1.循环温度:变性温度、退火温度 2.引物设计 3.DNA聚合酶活性 4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份) 5、DNA样品 二.非特异产物及电泳呈涂布状 1.Mg
血液分子生物学检验技术主要包括PCR技术、DNA测序技术、限制性片段长度多态性(RFLP)、转基因技术及基因芯片(DNA-chip)技术等分子生物学技术。目前这些技术已应用于血液病基因分析、基因诊断、白血病分型、指导治疗、判断预后和微小残留病检测等方面。 (1)核酸分子杂交技术原理和方法 1)So
血液分子生物学检验技术主要包括PCR技术、DNA测序技术、限制性片段长度多态性(RFLP)、转基因技术及基因芯片(DNA-chip)技术等分子生物学技术。目前这些技术已应用于血液病基因分析、基因诊断、白血病分型、指导治疗、判断预后和微小残留病检测等方面。(1)核酸分子杂交技术原理和方法1)South
一、兼并引物(Degenerate primer)PCR密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核苷酸的数量应相同。兼并度越低,产物特异性越强,设计引
· What's PCR? (Michael Blaber's Lab)Illustrated introduction to usr/localious aspect
What's PCR? (Michael Blaber's Lab)Illustrated introduction to usr/localious aspects of PCR technique. It's very valuable not onl
一、兼并引物(Degenerate Primer)PCR 密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核苷酸的数量应相同。兼并度越低,产物特异性越强,设计引物时应尽
芯片毛细管电泳具有进样量少,灵敏度高,分析速度快等特点,非常适合法医DNA-STR的快速检验。毛细管电泳芯片由于尺寸小,可施加较大场强,所以在几秒钟内就可完成对样品的分离,微阵列毛细管电泳芯片可实现高通量检测则成为目前学者研究的热点。2002年Emrich CA等[31]报道的将高通量384孔毛
琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶琼脂糖 . 长度彼此相差 30–40bp 的多重 PCR 产物在通常使用的 SeaKem 或 NuSieve(FMC BioProducts) 3% 的琼脂糖凝胶可以很好的区分开。在低电场强度下过夜电泳可以优化每个 PCR 产物条带的电泳效果,特别是当