功能基因cDNA5’末端的克隆
一．原理⑴ 5’-RACE法① 以目的mRNA 为模板，使用5’末端P 标记的RT 引物进行反转录反应，合成1ststrand cDNA。② 使用RNase H 分解 Hybrid DNA-RNA中的RNA链。③ 使用T4 RNA Ligase 使单链cDNA进行环化或形成首尾连接物。④ 进行PCR扩增。⑵ 引物设计二．材料与方法1 材料肝脏RNA2 仪器、用具PCR仪、0.2ml PCR管、移液器3 试剂(1)RNase Free H 2 O；10×RT PCR Bμffer (含dNTP Mixture)；RNase Inhibitor(40U/μl)；AMV Reverse Transcriptase XL (5U/μl)；RNase H (60U/μl)；5×Hybrid RNA Degradation Buffer；5×RNA (ssDNA)Ligation Buffer；T4 RNALigase； 40% ......阅读全文
功能基因cDNA－5’末端的克隆
一．原理⑴ 5’-RACE法① 以目的mRNA 为模板，使用5’末端P 标记的RT 引物进行反转录反应，合成1ststrand cDNA。② 使用RNase H 分解 Hybrid DNA-RNA中的RNA链。③ 使用T4 RNA Ligase 使单链cDNA进行环化或形成首尾连接物。④ 进行PCR
功能基因－cDNA－3’末端的克隆
一．原理 (1) 以目的mRNA 为模板，使用Oligo dT-3sites Adaptor Primer 进行反转录反应，合成1st Strand cDNA。 (2) 使用含有KpnI、XbaI、BamH I 酶切位点的上游特异性引物和3sites Adaptor Primer进行PCR反应。 (
功能基因cDNA3#39;末端的克隆
一．原理(1) 以目的mRNA 为模板，使用Oligo dT-3sites Adaptor Primer 进行反转录反应，合成1st Strand cDNA。(2) 使用含有KpnI、XbaI、BamH I 酶切位点的上游特异性引物和3sites Adaptor Primer进行PCR反应。(3)
cDNA－5’末端的快速扩增（5’RACE）
在分子克隆中没有比分离缺乏相应的 mRNA 5' 末端的序列特征结构的 cDNA 克隆更易失败的了。通常存在于 cDNA 基因文库中的部分克隆，由于反转录酶未能沿全长 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一条链往往 5' 末端不完整。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂
cDNA－5’末端的快速扩增（5’RACE）
实验方法原理 在分子克隆中没有比分离缺乏相应的 mRNA 5' 末端的序列特征结构的 cDNA 克隆更易失败的了。通常存在于 cDNA 基因文库中的部分克隆，由于反转录酶未能沿全长 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一条链往往 5' 末端不完整。实验材料 反转录酶末端脱氧核
cDNA－5’末端的快速扩增（5’RACE）
实验方法原理 在分子克隆中没有比分离缺乏相应的 mRNA 5' 末端的序列特征结构的 cDNA 克隆更易失败的了。通常存在于 cDNA 基因文库中的部分克隆，由于反转录酶未能沿全长 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一条
用经典－RACE－扩增－cDNA－的5’末端实验
试剂、试剂盒 GSP-RT 引物 poly(A)+RNA 或总 RNA 反转录缓冲液 RNA 酶 H RNasin SuperScriptI
用经典－RACE－扩增－cDNA－的5’末端实验
试剂、试剂盒 GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或总 RNA反转录缓冲液 RNA 酶 HRNasinSuperScriptII 逆转录酶dNTP 溶液DTTTECoCl2dATP 溶液脱氧核苷酸末端转移酶加尾缓冲液 HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot
用经典－RACE－扩增－cDNA－的5’末端实验
这一实验方案分为 3 个阶段。 第 1 阶段：反转录产生 cDNA 模板 ；第 2 阶段：在第一链 cDNA 产物末端加 poly(A) 尾 ；第 3 阶段：扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或总 RNA反转录缓
用新－RACE－法扩増－cDNA－的－5末端
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂 酶和酶缓冲液 核酸和寡核苷酸 仪器、耗材 特殊设备
用新－RACE－法扩増－cDNA－的－5末端
这一实验方案分为 6 个阶段。第 1 阶段：降解 RNA 的去磷酸化; 第 2 阶段：完整 RNA 去帽; 第 3 阶段：RNA 寡核苷酸的制备; 第 4 阶段：RNA 寡核苷酸与细胞 RNA 的连接; 第 5 阶段：反转录; 第 6 阶段：扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康
用新－RACE－法扩増－cDNA－的－5末端（二）
第 3 阶段：RNA 寡核苷酸的制备选择离 T7 或 T3RNA 聚合酶作用位点下游约 lOObp 处可以线性化的质粒 [见图 25-3(b)]。因为来自多克隆位点回文序列的引物用于 PCR 效果不好，因此比较理想的是用在多克隆位点克隆进某个插入片段的质粒。一个已经验证过的质粒是 pBS-S
用新－RACE－法扩増－cDNA－的－5末端（一）
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂酶和酶缓冲液核酸和寡核苷酸仪器、耗材 特殊设备实验步骤 第 1 阶段：降解 RNA 的去磷酸化一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙酸钠，3mol/L,pH5.2乙醇二硫苏糖醇（DTT)（0.1mol/L)苯酚/氯仿（1:1，体积比）2. 酶和酶缓冲液磷酸酶缓冲液，10X
cDNA克隆的方法
cDNA克隆( cDNA cloing)与RNA互补的双链DNA片段，而且它能携在克隆载体中。通常用于克隆真核生物mRNA的DNA拷贝。由于cDNA持贝是一个成熟的信息分子拷贝，因此，无内含子顺序。如果在其克隆的藏体中连上一个适当的活动子序，它可在任何宿主体内得以迅速表达 。
cDNA克隆的概念
cDNA克隆( cDNA cloing)与RNA互补的双链DNA片段，而且它能携在克隆载体中。通常用于克隆真核生物mRNA的DNA拷贝。由于cDNA持贝是一个成熟的信息分子拷贝，因此，无内含子顺序。如果在其克隆的藏体中连上一个适当的活动子序，它可在任何宿主体内得以迅速表达
cDNA克隆的定义
中文名称cDNA克隆英文名称cDNA cloning定 义从基因的转录产物(如mRNA)开始，逆转录合成互补DNA(cDNA)，然后重组入载体，经过复制，筛选得到单一种cDNA分子的技术。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
cDNA末端快速扩增技术的定义
定义：cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3’末端的有效方法。
cDNA末端快速扩增技术的定义
⑴.5’ RACE-PCR：利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点，以连有SMART寡核营酸序列通 用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。然后用一个基因特异引物GSP2 (gene specific primer,GSP)作为上游引物
功能基因cDNA序列的分析
（一） cDNA序列的测定一．原理DNA 序列测定技术，目前主要是根据Sanger 等提出的酶法和Maxam和Gilber 提出的化学降解法，这两种方法的原理大致相同。这里主要介绍Sanger 的酶法——双脱氧链终止法。双脱氧链终止法是Sanger 等人于1977 年建立起来的。它是利用了2'
cDNA末端快速扩增法的方法介绍
中文名称cDNA末端快速扩增法英文名称rapid amplification of cDNA end;RACE定 义从低丰度转录物中快速扩增cDNA片段，以获得具5'和3'端的全长cDNA的一种方法。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
cDNA－3末端的快速扩增（3’RACE)
在用 oligo (dT) 引物构建的 cDNA 文库中，偶而发生部分 cDNA 克隆缺失了与靶 mRNA 3' 末端互补的序列。这部分序列到底是在 cDNA 合成过程中还是在分子克隆中怎样缺失和在哪个环节中缺失的尚不清楚。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在用 o
cDNA－3末端的快速扩增（3’RACE)
实验方法原理 在用 oligo (dT) 引物构建的 cDNA 文库中，偶而发生部分 cDNA 克隆缺失了与靶 mRNA 3' 末端互补的序列。这部分序列到底是在 cDNA 合成过程中还是在分子克隆中怎样缺失和在哪个环节中缺失的尚不清楚。第一链 cDNA 的随机断裂，在合成第二链 c
cDNA－3末端的快速扩增（3’RACE)
实验方法原理 在用 oligo (dT) 引物构建的 cDNA 文库中，偶而发生部分 cDNA 克隆缺失了与靶 mRNA 3' 末端互补的序列。这部分序列到底是在 cDNA 合成过程中还是在分子克隆中怎样缺失和在哪个环节中缺失的尚
PCR产物的平末端克隆
靶基因经 PCR 扩增，样品进行必要的纯化回收后，接下来用平末端进行连接克隆也是分子生物学实验中常规采用的技术路线，实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuang et al. 1995)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译
PCR产物的平末端克隆
实验方法原理 靶基因经 PCR 扩增，样品进行必要的纯化回收后，接下来用平末端进行连接克隆也是分子生物学实验中常规采用的技术路线，实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuan
PCR产物的平末端克隆
常规采用的技术路线，实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuang et al. 1995)。Liu 与 Schwartz (1992) 发现在连接反应的温育过程中，当反应液中存在过量的限制性内切核酸酶能显著地增加重组质粒的产率
cDNA克隆技术的特点
①有些生物，如RNA病毒没有DNA，只能用cDNA克隆；②cDNA克隆易筛选，因为cDNA库中不包含非结构基因的克隆，而且每一cDNA克隆只含一个mRNA的信息；③cDNA能在细菌中表达。cDNA仅代表某一发育阶段表达出来的遗传信息，只有基因文库才包含一个生物的完整遗传信息。
仅扩增全长cDNA末端的高级RACE方法
为了获得全长的cDNA 5’及3’末端序列，许多研究人员使用了称之为cDNA末端快速扩增，或RACE的方法。传统的RACE方法得到的PCR产物含有全长及断裂的cDNA产物。GeneRacer™试剂盒确保您只得到含有全长cDNA末端的完整序列，是您得到更高效的结果并节省您的时间GeneRacer™
EST技术及其在基因全长cDNA克隆上的应用策略
第二军医大学细胞生物学教研室；上海200433 何志颖；姚玉成（综述）；胡以平（审校）关键词：EST技术；“电子”基因克隆；生物信息学；基因摘要： 随着人类基因组计划的顺利进行，EST技术被广泛应用于基因识别、绘制基因表达图谱、寻找新基因等研究领域。利用人类基因组研究不断产生的数据，从ESTs即cD
PK120－cDNA－克隆实验
实验材料cDNA试剂、试剂盒Ready-To-Go DNA 标记试剂盒人肝脏 λgt11 cDNA 文库人肝脏 λgt10 cDNA 文库杂交溶液SSC 溶液pBluescript II SK 载体仪器、耗材PCR 扩增仪实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」1. 杂交反应抽提出的 50bp 的 P