植物石蜡切片之溶液配制、实验用品和操作步骤

说到便于观察和保存的组织切片方法,我们的脑海里很容易就闪出四个字来:石蜡切片,不过,你掌握了吗?还是……听说过而已?本文主要对石蜡切片法的主要实验用品、实验步骤、溶液配制这几方面对这一实验方法作介绍。 一、实验目的 1.熟练掌握石蜡切片的方法。 2.掌握永久制片的制作过程,为研究植物 的内部结构奠定基础。 3.学会植物 内部结构的比较研究方法。 二、实验器具与试剂 1.器具 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。 2.试剂 10%番红水溶液、0.5%固绿(用95%的酒精配制)、酒精(100%、95%、80%、70%、50%)、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。 三、实验材料 幼嫩植物 各部分,根据季节选择材料。 四、实验内容与方法 石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。它是把材料......阅读全文

普通组织石蜡包埋切片的注意事项

  1、固定剂应有足够的量,一般为组织块体积的10∽15倍。  2、根据组织的不同和实验目的的不同,选取不同的固定剂。  3、固定时间依材料大小、固定剂种类而异,可从1小时到几时小时,有时中间需要更新固定剂。某些固定剂对组织的硬化作用较强,作用时间应严加控制,不能过长。  4、取材切面要平整,厚度不

关于石蜡切片的抗原修复及方法介绍

  石蜡切片标本均用甲醛固定,使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态。  常用的抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,

石蜡切片制作(苏木精伊红对染法)(二)

5.透明纯酒精、二甲苯等量混合液15min,二甲苯Ⅰ15min、Ⅱ15min(至透明为止)。由于乙醇与石蜡不相溶,而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡,所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时,光线可以透过,组织呈现出不同程度的透明状态。透明注意事项(1)使用透明剂时,要随时盖紧盖子,

石蜡切片组织有横向裂纹是怎么回事

  组织的形态不是很清晰,可能没有固定好。  建议:  1、取材要快,离体5分钟内修整好组织块,放入固定液,越快越好,减少组织自溶;  2、组织固定时体积要小,不大于5mm;  3、固定液充分,固定液与组织的体积比10-20:1。  石蜡切片(paraffin section)组织学常规制片技术中最

石蜡切片(paraffin-sections)免疫组化染色步骤

1、载玻片的处理:抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。这里选用ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下:(1)APES:现用现配。将洗净的玻片

光学显微镜的石蜡切片制作过程

    I.将组织块放入带标记的盒子内,光学显微镜置于200m1液体中;    2.按选定的温度加热;测定温度。    3.光学显微镜3%戊二醛预固定15秒钟;缓冲液冲洗3次,光学显微镜每次3分钟;1 %OsO;固定15秒钟。如中断操作,预固定后仍需在4℃下保存.    用微波脱水、浸透每一步骤只需

石蜡切片免疫组化染色实验操作流程

1.石蜡切片脱蜡至水:(石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时) 。① 二甲苯 、II,各 10 分钟。② 梯度酒精:100%,2 分钟 95%,2 分钟 80%,2 分钟 70% 2 分钟。③ 蒸馏水洗:5 分钟,2 次(置于摇床)。2.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶:3%H2 O2 ,室温 10 分

石蜡切片制作(苏木精伊红对染法)(一)

实验方法原理 石蜡切片是最基本的切片技术,冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法(简称 H.E. 对染法)是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛,对组织细胞的各种成分都可着色,便于全面观察组织构造,而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可

石蜡组织切片的保存方法和注意事项

许多实验室研究人员习惯将组织蜡块切片后长期保存在室温条件下,而切片后的组织在室温下长期保存抗原易损失。一些研究发现,切片在室温下保存3个月以上,免疫组化染色结果会出现减弱,甚至阴性。因此,有学者进行了新、旧切片保存时间对照实验。选择11种不同组织蜡块每例连续切10片,共110片,常温空气中放置1个月

植物细胞结构与植物徒手切片

[目的要求] 1.掌握植物徒手切片技术。 2.观察认识植物细胞的基本结构,质体的形态。 3.认识和鉴定植物细胞内常见的后含物。 [材料用品] 材料:洋葱鳞茎或番茄果实、葫芦藓叶、红辣椒、鸭跖草叶片、马铃薯块茎、蓖麻种子、花生种子。

海水鱼卵石蜡切片组织破碎的原因

本人觉得是脱水这个环节有问题,事先应当做一个预备试验,看怎样的酒精梯度比较合适。有时候脱水过度会造成组织脆弱,切片的时候就容易破碎。这里有个参考值,但是建议搂主最好作些修改:小老鼠内脏脱水程序:固定液30分钟85%酒精30分钟95%酒精30分钟100%酒精30分钟100%酒精30分钟二甲苯15分钟二

石蜡切片黑色素去色(bleach)试剂盒

  石蜡切片黑色素去色(bleach)试剂盒产品说明书(中文版)   主要用途   YIJI石蜡切片黑色素去色(bleach)试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法的基础上,通过氧化剂处理,使黑色素由棕色变成无色,来识别存档中的石蜡包埋组织切片中黑色素成分的权威而经典的技术方法。该技术经过精

石蜡切片的酶免疫组化注意事项

一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象?一般来说,如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话,如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法:1.一般用APES:丙酮=1:50的处理液来处理片子,处理5min左右,然后水洗,烘干既可用于贴

石蜡切片的酶免疫组化注意事项

   一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象?   一般来说,如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话,如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法:   1.一般用APES:丙酮=1:50的处理液来处理片子,处理5min左右,然

石蜡切片免疫荧光TUNEL和NEUN双标染色

石蜡切片免疫荧光TUNEL和NEUN双标染色曾经作过脑组织的TUNEL,也指导过别人做心肌的TUNEL,谈谈我的意见:蛋白酶K37度30min,好像有点偏长,我是10min。你是NBT/BICP显色的话,这说明你用的是AP系统,而不是HRP这样的话就不是用3%H2O2来去除内源性酶的了,(H2O2是

植物徒手切片与植物细胞结构观察

[目的要求] 1.掌握植物  徒手切片技术。 2.观察认识植物细胞的基本结构,质体的形态。 3.认识和鉴定植物细胞内常见的后含物。 [材料用品] 材料:洋葱鳞茎或番茄果实、葫芦藓叶、红辣椒、鸭跖草叶片、马铃薯块茎、蓖麻种子、花生种子。 用品:I-KI溶液、苏丹溶液、显微镜

植物徒手切片与植物细胞结构观察

[目的要求] 1.掌握植物  徒手切片技术。 2.观察认识植物细胞的基本结构,质体的形态。 3.认识和鉴定植物细胞内常见的后含物。 [材料用品] 材料:洋葱鳞茎或番茄果实、葫芦藓叶、红辣椒、鸭跖草叶片、马铃薯块茎、蓖麻种子、花生种子。 用品:I-KI溶液、苏丹溶液、显微镜

电脑冷冻石蜡切片机常见问题及保养说明

   对于电脑冷冻石蜡切片机的使用要做好日常检查和维护。平时应经常检查传动机械部件连接是否牢固,螺丝有无松动,机器运转是否流畅,如发现问题要及时解决。刀片使用一段时间后,直径会变小,当刀口离定尺板大时,需松开定尺板背面的紧固螺钉,朝刃口移动定板尺,距刃口2mm间隙为宜,然后拧紧螺钉。注意当刀片直径小

电脑冷冻石蜡切片机常见问题及保养说明

  对于电脑冷冻石蜡切片机的使用要做好日常检查和维护。平时应经常检查传动机械部件连接是否牢固,螺丝有无松动,机器运转是否流畅,如发现问题要及时解决。刀片使用一段时间后,直径会变小,当刀口离定尺板大时,需松开定尺板背面的紧固螺钉,朝刃口移动定板尺,距刃口2mm间隙为宜,然后拧紧螺钉。注意当刀片直径小时

石蜡切片淀粉样蛋白(AMYLOID)硫磺素T(thioflavine-T)荧...

石蜡切片淀粉样蛋白(AMYLOID)硫磺素T(thioflavine T)荧光染色试剂盒使用说明主要用途YIJI石蜡切片淀粉样蛋白(AMYLOID)硫磺素T(thioflavine T)荧光染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和硫磺素T染色技术,与淀粉样蛋白结合,来分析存档中的石蜡包埋

石蜡切片效果不佳的八大补救措施

之前和大家分享了如何切出符合自己需求的石蜡切片,那切片不佳是什么原因造成的?常见切片问题有哪些?如何补救? 一、蜡带侧弯——问题分析及补救措施   1、刀口锋利不一,局部产生差异。可移动刀片或改用新刀口。2、切片刀未覆盖整个蜡块。需调整刀口位置至刀片能切到整个蜡块。3、蜡块左右硬度不一致。尽量使用锋

植物细胞结构与植物徒手切片观察试验

实验方法原理1.  了解植物细胞形态的多样性;简易染色技术。 2.  掌握植物细胞的结构和植物徒手切片技术。 3.  识别和鉴定植物细胞中常见的后含物。  实验材料洋葱                                                                

植物细胞结构与植物徒手切片观察试验

实验方法原理1.  了解植物细胞形态的多样性;简易染色技术。2.  掌握植物细胞的结构和植物徒手切片技术。3.  识别和鉴定植物细胞中常见的后含物。 实验材料洋葱青辣椒红辣椒马铃薯块茎鸭跖草菠菜叶山楂番茄麦粒蓖麻扁豆花苹果种子根试剂、试剂盒甲基蓝碱性紫间苯三酚酒精氢氟酸蒸馏水仪器、耗材显微镜解剖镜刀

植物细胞结构与植物徒手切片观察试验(一)

实验方法原理 1.  了解植物细胞形态的多样性;简易染色技术。2.  掌握植物细胞的结构和植物徒手切片技术。3.  识别和鉴定植物细胞中常见的后含物。实验材料 洋葱青辣椒红辣椒马铃薯块茎鸭跖草菠菜叶山楂番茄麦粒蓖麻扁豆花苹果种子根试剂、试剂盒 甲基蓝碱性紫间苯三酚酒精氢氟酸蒸馏水仪器、耗材 显微镜解

植物细胞结构与植物徒手切片观察试验(二)

5.  植物细胞的内含物观察(1)淀粉粒 取马铃薯块茎做徒手切片,先在低倍镜下观察,可见到其薄壁细胞中含有许多白色 的颗粒即淀粉粒。换高倍镜观察,可以看到淀粉粒的轮纹,并可找到具有两个脐的淀粉粒。 (2)贮藏蛋白质取蓖麻种子,剥去种皮,用肥厚的胚乳做徒手切片。先把切片放入盛有纯酒精的培养皿中洗涤数分

用于PCR的模板DNA制备实验——改进的石蜡切片-DNA-提取方法

实验步骤1. 5 μm 厚的石蜡切片 5 至 10 张贴在干净的载玻片上,常规烘片,脱蜡,水化,蒸馏水清洗,无菌蒸馏水浸泡,取出晾至半干。2. 无菌尖头刀片刮下,放入 300~900 μl 组织裂解液中,并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K(PK)10~15 μl,封口膜封口,置 55℃ 3 h 以

石蜡切片在染色过程中出现脱片现象如何处理?

1)烤片时间不够,或温度不够,可以延长烤片时间和提高烤片温度;2)用含有多聚赖氨酸的玻片,可以购买到或这自己做;3)有些组织本身就容易掉片,如骨组织等,操作时冲PBS不要直接冲到组织上,冲到组织上方,让它流下冲洗组织;4)用高温修复时,温度骤冷也可能引起。

石蜡切片黑色素去色(bleach)试剂盒使用说明

主要用途YIJI石蜡切片黑色素去色(bleach)试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法的基础上,通过氧化剂处理,使黑色素由棕色变成无色,来识别存档中的石蜡包埋组织切片中黑色素成分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于各种石蜡包埋组织切片中的黑色素成分,尤

如何切出理想的石蜡切片固定与脱水操作的重要性

石蜡切片是组织学常规制片技术中应用最为广泛的方法。但在石蜡切片过程中,经常会遇到一些问题:修整蜡块总修不平整?切片时容易碎片、翻卷?摊片时总是铺不平整?今天和大家分享如何切出符合需求的石蜡切片!01正确固定组织离体后,必须在1小时内固定。固定液须是组织体积的4-10倍,浓度准确,过稀或过浓都会影响组

石蜡切片神经元高尔基法快速染色试剂盒使用说明

石蜡切片神经元高尔基法快速染色试剂盒产品说明书(中文版)主要用途石蜡切片神经元高尔基法快速染色试剂是一种旨在使用亲银还原技术,分析固定处理的石蜡包埋组织切片中神经元(neuron)、锥体细胞(pyramidal cell)、胶质细胞(glia cell)、少突触胶质细胞(oligodendr