斑点金免疫渗滤试验原理
斑点免疫渗滤试验的基本原理是:以硝酸纤维素膜为载体,利用微孔滤膜的可滤过性,使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。斑点免疫渗滤试验最初是从斑点ELISA基础上发展起来建立的,应用的结合物是酶标记的,称为斑点酶免疫渗滤试验。90年代初发展了以胶体金为标记物的斑点免疫渗滤试验(dotymmunogoldfiltrationassay,DIGFA),又名滴金免疫测定法(简称滴金法)。在滴金法中不需酶对底物的反应,更加简便、快速,在临床检验中应用日渐广泛。 原理 以双抗体夹心法为例。在硝酸纤维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体,为膜所吸附。当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时,标本中含抗原被膜上抗体捕获,其余无关蛋白等没滤出膜片。其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上的抗原相结合。因胶体金本身呈红色,阳性反应即在膜中央显示红色斑点。......阅读全文
金免疫技术(斑点免疫层析试验)
一、原理金免疫技术是免疫标记技术之一,金盐被还原成原子金后形成金颗粒悬浮(胶体金),这种金颗粒呈红色,并能与蛋白质等大分子物质结合,因此,可用胶体金作为标记物来检测标本中的抗原或抗体。典型的测定方法有斑点买免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等。二、材料1 、HCG金标试纸条2、妊娠尿液 正常尿液三、方法
斑点金免疫渗滤试验原理
斑点免疫渗滤试验的基本原理是:以硝酸纤维素膜为载体,利用微孔滤膜的可滤过性,使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。斑点免疫渗滤试验最初是从斑点ELISA基础上发展起来建立的,应用的结合物是酶标记的,称为斑点酶免疫渗滤试验。90年代初发展了以胶体金为标记物的斑点免疫渗
斑点金免疫渗滤测定(DIGFA)实验
实验方法原理 斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上,改用胶体金标记物代替酶,省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜(NC膜)为载体,将试剂及标本滴加在膜上,通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成,阳性结果在膜上呈红色斑点。实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 PBS吐温-20BSA
斑点金免疫渗滤测定(DIGFA)实验
实验方法原理斑点金免疫渗滤测定实验是在斑点免疫渗滤测定法基础上,改用胶体金标记物代替酶,省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜(NC膜)为载体,将试剂及标本滴加在膜上,通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成,阳性结果在膜上呈红色斑点。实验材料细胞样品试剂、试剂盒 PBS吐温-20BSA特异
常用的免疫胶体金检测技术斑点免疫金渗滤法
斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜(如膜)作载体,先将抗原或抗体点于膜上,封闭后加待检样本,洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。
胶体金快速斑点免疫分析2
四、胶体金块快速免疫结合分析的应用应用领域很广,可分为临床应用与非临床应用两类。目前应用多以前者为主。1、临床应用 已应用于临床的很多领域。由于目前它还是定性分析,故主要用以检测正常体认中不存在的生物活性物质(如传染病的抗原及抗体),以及正常情况下体液中含量很低而在某些疾病中升高的生物活性物质。
胶体金快速斑点免疫分析1
随着免疫分析日益广泛应用于以临床为主以及非临床领域的诊断工业(diagnostic industry),免疫分析向两个方向发展:一类为全自动化的免疫分析;另一类为以硝酸纤维膜为载体的快速免疫分析。前者需要价格昂贵的全自动仪器及与仪器严格配套的各种试剂盒,目前只能在医疗及检测中心应用,虽也能较快速
免疫学技术专题:斑点金免疫渗滤测定法(DIGFA)
基本原理斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上,改用胶体金标记物代替酶,省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜(NC膜)为载体,将试剂及标本滴加在膜上,通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成,阳性结果在膜上呈红色斑点。试剂及材料1. 渗滤装置:为一塑料小盒(4x3x0.6cm
金标免疫斑点法检测肺炎支原体感染及应用
张化涛 (胜利石油管理局临盘医院 山东 临邑 251507) 肺炎支原体(Mp)是引起呼吸道感染的致病微生物,它除了引起非典型肺炎外,还可以引起上呼吸道感染。由于MP对一般治疗肺炎、上呼吸道感染的药物有耐药性,因此及时进行支原体抗体检测有助于明确诊断和治疗。我们采用金标免疫斑点法检测患
斑点免疫层析试验原理
原理 斑点免疫层析试验(dotimmunochromatographicassay,DICA)简称免疫层析试验(ICA),也以硝酸纤维素膜为载体,但利用了微孔膜的毛细血管作用,滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移,犹如层析一般
酶联免疫斑点实验(ELIspot)——酶联免疫斑点实验(ELIspot)
实验材料血液样品细胞样品试剂、试剂盒70%乙醇PBS脱脂奶粉链霉亲和素检测抗体包被抗体仪器、耗材PVDF膜96孔培养板硝基纤维素底板免疫斑点板酶标板实验步骤一、包被96孔板 用70%乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30 s 加入捕获抗体(PBS稀释),4℃过夜 倒空板中包被液,轻轻在纸上拍干,用PBS
酶联免疫斑点实验(ELIspot)_酶联免疫斑点实验(ELIspot)2
实验方法原理ELISPOT技术原理,一句话概括就是:用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子,并以酶联斑点显色的方式将其表现出来。实验材料细胞试剂、试剂盒PBSPBST乙醇包被抗体封闭液抗体稀释液检测抗体酶联亲和素AEC显色液PHA刺激物U-Cytech无血清培养基仪器、耗材ELISPOT读数仪超净工作
斑点免疫层析试验的原理
原理:免疫层析试验的原理与免疫渗滤相同,不同点在于液体的移动不是通过直向的穿流,而是基于层析作用的横流。在一塑料片条上依次粘贴如下组分:①吸水纸;②玻璃纤维膜,膜上固定着干燥的金标抗体;③硝酸纤维素膜,膜上包被着线条状的抗体;④吸水纸。
免疫斑点试验的原理
硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。因而,将抗原吸附于纤维素膜后,就可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。当加入抗体后(即可与膜上的抗原结合,犎;后再加入带有标记物的抗体,使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。加入标记
斑点免疫渗滤试验(dotymmunogoldfiltrationassay,DIGFA)
斑点免疫渗滤试验的基本原理是:以硝酸纤维素膜为载体,利用微孔滤膜的可滤过性,使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。斑点免疫渗滤试验最初是从斑点ELISA基础上发展起来建立的,应用的结合物是酶标记的,称为斑点酶免疫渗滤试验。90年代初发展了以胶体金为标记物的斑点免疫渗滤
免疫印迹技术和免疫斑点技术
免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳与固相免疫结合,首先通过蛋白质电泳技术将需要区分的蛋白质转移至固相载体如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子质量,常用于检测多种病毒抗体或抗原。免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳
斑点酶联免疫吸附测定
实验概要斑点酶联免疫吸附测定法(DotELISA,DELISA)是以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。DELISA不仅保留了常规ELISA的优点,而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不牢等不足,所以具有敏感性高,特异性强,被检样品用量少,节省材料,不需特殊仪
斑点酶联免疫吸附测定
实验概要斑点酶联免疫吸附测定法(DotELISA,DELISA)是以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。DELISA不仅保留了常规ELISA的优点,而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不牢等不足,所以具有敏感性高,特异性强,被检样品用量少,节省材料,不需特殊仪
斑点免疫渗滤试验的方法类型
1.双抗体夹心法测抗原:用抗体结合在微孔滤膜中央,滴加待检标本,抗原抗体反应后,滴加金标抗体,加洗涤液洗涤后,阳性者即在膜中央呈红色斑点。 2.间接法测特异性抗体:用抗原包被在微孔滤膜上,滴加待测标本,滴加洗涤液洗涤后,滴加金标抗抗体,加洗涤液洗涤后,阳性者即在膜中央呈红色斑点。该法由于血清标
斑点免疫渗滤试验(IFA)的原理
用于检测各种传染病的抗体和肿瘤标记物等,以及用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试剂。 原理:将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素薄膜上,将膜贴于吸水材料上,依次在膜上滴加标本、免疫胶体金及洗涤液等试剂进行抗体或抗原反应,过量试剂很快渗入吸水材料中。 抗原抗体反应后,形成大分子胶体金复合物,
酶联免疫斑点(ELISPOT)-FAQ
第一部分:关于ELISPOT1. 什么是ELISPOT检测?答:酶联免疫斑点 ( enzyme-linked immunosorbent spot, ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。淋巴细胞在体内被抗原激活后,或者在体外培养
斑点酶联免疫吸附测定
实验概要斑点酶联免疫吸附测定法(DotELISA,DELISA)是以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。DELISA不仅保留了常规ELISA的优点,而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不牢等不足,所以具有敏感性高,特异性强,被检样品用量少,节省材料,不需特殊仪
斑点免疫渗滤试验(IFA)的原理
用于检测各种传染病的抗体和肿瘤标记物等,以及用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试剂。原理:将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素薄膜上,将膜贴于吸水材料上,依次在膜上滴加标本、免疫胶体金及洗涤液等试剂进行抗体或抗原反应,过量试剂很快渗入吸水材料中。抗原抗体反应后,形成大分子胶体金复合物,从而使阳性结
酶联免疫斑点实验(ELIspot)
实验材料 血液样品细胞样品试剂、试剂盒 70%乙醇PBS脱脂奶粉链霉亲和素检测抗体包被抗体仪器、耗材 PVDF膜96孔培养板硝基纤维素底板免疫斑点板酶标板实验步骤 一、包被96孔板 用70%乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30 s 加入捕获抗体(PBS稀释),4℃过夜 倒空板中包被液,轻轻在纸上拍干,
免疫酶染色试验——斑点免疫酶染色法
斑点免疫酶染色法 (dot-ELISA)实验 (以检测轮状病毒抗原为例说明)实验方法原理该技术是进行 ELISA 测定时,借用了免疫印迹技术的某些原理和方法,利用硝酸纤维素膜为固相载体,使抗原抗体反应在膜上进行,结合在硝酸纤维素膜上的酶抗体结合物通过将底物分解成不溶性的产物而沉积,在硝酸纤维素膜上形
免疫金染色
中文名称免疫金染色英文名称immuno-gold staining定 义将用胶体金(直径大于20 nm)标记的间接抗体或A蛋白再与特异性抗体结合,在光镜下就可见红色的反应物出现,不需进行呈色反应的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
胶体金在快速斑点渗滤技术中的应用
ELISA法在临床实验室已得到普遍的应用,特别是用于各型肝炎标志物的检测。但ELISA法由于操作程序复杂,时间较长,需要洗板机、酶标检测仪等贵重仪器。给实验室带来不便。ELISA法需时较长的主要原因,是由于液相中的抗原(或抗体)需经扩散才能与固相上的抗原或抗体反应,不适当地缩短反应时间,将使灵敏度降
什么是酶联免疫斑点试验
常用于类风湿因子、IFN-γ等细胞因子分泌细胞的定量测定。 在作ELISPOT时,选择的特异性抗体应该具有高亲和力、高特异性、低内毒素的特性。选用的细胞激活物必须不影响细胞的分泌功能。
ELISPOT酶联免疫斑点分析简介
ELISPOT 技术简介 随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或抗体,但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同,使之在体液中
斑点免疫渗滤试验(IFA)的方法类型
1.双抗体夹心法测抗原:用抗体结合在微孔滤膜中央,滴加待检标本,抗原抗体反应后,滴加金标抗体,加洗涤液洗涤后,阳性者即在膜中央呈红色斑点。2.间接法测特异性抗体:用抗原包被在微孔滤膜上,滴加待测标本,滴加洗涤液洗涤后,滴加金标抗抗体,加洗涤液洗涤后,阳性者即在膜中央呈红色斑点。该法由于血清标本中非目