免疫组化实验原理和步骤（二）
免疫组化问题解答1、染色过强 a 抗体浓度过高戒孵育时间过长 。降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时、或4度过夜 b 孵育温度过高超过37度。 一般在室温20-28度 c DAB显色时间过长戒浓度过高 显色时间不超过5-12分钟，以显微镜下观察为准。2、非特异性背景染色a 操作过程中冲洗不充分 ：每步冲洗3次每次5分钟。b 组织中含过氧化物酶未阻断：可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长。c 组织中含内原性生物素：正常非免疫动物血清再封闭。d 血清蛋白封闭不充分：延长血清蛋白封闭时间。3、染色弱a 抗体浓度过低、孵育时间过短：提高抗体浓度、孵育时间不能少于60分钟。b 试剂超过有效使用时间：应更换试剂。c 操作中添加试剂时缓冲液未沥干：每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液使试剂稀释（应防止切片干燥）。d 室温太低：低于15度，要改放在37度孵育箱孵育30-60分钟，或4度冰箱过夜。e蛋白封闭过度：封闭不要......阅读全文
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
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一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
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一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
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免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
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一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度
免疫组化的一抗和二抗浓度和孵育时间有什么要求
一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
尿液沉渣组化定位的进展
经常在泌尿系统疾病中见到的沉渣有各种管型、粘液丝、红细胞等，确定其来源，明确病变部位对诊断和治疗都有重要意义，目前临床常用的相差显微镜法和光镜染色法，人为因素影响较大，最终难于明确诊断，近年国内外多人报道应用免疫细胞化学染色法判断尿沉渣成分，较为科学的确定其是肾性还是非肾性沉渣。 一、尿红细胞免
免疫纯化实验
实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区， 所以结合抗原的部位获得充分暴露，从易于接近。免疫亲和柱制备完成后，抗原溶液即可以上样，接着洗去污染物，然后洗脱抗
免疫PCR实验
实验方法原理 免疫PCR主要由两个部分组成，第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验（ELISA）的测定过程；第二部分即通常的PCR检测，抗原分子的量最终由PCR产物的多少来反映。第一步中，首先用待测抗原（如牛血清白蛋白（ESA））包被微滴板孔，再加入相应的特异抗体，于是抗体就与固相上的抗原结
免疫纯化实验
在蛋白质纯化方法中抗体亲和纯化是非常有效的方法之一。仅此一步常可获得 1000～10 000 倍的纯化。如果抗体与目的蛋白的结合的特异性得到证明，并且洗脱的目的蛋白没有受到不可逆的损伤，那么可以认为免疫纯化是极好的蛋白质纯化方法，特别是用在纯化过程的最后步骤。实验方法原理制备免疫亲和柱要求抗体首先共
核酸免疫实验
基 本 方 案 1 小 鼠 注 射 接 种DNA在免疫前应先阅读动物处理（附 录 2C) 和 接 种 的（附 录 2E) 指导说明。在正式实验之前需先进行肌肉和皮下注射练习； D N A 的精准注射对于免疫成功起关键作用。可以 用 India ink (或相同的染料）来定位注射的部位是否正确。材料2
核酸免疫实验
介绍了用表达抗原的 DNA 增强免疫应答的途径。介绍了核酸免疫的两种方法：①注射含有 DNA 表达载体的生理盐水；② 用 基 因 枪 注 射 DNA。还包括了基因枪方法中使用的 DNA 包被金珠的制备和保存方法。实验步骤基 本 方 案 1 小 鼠 注 射 接 种DNA在免疫前应先阅读动物处理（附 录
小鼠免疫实验
实验方法原理 实验材料 任意品系小鼠（6～8 周）试剂、试剂盒 PBS完全和不完全弗氏佐剂抗原仪器、耗材 22－G 注射针头带塞的 3 ml 注射器双头带塞的连接器无菌剪刀剃须刀片解剖刀片木制涂棒实验步骤 1. 准备等体积 PBS 含 25～100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液（200～40
动物免疫实验
实验概要将某种蛋白注射新西兰大耳兔产生免疫反应，通过ELISA检测免疫产生的抗体。实验原理将抗原吸附在固相载体表面，加入抗血清，抗体和抗原在载体表面形成抗原-抗体复合物，洗去未结合抗体，然后加入辣根过氧化物酶标记的二抗（抗体的抗体），二抗与抗体结合，洗去未结合二抗，加底物显色剂显色，在一定波长下测定
免疫纯化实验
实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区， 所以结合抗原的部位获得充分暴露，从易于接近。免疫亲和柱
动物免疫实验
实验概要将某种蛋白注射新西兰大耳兔产生免疫反应，通过ELISA检测免疫产生的抗体。实验原理将抗原吸附在固相载体表面，加入抗血清，抗体和抗原在载体表面形成抗原-抗体复合物，洗去未结合抗体，然后加入辣根过氧化物酶标记的二抗（抗体的抗体），二抗与抗体结合，洗去未结合二抗，加底物显色剂显色，在一定波长下测定
牛C反应蛋白（CRP）elisa免疫组化试剂盒样本处理及要求
牛C反应蛋白（CRP）elisa免疫组化试剂盒样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右
碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP）免疫组化染色技术
实验方法原理APAAP（Alkaline phosphatase-anti-alkaline phosphatase technique）技术的基本原理为：抗鼠IgG抗体作为桥梁，将鼠源性识别细胞抗原的第一抗体与鼠源性的抗碱性磷酸酶单克隆抗体-碱性磷酸酶复合物相连接，使之成为Ag，-Ab1－Ab2-
石蜡切片抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）免疫组化染色试剂..
石蜡切片抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）免疫组化染色试剂盒说明主要用途石蜡切片抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）免疫组化染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和免疫抗体显色技术，即通过抗酒石酸酸性磷酸酶多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，使用染料二氨基联苯胺染色显示棕褐色，分析存档中的石蜡包埋
免疫学实验免疫学实验细胞免疫检查介绍介绍
隐球菌病胶乳凝集试验介绍： 胶乳凝集试验检测新生隐球菌荚膜多糖抗原，是一种简便、快速、有效诊断隐球菌感染的实验室方法。它以胶乳颗粒为载体，表面连接有抗新生隐球菌抗体，形成致敏胶乳悬液， 如标本(血清、胸腔积液、支气管肺泡灌洗液或脑脊液)中含有一定量的隐球菌荚膜多糖抗原，则可产生肉眼可见的凝
家蚕基因组生物学实验室：家蚕研究－化茧成蝶
夯实家蚕遗传资源和遗传学基础研究，是解决我国蚕业可持续发展的关键。 在蚕学发展的每一个关键环节，科学基金都起到重要的引导和支撑作用。 我国科学家以现代科学技术“重建21世纪丝绸之路”的宏伟目标正逐步成为现实。 不久前，全国蚕桑界唯一国家重点实验室——家蚕基因组生物
免疫组化非特异性染色的主要因素和消除方法1
一、非特异性染色的主要因素组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forss
酶标抗体和酶抗酶复合物的应用于免疫酶组化技术
酶标抗体和酶-抗酶复合物的应用于免疫酶组化技术（APAAP法）【基本原理】 碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶染色法(APAAP法)，是一种免疫组化技术。用兔抗鼠IgG起搭桥作用，其中一个Fab段连接McAb ，另一个Fab段连接APAAP复合物，再通过复合物中的碱性磷酸酶催化底物显色来判断
免疫组化非特异性染色的主要因素和消除方法2
（二）透析法荧光素如FITC分子可以通过半透膜，而蛋白质大分子不能透过，可将未与蛋白结合的荧光素透析除去。（1）将标记完毕的荧光蛋白液装入一透析袋或玻璃纸袋内，液面稍留空隙，紧扎。（2）浸入0.02mol/pH。7.1~7.4的PBS中（悬于大于标记物体积约50~100倍的PBS内），在4℃中透析，
免疫组化法检测细胞内表达的各种蛋白的标志物介绍
①S100蛋白:S100蛋白是一组低分子量的钙结合蛋白，相对分子量为10x103~12x103，其氨基酸序列在脊椎动物中高度保守，与钙调蛋白具有高度同源性。目前，共发现有20种结构与功能相似、存在于不同部位，可以调节细胞内和细胞外Ca2+的S100蛋白，包括S100A1~S100A13,S100