P1噬菌体转导试剂盒使用说明
P1噬菌体转导试剂盒产品说明书(中文版)主要用途P1噬菌体转导试剂是一种旨在通过供体大肠杆菌制备具有部分细菌基因的噬菌体,感染特定受体大肠杆菌,获得细菌之间基因片段的转移,而获得遗传重组的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于通用型非特异性基因片段的转导。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,转导效率高。技术背景噬菌体(bacteriophage或phage)是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物,并使其细胞裂解死亡的病毒,本世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现。噬菌体具有病毒的一些特性:个体微小,可以通过滤菌器;没有完整的细胞结构,主要由蛋白质构成的衣壳和包含于其中的核酸组成;只能在活的微生物细胞内复制增殖,是一种专性细胞内寄生的微生物。在含细菌的固体培养基上,噬菌体使细菌细胞裂解而形成的空斑,称为噬菌斑。每个空斑都是由一个噬菌体颗粒一再侵染、增殖、裂解所形成的,故可用于进行噬菌体的计数。由于噬菌体结构......阅读全文
P1噬菌体转导试剂盒使用说明
P1噬菌体转导试剂盒产品说明书(中文版)主要用途P1噬菌体转导试剂是一种旨在通过供体大肠杆菌制备具有部分细菌基因的噬菌体,感染特定受体大肠杆菌,获得细菌之间基因片段的转移,而获得遗传重组的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于通用型非特异性基因片段的转导。产品严格无菌,即
P1-噬菌体普遍性转导实验
实验方法原理细菌病毒(噬菌体)分为烈性噬菌体和温和噬菌体。烈性噬菌体感染细胞后,伴随着细胞裂解会释放出新的子代噬菌体颗粒。被温和噬菌体感染的细胞或是裂解,释放出新的子代噬菌体颗粒,或是成为溶源状态,噬菌体的基因组整合到细菌染色体上,与细菌染色体一起复制,这时的噬菌体基因组称为原噬菌体(prophag
P1-噬菌体普遍性转导实验
实验方法原理 细菌病毒(噬菌体)分为烈性噬菌体和温和噬菌体。烈性噬菌体感染细胞后,伴随着细胞裂解会释放出新的子代噬菌体颗粒。被温和噬菌体感染的细胞或是裂解,释放出新的子代噬菌体颗粒,或是成为溶源状态,噬菌体的基因组整合到细菌染色体上,与细菌染色体一起复制,这时的噬菌体基因组称为原噬菌体(propha
P1噬菌体介导的普遍性转导(generalized-transduction)1
一、原理大肠杆菌可以利用噬菌体为媒介,将供体细胞DNA转移给受体细胞,从而使受体细胞的基因型和表现型发生改变,这一过程称为转导。由类似噬菌体P1和P2介导的转导,能够转移供体染色体上任何一个基因,称为普遍性转导;由λ噬菌体等为媒介的转导,只能转导半乳糖发酵基因等少数基因,称为局限性转导。P1噬菌体的
P1噬菌体介导的普遍性转导(generalized-transduction)2
3、第三天,当噬菌体充分增殖后,将平板表面的半固体培养基转移到无菌的三角瓶中,加入5-10ml LB液体培养基和几滴氯仿,剧烈振荡20秒后离心(3000rpm, 10分钟),上清液即为P1 cml, clr100裂解液。4、将上清液移到无菌试管中,加入几滴氯仿,再次剧烈振荡20秒,于4℃保存。(二)
P1噬菌体的特点
噬菌的PI一个独特的特点是那在其他噬菌体期间,溶原性它的染色体没有被合并到细菌染色体里的溶原性期间和共同地被观察。 反而, P1在细菌细胞之内独立地存在,很象a 质粒会。 P1复制品作为90 kilobase(千字节)质粒在生成溶胞素的状态和相等地被分成入二个新的女儿细胞在法线期间 细胞分裂.
P1噬菌体的概述
温和噬菌,例如P1,有能力在之内存在 细菌 细胞他们传染用二别的方法。 在 溶原性P1可能在一个细菌细胞之内存在作为a prophage因为它存在 复制用主人 染色体并且不导致细胞死亡。 二者择一地,在它 细胞溶解阶段, P1可能促进细胞 病势渐退在成长期间造成寄主细胞死亡。 在溶原性期间新的噬
简述P1噬菌体的特点
噬菌的PI一个独特的特点是那在其他噬菌体期间,溶原性它的染色体没有被合并到细菌染色体里的溶原性期间和共同地被观察。 反而, P1在细菌细胞之内独立地存在,很象a 质粒会。 P1复制品作为90 kilobase(千字节)质粒在生成溶胞素的状态和相等地被分成入二个新的女儿细胞在法线期间 细胞分裂.
关于P1噬菌体的基本介绍
温和噬菌,例如P1,有能力在之内存在 细菌细胞他们传染用二别的方法。 在 溶原性P1可能在一个细菌细胞之内存在作为a prophage因为它存在 复制用主人 染色体并且不导致细胞死亡。 二者择一地,在它 细胞溶解阶段, P1可能促进细胞 病势渐退在成长期间造成寄主细胞死亡。 在溶原性期间新的噬菌
P1噬菌体及其克隆系统的应用
实验方法原理 P1 噬菌体与 λ 噬菌体同年被发现(Bertani 1951)。两种噬菌体在天然宿主中都是温和噬菌体,它们在实验室的研究历程也几乎相同。λ 噬菌体一经被发现,立刻就被当时有影响的实验室选作分子水平研究溶原性噬菌体的模型。
P1噬菌体及其克隆系统的应用
实验方法原理 P1 噬菌体与 λ 噬菌体同年被发现(Bertani 1951)。两种噬菌体在天然宿主中都是温和噬菌体,它们在实验室的研究历程也几乎相同。λ 噬菌体一经被发现,立刻就被当时有影响的实验室选作分子水平研究溶原性噬菌体的模型。实验材料 限制性内切核酸酶大肠杆菌菌株试剂、试剂盒 乙醇IPTG
P1噬菌体及其克隆系统的应用
P1 噬菌体与 λ 噬菌体同年被发现(Bertani 1951)。两种噬菌体在天然宿主中都是温和噬菌体,它们在实验室的研究历程也几乎相同。λ 噬菌体一经被发现,立刻就被当时有影响的实验室选作分子水平研究溶原性噬菌体的模型。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理P1 噬菌体与 λ
概述λ噬菌体的整合和转导噬菌体的形成机制
λ噬菌体的整合和转导噬菌体的形成机制首先由A·坎贝尔所推测,以后经实验证明。 当用λ噬菌体转导发酵乳糖的基因时,大约10^6 被感染的细菌中出现一个转导子。这一事实说明大约10^6 噬菌体中只有一个带有发酵乳糖的基因,这是低频转导。当λ噬菌体整合到寄主细胞后,带有发酵乳糖基因的λ噬菌体也整合到
解释噬菌体的局限性转导
在转导过程中,如所转导的只限于供体菌染色体上特定的基因,则称为局限性或特异性转导,也可以说只能使供体的一个或少数几个基因以噬菌体为媒介转移到受体的转导作用称为局限性转导。局限性转导与普遍性转导的主要区别: 1) 被转导的基因共价地与噬菌体DNA连接,与噬菌体DNA一起进行复制、包装以及被导入受体
λ噬菌体的局限性转导实验
λ噬菌体是一种温和噬菌体,在大肠杆菌宿主细胞内其DNA可整合在宿主染色体上,如同细菌的基因一样传递给子代细胞,此为溶原状态。在溶原菌中,λ噬菌体有两种选择:①溶原生长:即继续维持其溶原状态;②裂解生长:在某些物理化学等因素的诱导下,λ噬菌体借助宿主细胞的酶系统,开始有序的复制、转录、表达,装配成完整
l噬菌体介导的局限性转导
一、原理大肠杆菌l噬菌体的DNA,既可以自主存在于宿主菌中,也可以整合在细菌染色体中,完成溶源化过程。多数温和噬菌体整合进细菌染色体中时都有一特定的位置。大肠杆菌l噬菌体的原噬菌体附着在寄主染色体半乳糖操纵子基因gall被诱导出来时,大约106个l噬菌体中有一个被反常切除,而携带半乳糖或生物素基因脱
噬菌体转导实验原理、材料和实验步骤(二)
四、实验步骤 1、噬菌体的诱导和裂解液的制备 ( 1 ) 供菌体的活化与培养:取一环供体菌,接种于盛有 5 ml 肉汤液体培养基的三角瓶中, 37 ℃培养 16 h 后,吸 0.5 ml 菌液,接种于盛有 4.5 ml 肉汤液体培养基的三角瓶中,继续培养 4-6 h 。 (
噬菌体转导实验原理、材料和实验步骤(一)
一、实验目的 以局限性转导为例来说明转导的基本原理,进一步验证 DNA是遗传物质,并初步掌握转导实验的基本方法。 二、实验原理与意义 转导是以噬菌体为媒介将一个细胞的遗传物质转移给另一个细胞的过程。随着分子遗传学的发展,转导已成为基因精细结构分析的常用方法。 转导实验中常用的是λ噬菌
P1-噬菌体克隆在大肠杆菌宿主间的转移
从不同大肠杆菌菌株中获得的 P1 噬菌体 DNA 的产量与质量取决于宿主菌的基因型和重组子中外源 DNA 的特定序列。将 P1 或 PAC 重组子转化到不表达 Cre 重组酶的大肠杆菌菌株中有时可以解决低产或劣质的问题(如 NS3516; Sternberg et al. 1994)。本实验来源「分
P1-噬菌体克隆在大肠杆菌宿主间的转移
实验方法原理 从不同大肠杆菌菌株中获得的 P1 噬菌体 DNA 的产量与质量取决于宿主菌的基因型和重组子中外源 DNA 的特定序列。将 P1 或 PAC 重组子转化到不表达 Cre 重组酶的大肠杆菌菌株中有时可以解决低产或劣质的问题(如
P1-噬菌体克隆在大肠杆菌宿主间的转移
实验方法原理 从不同大肠杆菌菌株中获得的 P1 噬菌体 DNA 的产量与质量取决于宿主菌的基因型和重组子中外源 DNA 的特定序列。将 P1 或 PAC 重组子转化到不表达 Cre 重组酶的大肠杆菌菌株中有时可以解决低产或劣质的问题(如 NS3516; Sternberg et al. 19
关于普遍性转导的基本介绍
噬菌体能传递供体细菌的任何基因的转导。鼠伤寒沙门氏菌的P22噬菌体、大肠杆菌P1噬菌体、枯草杆菌的PBS1、PBS2、SP10噬菌体都是普遍性转导噬菌体。由普遍性转导产生的转导子(即接受了噬菌体传递的供体细胞基因的受体细胞)不具溶源性,说明转导噬菌体中不带有完整的噬菌体染色体,却带有噬菌体在繁殖
基因转导的类别
普遍性转导转导噬菌体能传递供体细菌的任何基因的转导。鼠伤寒沙门氏菌的P22噬菌体、大肠杆菌P1噬菌体、枯草杆菌的PBS1、PBS2、SP10噬菌体都是普遍性转导噬菌体。由普遍性转导产生的转导子(即接受了噬菌体传递的供体细胞基因的受体细胞)不具溶源性,说明转导噬菌体中不带有完整的噬菌体染色体,却带有噬
BAC文库构建方法与技巧
基因组DNA文库有十分广泛的用途,如用于分析、分离特定的基因片段,用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离基因组DNA
BAC文库构建方法与技巧
基因组DNA文库有十分广泛的用途,如用于分析、分离特定的基因片段,用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。一、分离基因组DNA(gDNA)
BAC文库构建方法与技巧
基因组DNA文库有十分广泛的用途,如用于分析、分离特定的基因片段,用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离基因组DNA
基因组DNA文库构建的基本流程
基因组 DNA文库有十分广泛的用途,如用于分析、分离特定的基因片段,用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离基因组DN
基因组DNA文库构建必备实验技巧1
基因组DNA文库用途十分广泛,如用于人类及动植物基因组学研究,基因表达调控研究,分析、分离特定的基因片段等。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为四大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。一、分离基因组DNA(gDNA) 毫无
Elisa试剂盒使用说明
使用说明:1.样品准备a. 样品的准备请按下列流程进行操作:(a)细胞上清样品离心取上清即可(如100-500g,5分钟)。(b)对于血清样品,将全血在室温下放置30分钟至2小时,不要剧烈摇晃以免溶血,待全血自然凝固并析出血清后,4℃约1000-2000g离心10分钟,取黄色上清即得血清,注意不要吸
基因组DNA文库构建必备实验技巧
基因组DNA文库用途十分广泛,如用于人类及动植物基因组学研究,基因表达调控研究,分析、分离特定的基因片段等。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为四大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。一、分离基因组DNA(gDNA) 毫无