P1噬菌体介导的普遍性转导(generalizedtransduction)2
3、第三天,当噬菌体充分增殖后,将平板表面的半固体培养基转移到无菌的三角瓶中,加入5-10ml LB液体培养基和几滴氯仿,剧烈振荡20秒后离心(3000rpm, 10分钟),上清液即为P1 cml, clr100裂解液。4、将上清液移到无菌试管中,加入几滴氯仿,再次剧烈振荡20秒,于4℃保存。(二)P1 cml,clr100裂解液效价测定1、第三天,将30℃培养过夜的供体菌用10ml LB培养液按1:5稀释,30℃继续培养3小时。2、分别吸取0.2ml新鲜培养物加入10支干净无菌的试管中,编号。3、将待测噬菌体裂解液用LB培养液按1:10进行梯度稀释。4、从每个稀释液中吸取20ul分别加入含供体菌的试管中,混匀。5、于每支试管中加入3ml预平衡在50℃的LB半固体培养基,迅速摇匀后倒在LB固体培养基上,固化后37℃培养过夜。每组十一皿,其中一皿不加噬菌体作为对照。6、第四天,统计不同浓度噬菌体裂解液的噬菌斑数,记录结果。计算P1......阅读全文
P1噬菌体的概述
温和噬菌,例如P1,有能力在之内存在 细菌 细胞他们传染用二别的方法。 在 溶原性P1可能在一个细菌细胞之内存在作为a prophage因为它存在 复制用主人 染色体并且不导致细胞死亡。 二者择一地,在它 细胞溶解阶段, P1可能促进细胞 病势渐退在成长期间造成寄主细胞死亡。 在溶原性期间新的噬
P1噬菌体的特点
噬菌的PI一个独特的特点是那在其他噬菌体期间,溶原性它的染色体没有被合并到细菌染色体里的溶原性期间和共同地被观察。 反而, P1在细菌细胞之内独立地存在,很象a 质粒会。 P1复制品作为90 kilobase(千字节)质粒在生成溶胞素的状态和相等地被分成入二个新的女儿细胞在法线期间 细胞分裂.
简述P1噬菌体的特点
噬菌的PI一个独特的特点是那在其他噬菌体期间,溶原性它的染色体没有被合并到细菌染色体里的溶原性期间和共同地被观察。 反而, P1在细菌细胞之内独立地存在,很象a 质粒会。 P1复制品作为90 kilobase(千字节)质粒在生成溶胞素的状态和相等地被分成入二个新的女儿细胞在法线期间 细胞分裂.
关于P1噬菌体的基本介绍
温和噬菌,例如P1,有能力在之内存在 细菌细胞他们传染用二别的方法。 在 溶原性P1可能在一个细菌细胞之内存在作为a prophage因为它存在 复制用主人 染色体并且不导致细胞死亡。 二者择一地,在它 细胞溶解阶段, P1可能促进细胞 病势渐退在成长期间造成寄主细胞死亡。 在溶原性期间新的噬菌
P1噬菌体及其克隆系统的应用
实验方法原理 P1 噬菌体与 λ 噬菌体同年被发现(Bertani 1951)。两种噬菌体在天然宿主中都是温和噬菌体,它们在实验室的研究历程也几乎相同。λ 噬菌体一经被发现,立刻就被当时有影响的实验室选作分子水平研究溶原性噬菌体的模型。
P1噬菌体及其克隆系统的应用
实验方法原理 P1 噬菌体与 λ 噬菌体同年被发现(Bertani 1951)。两种噬菌体在天然宿主中都是温和噬菌体,它们在实验室的研究历程也几乎相同。λ 噬菌体一经被发现,立刻就被当时有影响的实验室选作分子水平研究溶原性噬菌体的模型。实验材料 限制性内切核酸酶大肠杆菌菌株试剂、试剂盒 乙醇IPTG
P1-噬菌体普遍性转导实验
实验方法原理 细菌病毒(噬菌体)分为烈性噬菌体和温和噬菌体。烈性噬菌体感染细胞后,伴随着细胞裂解会释放出新的子代噬菌体颗粒。被温和噬菌体感染的细胞或是裂解,释放出新的子代噬菌体颗粒,或是成为溶源状态,噬菌体的基因组整合到细菌染色体上,与细菌染色体一起复制,这时的噬菌体基因组称为原噬菌体(propha
P1-噬菌体普遍性转导实验
实验方法原理细菌病毒(噬菌体)分为烈性噬菌体和温和噬菌体。烈性噬菌体感染细胞后,伴随着细胞裂解会释放出新的子代噬菌体颗粒。被温和噬菌体感染的细胞或是裂解,释放出新的子代噬菌体颗粒,或是成为溶源状态,噬菌体的基因组整合到细菌染色体上,与细菌染色体一起复制,这时的噬菌体基因组称为原噬菌体(prophag
P1噬菌体及其克隆系统的应用
P1 噬菌体与 λ 噬菌体同年被发现(Bertani 1951)。两种噬菌体在天然宿主中都是温和噬菌体,它们在实验室的研究历程也几乎相同。λ 噬菌体一经被发现,立刻就被当时有影响的实验室选作分子水平研究溶原性噬菌体的模型。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理P1 噬菌体与 λ
P1噬菌体转导试剂盒使用说明
P1噬菌体转导试剂盒产品说明书(中文版)主要用途P1噬菌体转导试剂是一种旨在通过供体大肠杆菌制备具有部分细菌基因的噬菌体,感染特定受体大肠杆菌,获得细菌之间基因片段的转移,而获得遗传重组的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于通用型非特异性基因片段的转导。产品严格无菌,即
P1-噬菌体克隆在大肠杆菌宿主间的转移
从不同大肠杆菌菌株中获得的 P1 噬菌体 DNA 的产量与质量取决于宿主菌的基因型和重组子中外源 DNA 的特定序列。将 P1 或 PAC 重组子转化到不表达 Cre 重组酶的大肠杆菌菌株中有时可以解决低产或劣质的问题(如 NS3516; Sternberg et al. 1994)。本实验来源「分
P1-噬菌体克隆在大肠杆菌宿主间的转移
实验方法原理 从不同大肠杆菌菌株中获得的 P1 噬菌体 DNA 的产量与质量取决于宿主菌的基因型和重组子中外源 DNA 的特定序列。将 P1 或 PAC 重组子转化到不表达 Cre 重组酶的大肠杆菌菌株中有时可以解决低产或劣质的问题(如
P1-噬菌体克隆在大肠杆菌宿主间的转移
实验方法原理 从不同大肠杆菌菌株中获得的 P1 噬菌体 DNA 的产量与质量取决于宿主菌的基因型和重组子中外源 DNA 的特定序列。将 P1 或 PAC 重组子转化到不表达 Cre 重组酶的大肠杆菌菌株中有时可以解决低产或劣质的问题(如 NS3516; Sternberg et al. 19
P1噬菌体介导的普遍性转导(generalized-transduction)2
3、第三天,当噬菌体充分增殖后,将平板表面的半固体培养基转移到无菌的三角瓶中,加入5-10ml LB液体培养基和几滴氯仿,剧烈振荡20秒后离心(3000rpm, 10分钟),上清液即为P1 cml, clr100裂解液。4、将上清液移到无菌试管中,加入几滴氯仿,再次剧烈振荡20秒,于4℃保存。(二)
P1噬菌体介导的普遍性转导(generalized-transduction)1
一、原理大肠杆菌可以利用噬菌体为媒介,将供体细胞DNA转移给受体细胞,从而使受体细胞的基因型和表现型发生改变,这一过程称为转导。由类似噬菌体P1和P2介导的转导,能够转移供体染色体上任何一个基因,称为普遍性转导;由λ噬菌体等为媒介的转导,只能转导半乳糖发酵基因等少数基因,称为局限性转导。P1噬菌体的
P1、P2、P3的配制P1-的配制方法
在 800ml 去离子水中溶入 Tris 碱 6.06g,Na2EDTA?2H2O 3.72g,用 HCl 调整 pH 至 8.0,用去离子水调整容积至1升,每升P1内加入RNaseA100mg。P2 的配制:在 950ml 去离子水中溶入 NaOH 8.0g,20%SDS 50ml,调整容积至 1
P1克隆的定义
中文名称P1克隆英文名称P1 cloning定 义一种使用P1噬菌体载体扩增插入片段的克隆系统。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
P1人工染色体的定义
中文名称P1人工染色体英文名称P1 artificial chromosome;PAC定 义利用P1噬菌体基因组元件所构建的大片段DNA克隆系统。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
λ噬菌体的局限性λ噬菌体
实验方法原理 本实验以含原λ噬菌体和缺陷噬菌体λdg的双重溶原菌gal+作为供体,经紫外线诱导后,获取能转导半乳糖发酵基因的高频转导噬菌体裂解液,然后让这些转导噬菌体将gal+基因转移到受体菌gal-中去。实验材料 供体菌 : Escherichia coli K12 F2 gal + (带有原噬菌
常见的温和噬菌体介绍
温和噬菌体的种类很多,常见的有大肠杆菌(E.coli)的λ、Mu-I、P1和P2噬菌体等。
温和噬菌体的感染过程
这类噬菌体感染它的宿主细菌后,可把它的DNA整合到细菌染色体中,随着细菌染色体的复制而同时复制。这时不能用任何方法在细菌体内检出噬菌体颗粒的存在,细菌继续生存并进行分裂繁殖。这种携带噬菌体DNA的细菌叫溶原性细菌。在一般外界条件下,溶原性细菌只有极少数发生裂解性反应。但若环境改变,如在紫外线下,激发
关于温和噬菌体的感染过程介绍
这类噬菌体感染它的宿主细菌后,可把它的DNA整合到细菌染色体中,随着细菌染色体的复制而同时复制。这时不能用任何方法在细菌体内检出噬菌体颗粒的存在,细菌继续生存并进行分裂繁殖。这种携带噬菌体DNA的细菌叫溶原性细菌。在一般外界条件下,溶原性细菌只有极少数发生裂解性反应。但若环境改变,如在紫外线下,
温和噬菌体的相关信息介绍
一、定义 噬菌体侵入宿主细胞后,噬菌体的DNA只整合在宿主的核染色体上,并可长期随宿主DNA的复制而进行同步复制,一般情况下不进行增殖,不引起宿主细胞裂解的噬菌体,称温和噬菌体或溶源噬菌体。 二、种类 温和噬菌体的种类很多,常见的有大肠杆菌(E.coli)的λ、Mu-I、P1和P2噬菌体等
关于前噬菌体的基本信息介绍
处于前噬菌体状态下,噬菌体基因组的增殖与细菌染色体的增殖紧密联系着,此时前者可插入后者中作为拟核的一部分,也可作为拟核外的质粒存在。例如大肠杆菌中的λ噬菌体等,通常以插入拟核特定部位的形式存在;而P1噬菌体等则以质粒形式存在。带有前噬菌体的菌称为溶源菌,它们具有无需由外部感染而可产生噬菌体的遗传
Lambda噬菌体
· Lambda DNA Preparation (Stanford DNA Sequence & Technology Center)Detailed protocol for lambda DNA preparation with recipes· Isolati
P1实验室污水处理设备
P1实验室污水处理设备随着中国科学技术的发展,对实验室的需求越来越多,特别是近十几年来,各类实验室建设数量不断增加。从实验室的分布来看,主要集中在中、高等院校、科研院所、医疗机构、生物制药、疾控、环监、产品质检、药品检验、血站、畜牧、医院、企业等行业,实验室废水排放量不大,其污染易于被忽视。p1实验
P1实验室污水处理设备
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Cre重组酶的基本信息
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre-介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡 [1] 。Cre(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)是来源于噬菌体P1的一种酶蛋白,分
Cre重组酶的结构和来源
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre-介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡 。Cre(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)是来源于噬菌体P1的一种酶蛋白,分子量约
什么是Cre重组酶?
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre-介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡 [1] 。 Cre(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)是来源于噬菌体P1的一种