新一代SPR技术在钙调蛋白与NOS研究中的应用(二)

蛋白结合分析:将NOS固定OpenSPR的纳米金芯片表面,并对CaM做浓度梯度检测,结果导入TraceDrawer分析。(图4 )OpenSPR实时检测,梯度稀释后不同浓度检测出野生型CaM对nNOS(红线)和eNOS 肽(紫红线)的结合情况,观察结合、解离及再生的整个过程,结果显示实验曲线稳定及信号显著。(图5) 不同突变的CaM 与cNOS结合数据导入TRACE DRAWER 软件分析,获取Koff、 Kon及 KD值,结果如下:结果显示:CaMcc与cNOS 的亲和力高于wt CaM,相对wt CaM,所有突变型的CaM除了nCaM及CaMcc,与NOS解离速率都加快,并且结果与之前传统方法得出只有CaMc能激活NOS,其他激活效果差或不激活的结果一致,也有效的证明了OpenSPR 在CaM 与cNOS结合研究中的准确性,并且检测方法简单,数据结果丰富,首次阐述了CaM激活cNOS激活机制是因CaM发生了EF手......阅读全文

新一代SPR-技术在钙调蛋白与NOS研究中的应用(二)

蛋白结合分析:将NOS固定OpenSPR的纳米金芯片表面,并对CaM做浓度梯度检测,结果导入TraceDrawer分析。(图4 )OpenSPR实时检测,梯度稀释后不同浓度检测出野生型CaM对nNOS(红线)和eNOS 肽(紫红线)的结合情况,观察结合、解离及再生的整个过程,结果显示实验曲线稳定及信

新一代SPR-技术在钙调蛋白与NOS研究中的应用(一)

EF手性对突变钙调蛋白与一氧化氮合酶结合域肽段相互作用研究一氧化氮合酶(NOS)是一种非常重要的生物小分子NO合成催化酶,一氧化氮合(NOS)包括三个同型酶:神经酶(nNOS), 和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)。每种酶产生的NO分别用于神经传递、血管舒张和免疫应答

质谱技术在蛋白组研究中的应用(二)

6 质谱仪的最新进展 用质谱检测蛋白,首先考虑到用PMF与 MALDI-TOF联用,如果无法检测,下一步就用ESI-MS/MS创建序列标签。在PMF分析中,MALDI的平板中只需一小部分样本就足以检测,剩下的样本就可以用来创建序列标签。并且,在MALDI-TOF仪器上,用一种叫做“源后延迟”

Gradiflow-技术在蛋白质分离研究中的应用(二)

2. 蛋白质组预分离2DE是研究者常用的蛋白质组分析方法,这种方法很有用,但是它的限制因素在实验过程中逐渐呈现出来,比如一些膜蛋白,高分子量和低分子量的蛋白质,就很难用2DE检测出来。特别是一些蛋白样品中包含高丰度的蛋白质,这样就很有可能将研究者感兴趣的蛋白质掩盖,在2DE图谱上体现不出来,从而减少

LSPR技术在检测钙调素与NO合成酶靶向肽偶联动力学中的...

LSPR技术在检测钙调素与NO合成酶靶向肽偶联动力学中的应用新一代SPR创新技术应用典型 :LSPR技术在检测钙调素与NO合成酶靶向肽偶联动力学中的应用钙调素(CaM) 是一个小分子的酸性  Ca2+ 偶联蛋白,参与很多的生理过程,钙调蛋白可以与很多不同的蛋白质结合,因此影响了细胞功能的方方面面。钙

钙调蛋白的定义

  钙调蛋白(calmodulin, CaM)又称钙调素,是一种普遍存在于各种真核细胞内,并能与钙离子结合的多功能蛋白质。   钙调蛋白参与细胞内多种信号转导途径,并在Ca2+依赖性信号转导途径中起到关键作用,是动态Ca2+传感器,能够响应广泛的Ca2+浓度,并向下游传递信号。  钙调蛋白分子是由

钙调蛋白基本介绍

  Ebashi 等在 1965 年报道了细胞中存在介导钙信号的钙结合蛋白,随后 Cheung 将这一类能结合钙离子的磷酸二酯酶(PDE)激活蛋白命名为“钙调蛋白”(calmodulin,简称 CaM)。 [4]  钙调蛋白是一种广泛存在于真核细胞中,进化上高度保守的一类钙离子受体蛋白。钙调蛋白是由

​钙调蛋白的功能特点

钙调蛋白是细胞第二信使系统的重要成分,在Ca信号系统传导中起着关键的作用,调控生理代谢及基因表达,控制细胞正常的生长和发育。钙调蛋白作为第二信使在植物信号转导中的作用一直是植物生理、细胞生物学和发育生物学研究的热点。Ca/CaM是有机体进化过程中最保守的信号转导级联反应系统,这一信号途径广泛存在于真

天平与砝码的调修在实际中的应用

天平与砝码的调修在实际中的应用质量计量的发展是人类社会发展的结果,zui早出现在什么时间尚未没有明确的说法。目前,只知道zui新zui早的质量计量器具是天平。而砝码早在1889年就选定了铂铱合金圆柱体,要求成分是90%铂,10%铱直径和高均为39mm的圆柱体,作为国际原器。质量计量是整个计量工作的一

激光衍射技术在吸入制剂研究中的应用(二)

 图2. 鼻喷剂一个揿次整个过程 图3. 鼻喷剂一个揿次三个阶段的分别的粒度分布及累计数据 从图3也可以看出,初始阶段平均粒径在68微米左右,而稳定后粒径变小达到37微米,而消散阶段粒径进一步变大达到45微米左右。而图4则给出了连续4个揿次的喷射数据,这样不仅可以看到每个揿次的粒径变化、粒径平均值等

激光衍射技术在吸入制剂研究中的应用(二)

图10. 马尔文喷雾粒度仪测试液雾示意图 而吸入式样品池下面是接泵或者呼吸装置,这样液雾通过上面人工喉进入激光测试区域,然后通过吸入样品池被泵抽走。图11是一个持续液雾雾化的粒径分布结果,图中横坐标为时间,纵坐标为粒径大小,三种颜色的曲线分别为雾滴粒径的D10、D50以及D90。可

钙调蛋白的溴化氰裂解实验

钙调蛋白的溴化氰裂解实验             试剂、试剂盒 甲酸 纯的钙调蛋白 溴化氰

钙调蛋白的溴化氰裂解实验

试剂、试剂盒 甲酸纯的钙调蛋白 溴化氰乙腈实验步骤 材料甲酸(市售最髙级(如AldrichChemicalCo.,Inc.)纯的钙调蛋白(干粉;无盐(0.1~1 mg)溴化氰(CNBr)(晶体)(如AldrichChemicalCo.,Inc.)乙腈(如Burdick&Jackson或J,T.Bak

钙调蛋白的溴化氰裂解实验

试剂、试剂盒甲酸纯的钙调蛋白溴化氰乙腈实验步骤材料甲酸(市售最髙级(如AldrichChemicalCo.,Inc.)纯的钙调蛋白(干粉;无盐(0.1~1 mg)溴化氰(CNBr)(晶体)(如AldrichChemicalCo.,Inc.)乙腈(如Burdick&Jackson或J,T.Baker)

关于钙调蛋白的结构介绍

  钙调蛋白的外形似哑铃,有两个球形的末端,中间被一个长而富有弹性的螺旋结构相连,长度为 6.5nm,每个末端有两个Ca2+结构域,每个结构域可以结合一个Ca2+,这样一个钙调蛋白可以结合4个Ca2+ ,每个位点都是由12个氨基酸残基组成的套环,门冬氨酸和谷氨酸的侧链提供 Ca2+结合基团。其中C端

Gradiflow-技术在蛋白质分离研究中的应用(一)

电泳是现代蛋白质研究常用和有效的工具,但是电泳过程中所产生的热量对蛋白质结构的破坏,以及目的蛋白从蛋白胶或其他介质中低的回收效率等等问题,常常让蛋白质更深入的研究戛然而止,而Gradiflow 技术的应用解决了研究者头疼的难题 ! Gradiflow 技术要点可以简单概括为如下几点:1. 应用不同孔

质谱技术在蛋白组研究中的应用(一)

[摘要] 质谱对于现代蛋白质化学研究是一项重要的技术。也可用于蛋白组分析,在同一时间监控上千种蛋白的表达情况。首先蛋白质混合物可以用双向凝胶电泳分开,再用质谱及随后的蛋白质数据库检索对单个蛋白进行鉴定和分析。最近几年,质谱领域取得了令人鼓舞的进展,使得全自动、高通量的蛋白检测成为可能。质谱也

研究分子互作——Nicoya-SPR-技术的新应用案例

Nicoya SPR数据让您的文章更上一层楼!2016年,加拿大滑铁卢大学的Dr. Dieckmann和他的团队用核磁共振波谱法检测最低CaM浓度和逐渐增加的CaM浓度与NOS肽结合的构象,并结合SPR技术,发现当CaM浓度增加时,相互作用的强度也增强了,并导致了蛋白构象变化。SPR数据在确定相互作

钙调蛋白调节微管解聚简介

  微管的组装需要微管结合蛋白和 Tau因子的共同作用,由于依赖于钙调蛋白激酶的底物而彻底被磷酸化,导致微管解聚。当体系中存在一定的 Ca2+的时候,钙调蛋白就会与微管 Tau 因子竞争结合,微管的聚合就会被抑制,细胞的生理活动恢复正常。利用显微注射法注入钙调蛋白,可以有效的延长有丝分裂中期持续的时

钙调蛋白样品的测活实验

试剂、试剂盒 MLCK 的底物肽ATP钙调蛋白储液 MLCK 酶磷酸丙酮(任选)MLCK 测活缓冲液仪器、耗材 聚丙烯微量离心管 Whatman*P81 磷酸纤维素纸(切成条)玻璃烧杯加样器闪烁瓶闪烁计数器吹干机(任选)实验步骤 材料与设备聚丙烯微量离心管 (1.5-ml)MLCK 的底物肽(10m

钙调蛋白的苯基Sepharose-层析实验

钙调蛋白的苯基-Sepharose 层析实验             试剂、试剂盒 含钙调蛋白的组分 CaCl2(固体)

钙调蛋白的苯基Sepharose-层析实验

试剂、试剂盒含钙调蛋白的组分CaCl2(固体)碳酸氢铵缓冲液 E缓冲液 F仪器、耗材透析袋苯基-Sepharose*4B 填料玻璃层析柱蠕动泵紫外线检测器、分部收集器和硼硅玻璃试管冻干机 冷冻干燥器实验步骤材料与设备含钙调蛋白的组分,从 DEAE 柱收集后合并所得(见实验 4)透析袋(标称截留分子量

关于钙调蛋白的作用机理介绍

  钙调蛋白分子本身无酶的活性,在无Ca2+的情况下,也无生物学活性;但在胞内Ca2+结合后,钙调蛋白发生构型上的变化,暴露疏水区,疏水区与依赖于 钙调蛋白的靶酶相互作用而调节酶的活性。 [4] 作为一个多功能的Ca2+传感器,钙调蛋白能够应对不同Ca2+浓度。结合Ca2+后,钙调蛋白会发生构象转变

钙调蛋白样品的测活实验

试剂、试剂盒MLCK 的底物肽ATP钙调蛋白储液MLCK 酶磷酸丙酮(任选)MLCK 测活缓冲液仪器、耗材聚丙烯微量离心管Whatman*P81 磷酸纤维素纸(切成条)玻璃烧杯加样器闪烁瓶闪烁计数器吹干机(任选)实验步骤材料与设备聚丙烯微量离心管 (1.5-ml)MLCK 的底物肽(10mmol/L

钙调蛋白样品的测活实验

钙调蛋白样品的测活实验             试剂、试剂盒 MLCK 的底物肽 ATP 钙调蛋白储液

钙调蛋白的苯基Sepharose-层析实验

试剂、试剂盒 含钙调蛋白的组分CaCl2(固体)碳酸氢铵缓冲液 E缓冲液 F仪器、耗材 透析袋苯基-Sepharose*4B 填料玻璃层析柱 蠕动泵紫外线检测器、分部收集器和硼硅玻璃试管冻干机 冷冻干燥器实验步骤 材料与设备含钙调蛋白的组分,从 DEAE 柱收集后合并所得(见实验 4)透析袋(标称截

钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验

试剂、试剂盒消化缓冲液经 TPCK 处理的胰蛋白酶HCl纯的钙调蛋白实验步骤材料经 TPCK 处理的胰蛋白酶(其干粉可从 WorthingtonBiochemicalCorp. 买到)HCl(1 mmol/L)纯的钙调蛋白(干粉;无盐(0.1~1 mg)试剂消化缓冲液(配方,见"试剂的配制'

钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验

钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验             试剂、试剂盒 消化缓冲液 经 TPCK 处理的胰蛋白酶

钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验

试剂、试剂盒 消化缓冲液经 TPCK 处理的胰蛋白酶HCl纯的钙调蛋白实验步骤 材料经 TPCK 处理的胰蛋白酶(其干粉可从 WorthingtonBiochemicalCorp. 买到)HCl(1 mmol/L)纯的钙调蛋白(干粉;无盐(0.1~1 mg)试剂消化缓冲液(配方,见"试剂的配制

质谱技术在肿瘤蛋白质标志物研究中的应用与发展

20世纪基因组学研究取得的巨大成就为蛋白质组学的发展奠定了基础。蛋白质组学是从整体水平上分析生命体、组织或细胞的蛋白质组成及其活动规律的科学,以基因表达产物为研究对象,延伸了基因组学研究深度,更深层次地揭示了生命活动规律。蛋白质组学的研究内容主要包括蛋白质表达存在方式(修饰形式)的鉴定、结构与功能分