植物材料RNA的3种提取方法
1. 利用RNeasy Plant Mini Kit提取总RNA1) 于1.5 ml离心管中加入0.5 ml RLT缓冲液和5ul β-巯基乙醇;2) 称取约100 mg材料,液氮研磨后转移到提取液中,涡旋混匀,56℃,2 min;3) 加入紫色柱子,23℃, 12000 rpm,离心2 min;4) 滤液转入一新的1.5 ml离心管中,加入1/2体积的无水乙醇,用枪头混匀,移入粉色柱子,23℃, 12000 rpm,离心15 sec;5) 弃滤液,加入700 ul RW 1,23℃,12000 rpm,离心15 sec;6) 将柱子移入一新的2 ml收集管,加入500 ul RPE,23℃, 12000 rpm,离心15 sec;7) 弃滤液,加入500ul RPE,23℃, 12000 rpm,离心2 min;8) 加20 ul DEPC处理过的水,室温静置15 min,23℃,12000 rpm,离心1 min;9) 再分......阅读全文
植物材料RNA的3种提取方法
实验概要本实验介绍了3种提取植物材料RNA的方法,分别是:RNeasy Plant Mini Kit,TRIZOL试剂盒及CTAB法。实验步骤1. 利用RNeasy Plant Mini Kit提取总RNA 1) 于1.5 ml离心管中加入0.5 ml RLT缓冲液和5ul β-巯基乙醇;
植物材料RNA的3种提取方法
1. 利用RNeasy Plant Mini Kit提取总RNA1) 于1.5 ml离心管中加入0.5 ml RLT缓冲液和5ul β-巯基乙醇;2) 称取约100 mg材料,液氮研磨后转移到提取液中,涡旋混匀,56℃,2 min;3) 加入紫色柱子,23℃, 12000 rpm,离心2 min;4
提取植物rna方法
提到RNA的提取,是不是充满了心酸和无奈呀,抽提过程中已十分小心谨慎了,但是有时候还是会出现RNA污染、降解的悲剧。别怕,今天小编给您介绍一种新的RNA提取方法,比以前的方法更快、更有效和更可靠,让您从此不用再担心的RNA的抽提了。 众所周知:获得纯净、完整的RNA样品,是对一种植物的活性基因
植物病毒RNA提取
大多植物病毒RNA为单链RNA,并且其极性与mRNA极性相同,植物病毒RNA提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、材料 提纯TMV病毒液(10mg/ml)。 二、设备 冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。 三、试剂 TE-饱和酚:氯仿(1:1),氯仿
植物RNA提取实验
实验方法原理 独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,
植物RNA提取实验
直接研磨法 液氮研磨法 实验方法原理 通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离
植物总RNA提取方法及过程介绍
目的:用于 Northern 杂交、纯化 mRNA、RT-PCR 及 DDRT-PCR 等。材料:植物油嫩组织器官或种子萌发的幼苗。1、异硫氰酸胍法(1)试剂①异硫氰酸胍溶液:4mol/L 二异硫氰酸胍,25mmol/L 柠檬酸钠(pH7.0),0.5%十二烷基肌氨酸钠,0.1mol/L 巯基乙醇。
多糖多酚植物RNA快速提取的方法
操作步骤:提示:(1) 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!(2) 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 直接研磨法(推荐):a. 新鲜植物组织称重后取100m
肝脏细胞RNA的提取原理、材料和方法
一.原理 RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆和基因表达分析等实验是至关重要的,如
植物总RNA的提取实验
研磨法 实验方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂
植物总RNA的提取实验
实验方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂沉淀总RNA, 洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA 的分离和纯化方法。实验材料 植物RNA试剂、试剂盒 尿素Tris-HClN
植物组织总RNA的提取
实验概要由于RNA分子的结构特点,容易受RNA酶的攻击反应而降解,加上RNA酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA酶,人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染,因此全部实验过程中均需戴手套操作并经常更换(使用一
植物总RNA的提取规程
一、实验目的掌握植物总RNA提取的原理和方法二、实验原理RNA的提取:破坏细胞膜—除去蛋白—除去DNA—除去盐离子。RNase是一类生物活性极其稳定的酶类,能耐高温、耐酸、耐碱,高压灭菌处理也不能使其完全失活。在提取RNA实验中,要尽量抑制RNase的活性。•DEPC(焦磷酸二乙酯)是很强的RNas
植物病毒(plant-viruses)RNA提取
大多植物病毒RNA为单链RNA,并且其极性与mRNA极性相同,植物病毒RNA提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、材料 提纯TMV病毒液(10mg/ml)。 二、设备 冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。 三、试剂 TE
植物总RNA的提取实验技术
一、实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法 二、实验原理 RNA是一类极易降解的分子,要得到完整的 RNA,必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍,可溶解蛋白质,破坏细胞结构,使核蛋白与核酸分离,失活RNA酶,所以RNA从细胞中释
植物总RNA的提取实验_研磨法
在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂沉淀总RNA, 洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA 的分离和纯化方法。实验方法原理在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞
植物组织RNA提取的要点与技巧
从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA 。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。从文献报道上看
植物总RNA的快速提取与纯化
一、原理RNA包括rRNA、tRNA和mRNA等,大部分通常是以核蛋白复合物的形式存在的。通过SDS、苯酚处理使蛋白质变性并沉淀。利用LiCl溶解双链DNA的特性去除DNA,经乙醇沉淀得到总RNA。纯度高、完整性好的RNA,即可用于Northern杂交、纯化mRNA、cDNA合成和体外翻译等进一步的
植物组织RNA提取的难点及对策
植物组织RNA提取的难点及对策 从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究
多糖多酚植物RNA提取的利器
众多文献报道,许多植物由于未能有效地分离纯化出其组织中的RNA, 而阻碍了其分子生物学方面的研究进展。比如Northern杂交分析,体外翻译分析或建cDNA文库,RT-PCR及差异显示分析等研究,都需要高质量的RNA。因此,提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。RNA提取的常见难
植物RNA提取实验——直接研磨法
植物RNA提取可应用于:(1)进行植物分子生物学方面的研究;(2)进行Northern杂交分析、纯化mRNA以用于体外翻译或cNDA文库构建等研究。实验方法原理通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件
植物RNA提取实验——液氮研磨法
实验方法原理独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 最后
细胞RNA的提取方法
(一)细胞总RNA的提取1、6孔板细胞汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5 min。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中,加新开的氯仿0.2 ml,轻摇15 s。3、室温静置
TRIzol-RNA提取方法
研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。TRIzol RNA提取方法:(1)操作简单的,提取方便,回收率高; (2)提取的RNA的质量高,对cDNA库,RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验起着很重要的影响。实验方法原理Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采
TRIzol-RNA提取方法
实验方法原理 Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质,并使蛋白质二级结构消失,细胞结构
TRIzol-RNA提取方法
(一)试剂准备1.TRIzol试剂。2.氯仿3.异丙醇4.75%乙醇(DEPC H2O配制)5.DEPC H2O(二)操作步骤1. 样品处理:(1)培养细胞:收获细胞1-5×107,移入1.5ml离心管中,加入1ml Trizol,混匀,室温静置5min。(2)组织:取50-100mg组织(新鲜或-
提取病毒RNA方法
一、用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤,可参考(我提过N次做定量PCR都没问题):1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时,
多糖多酚植物总RNA快速提取试剂提取水稻胚乳总RNA
实验概要采用TAKARA的试剂提取水稻胚乳,主要是后期的胚乳RNA量偏少,不易提取!实验步骤1. 称量100mg的新鲜或者超低温冻结的植物RNA提取样品,迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状。2. 向研钵中加入1000μL RNAiso-mate for
动植物组织总RNA提取(Trizol法)和mRNA提取
一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。 三、试剂 1、无RNA酶灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小时)装蒸馏水,然后加入0.01%的DEPC(体积/体积),处理过夜后高
RNAplant植物RNA提取试剂使用说明
简介:RNAplant试剂可从植物组织,特别是富含多酚或淀粉的植物组织中(如马铃薯块茎,白松松针或嫩苗,和西红柿叶等)提取高纯度的总RNA。每100 ml可处理100 mg组织200次。保存条件:室温运输,4℃保存,可保存6-12个月。 准备试剂:液氮,研钵,无RNase离心管,5 M NaCl(无