BEX电转化仪高效转染mRNA入卵助力CRISPR／Cas9基因编辑
BEX电转化仪高效转染mRNA入卵助力CRISPR/Cas9基因编辑摘要近期，CRISPR/Cas9系统被广泛地应用于突变体小鼠的构建，但是借助于微注射方法很大程度上限制了基因编辑于高通量上的应用。这篇文章中，我们阐述了一个简单，高效，大规模的基因编辑方法：即借助于电转染将RNAs转入卵，而不是通过显微注射。我们用这种方法将单链寡脱氧核苷酸（ssODN）转入小鼠卵，构建敲除突变体。研究结果证明此方法使得大规模基因分析成为现实。材料和方法小鼠、卵和胚胎使用ICR和B6D2F1(C57BL/6XDBA2F1)孕鼠。ICR主要用于电转条件摸索，而B6D2F1用于基因编辑。从E0.5的输精管中收集受精卵。ICR和B6D2F1和同种雄鼠自然杂交。基因编辑试验中，从B6D2F 1和R26-H2b-mCherry雄性杂交得到的卵，培养在mWM培养基中等待电转染。电转染应用BEX定制电极（长：10mm，宽：3mm，高：0.5mm，间距：1mm）......阅读全文
如何检测－crispr－基因敲除成功
CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Ca
多个sgrna作用于同一个基因相互之间会不会有影响
但因为结构得到了简化更方便研究者使用，进而对目的DNA双链进行切割。 由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’）。 通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造CRISPR (clustered，作用是时间也比较长、鱼类及哺乳动物细胞, regularly interspaced，且长期
关于CRISPRCAS9介导的基因编辑细胞株的一些经验总结
最近小编在应用CRISPR/CAS9作为工具制备基因编辑细胞株，有一些阶段性总结和设想，在这里贴出来，大家可以互相探讨一下。首先要描述一下“基因编辑细胞株”的具体要求：（1）“基因编辑”是指在特定位点引入期望的碱基修饰。具体过程为，通过CRISPR/CAS9在待编辑位点（靶位点）附近引入基因组DNA
关于CRISPRCAS9介导的基因编辑细胞株的一些经验总结
最近小编在应用CRISPR/CAS9作为工具制备基因编辑细胞株，有一些阶段性总结和设想，在这里贴出来，大家可以互相探讨一下。 首先要描述一下“基因编辑细胞株”的具体要求： （1）“基因编辑”是指在特定位点引入期望的碱基修饰。 具体过程为，通过CRISPR/CAS9在待编辑位点（
基因探索－|－Sci－Rep:科学家利用基因编辑技术治疗艾滋病
CRISPR/Cas9系统为编辑HIV-1病毒基因组提供了一种新的有潜力的工具，近日来自日本神户大学医学院感染疾病中心及健康科学研究生院国际卫生系的研究人员设计了一种RNA引导的CRISPR/Cas9以靶向HIV-1调节基因tat和rev，其中的引导RNAs（gRNA）都基于CRISPR的特异
《Cell》论文解读：为Cas9加个开关，让基因组编辑更安全
自2013年以来，CRISPR-Cas9已成为一种炙手可热的基因组编辑工具，但其脱靶效应也让研究界困扰。加利福尼亚大学伯克利分校的研究人员近日给Cas9加上了一个开关，让它在指定位点以外的区域保持关闭。 改造过的Cas9蛋白只有在特定蛋白酶存在的情况下才会被激活，因此被命名为蛋白酶感知Cas9
一步生成条件性基因敲除小鼠ESC
最近发展的基因组编辑工具，包括转录激活因子样效应物核酸酶（TALENs）和CRISPR/Cas9，使我们能够通过诱导双链断裂（DSBs）的非同源末端连接（NHEJ）修复，快速而有效的敲除靶向基因。然而，这种方法不能进行必需基因的功能研究，这类研究通常采用的策略是基于Cre-LoxP系统的条件性基
crispr－cas9基因敲除原理
基本原理：CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊DNA重复序列家族，其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游，是富含AT长度为300～500bp的区域，被认为可能是CRISPR
crispr－cas9基因敲除原理
基本原理：CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊DNA重复序列家族，其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游，是富含AT长度为300～500bp的区域，被认为可能是CRISPR
CRISPR/Cas9－技术，热度背后的冷思考
近年来，CRISPR/Cas9 基因编辑技术正在给整个科研界带来革命性变化，该技术使用 CRISPR 系统将 Cas9 蛋白和向导 RNA 注入小鼠受精卵，就能轻松实现基因敲除，同时，注入 Donor DNA 则可实现基因敲入，甚至国际著名学术期刊 Genome Biology 有文章指出这
新疆野苹果再生及CRISPR/Cas9基因编辑体系研究获进展
新疆野苹果（Malus sieversii）是我国珍贵的第三纪孑遗植物，也是世界栽培苹果（Malus domestica）的祖先种，具有丰富的抗性基因资源价值。近年来，由于农田开发、过度放牧、人为砍伐、苹果小吉丁虫危害及腐烂病暴发等原因，新疆野苹果种群面积急剧减少。新疆野苹果保育及抗性基因资源挖
引发伦理争议和忧虑－基因编辑CRISPR/Cas9新技术路在何方？
正在生物体内发挥功能的CRISPR/Cas9系统 ■新视野 CRISPR/Cas9这项新技术使人们能更精准地对DNA代码进行控制，引发了遗传学和细胞生物学领域的革新，科学家们对它寄予厚望，希望借助它的力量，治疗包括癌症在内的疾病并进一步解开人类细胞身上笼罩的谜团。 但这一基
CRISPR–Cas9基因组编辑可用于耳聋小鼠模型恢复听觉
一篇论文称，研究将CRISPR–Cas9基因组编辑技术用于恢复人类遗传性耳聋小鼠模型的听力。这项于12月21日发表于《自然》的研究凸显了CRISPR-Cas9用于治疗某些显性遗传性听觉损失疾病的潜力。 将近一半的耳聋是由遗传因素造成的，但能治疗遗传性听觉损失的方法却有限。美国马萨诸塞州哈佛大学
王晓群、高绍荣发表CRISPR/Cas9基因编辑新成果
来自中科院生物物理研究所、同济大学生命科学与技术学院的研究人员，在新研究中第一次证实了CRISPR/Cas9介导的基因编辑可以高效生成基因敲除雪貂（ferret）。这一研究成果发布在11月13日的《Cell Research》杂志上。 中科院生物物理研究所的王晓群（Xiaoqun Wang）研
JCI：CRISPR/Cas9基因编辑技术有望治疗亨廷顿舞蹈症
亨丁顿舞蹈症（Huntington's disease, HD）是一种遗传性神经退行性疾病。破坏脑细胞中的一种有问题的基因能够逆转亨丁顿舞蹈症病理和运动症状。 亨丁顿舞蹈症是由编码一种被称作突变的亨廷顿蛋白（mutant huntingtin, mHTT）的毒性蛋白的基因导致的。mHTT
用CRISPR/Cas9对CART细胞进行多重基因编辑（三）
流式细胞术 Flow cytometry CytoFLEX (Beckman Coulter Inc) was used to perform fluorescent expression analysis. Cells were harvested on the following day
用CRISPR/Cas9对CART细胞进行多重基因编辑（一）
作者：Xiaojuan Liu1, *, Yongping Zhang2, *, Chen Cheng1, 3, *, Albert W Cheng4, Xingying Zhang1, 5, Na Li1, Changqing Xia2, 6, Xiaofei Wei7, Xiang Li
用CRISPR/Cas9对CART细胞进行多重基因编辑（二）
细胞系 Cell linesThe following CD19-expressing immortalized cell lines were used: Raji (Burkitt’s lymphoma cell line, ATCC-CCL86),Daudi (B lymphoblast ce
CRISPR/Cas9技术，热度背后的冷思考
近年来，CRISPR/Cas9基因编辑技术正在给整个科研界带来革命性变化，该技术使用CRISPR系统将Cas9蛋白和向导RNA注入小鼠受精卵，就能轻松实现基因敲除，同时，注入Donor DNA则可实现基因敲入，甚至国际著名学术期刊Genome Biology有文章指出这项新技术将很快取代使用胚胎
crispr/cas9到底是什么东西
最近几年基因编辑技术异常火爆，CRISPR/Cas9技术面世以后，弥补了传统基因编辑技术的诸多不足，使得基因的“任意编辑”变得越来越容易。也因此，CRISPR/Cas9技术当仁不让的成为基因编辑技术的“王牌”，大有一副取而代之的势头。所以这里就给大家简单介绍一下CRISPR/Cas9的技术原理！一、
Genetics：电穿孔技术或提高CRISPR/Cas9系统效率
发表于国际杂志Genetics上的一篇研究论文中，来自美国杰克逊实验室(Jackson Laboratory)的研究人员通过研究表明，利用一种电流来运输CRISPR/Cas9系统对实验室小鼠进行工程化的遗传改造，或许可以明显而且有效地改善CRISPR/Cas9系统的作用效率。 CRISPR/C
Nature：CRISPR基因编辑技术助力破解重要生物学谜题
鱼类的后代变成可以在陆地上行走的动物必须发生的一个重大转变就是，要用手指和脚趾来替代长长的鳍条（fin rays）。在8月17日的《自然》（Nature）杂志上，来自芝加哥大学的科学家们证实，在鱼类中构成鳍条的细胞也在四条腿动物手指和脚趾的形成过程中发挥重要作用。 采用新型的基因编辑技术和敏感
显微操作技术在基因编辑中的应用（三）
图9：ESI注入8细胞阶段的胚胎。钝端毛细管图10：EMBL转基因过程中使用的DMi8、Eppendorf TransferMan 4r显微操作器和PiezoXpert压电破膜仪。以钝端毛细管进行胚囊注射。DIC用于小鼠转基因的CRISPR/Cas 9技术用于小鼠转基因的CRISPR/Cas9技术为
我国学者构建世界首个基因敲除体细胞克隆狗模型
近日，中国科学院广州生物医药与健康研究院、北京希诺谷生物科技有限公司与中国农业大学合作，将CRISPR/Cas9与体细胞核移植技术相结合，成功构建出世界首个基因敲除体细胞克隆狗模型。该研究成果以封面文章发表在Journal of Genetics and Genomics杂志上。基因敲除体细胞克
CRISPR/Cas9技术，热度背后的冷思考
近年来，CRISPR/Cas9基因编辑技术正在给整个科研界带来革命性变化，该技术使用CRISPR系统将Cas9蛋白和向导RNA注入小鼠受精卵，就能轻松实现基因敲除，同时，注入Donor DNA则可实现基因敲入，甚至国际著名学术期刊Genome Biology有文章指出这项新技术将很快取代使用胚胎
微流控芯片技术助力免疫治疗，将CRISPR传递到人类T细胞
CRISPR/Cas9是最新出现的一种基因进行编辑的技术，给揭示疾病发生机理以及靶向基因疗法治愈遗传疾病带来了希望。基于CRISPR的T细胞编辑为免疫靶向癌症、艾滋病以及先天性免疫缺陷等方向提供了新的治疗方案，然而高效的编辑和改造T细胞一直以来是该领域一个巨大挑战。据悉，美国康奈尔大学Housto
科学家在植物中实现超长基因片段高效精准无赘敲入
5月17日，国际学术期刊《自然-通讯》（Nature Communications）在线发表了中国科学院上海植物逆境生物学研究中心朱健康研究组题为CRISPR/Cas9-mediated gene targeting in Arabidopsis using sequential transfo
CloneSelect单细胞分离系统用于分选基因编辑的间充质干...
CloneSelect单细胞分离系统用于分选基因编辑的间充质干细胞 图1：CloneSelect f.sight单细胞分离系统 最近发表的一篇文章（Characterization of CRISPR/Cas9 RANKL knockout mesenchymal stem cell clone
－Cell子刊突破：无需克隆的CRISPR新技术
来自荷兰Hubrecht研究所和乌特勒支医学中心（UMC Utrecht）、麻省理工学院的研究人员称，他们开发出了一种自身克隆CRISPR/Cas9(scCRISPR)技术，可以绕开基因编辑过程中所有的克隆步骤，在数小时内完成CRISPR/Cas9介导基因突变及位点特异性转基因敲入。他们的研究成
基因编辑工具的开发
基因编辑已经被越来越广泛的用于生物学的研究和应用当中，例如合成生物学，基因治疗，药物靶点发现，mRNA剪接，蛋白定向进化等等。我们在使用各种各样的基因编辑工具时，不禁感叹这些工具是多么的精巧绝伦。但科研人员发现基因编辑工具，改进这些工具的功能、效率并非易事。高效、精准、便捷的基因编辑工具，一直是人们