重组子筛选的原理和实验方法
根据载体的遗传特征筛选重组子,如a-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段， 中有β半乳糖苷酶基因(acZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。 在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能这种载体适用于可编码β半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。 这样, lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为a-互补。 由a-互补而产生的L acZ+细菌在诱导剂PTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插 入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无a-互补能力的氨基端段,使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。 这种重组子的筛选，又称为蓝......阅读全文
基因的转移与重组体的筛选和鉴定1
第一节 转化基因片段在体外只是一段核酸分子，是化学物质，无法表现出遗传物质的生命活性。只有当其存在于活细胞后，生命的特征才能充分展示出来。在分子克隆实践中，在体外操作的核酸分子只有进入细胞以后才能达到克隆的目的。一、重组DNA分子转入原核生物细胞1. 重组质粒DNA分子转化大肠杆菌转化（transf
基因的转移与重组体的筛选和鉴定3
2. 定向克隆使目的基因按一定的方向插入载体的克隆方案称为定向克隆。最常用的定向克隆方案使用两种限制性内切酶切割载体和目的基因，从而在载体和目的基因两端产生非同源互补的两个粘性末端。定向克隆也可以通过在一端造成平端，另一端产生同源粘性末端实现年-平连接。定向克隆有效的限制了自身环化，并且实现了目的基
基因的转移与重组体的筛选和鉴定4
（3）插入表达筛选法与插入失活相反，插入表达法是外源目的基因插入特定载体后，能激活用于筛选操作的标记基因的表达，由此进行转化子的筛选。设计载体时，在筛选标记基因前面连接一段具有抑制作用的负调控序列，插入外源DNA将使该负调控序列失活，其下游的筛选标记基因才能表达。例如质粒pTR262有一个负调控的c
Nature子刊：细胞重编程助力药物筛选
Johns Hopkins大学的研究人员利用iPSC技术进行药物筛选取得了实质性的进展，这项成果为一些遗传疾病提供了成本更低更快捷的药物研发途径，还将有助于发展个性化医疗，用来自患者自身的细胞在体外测试治疗手段的安全性和有效性。文章于十一月二十五日发表在Nature Biotechnol
Cell子刊：细胞重编程加速药物筛选
最近，美国约翰霍普金斯大学的研究人员报道称，一种实验室培养的人类神经细胞可与心肌细胞搭档，来刺激收缩。因为加速心跳的神经细胞来自于由人类皮肤细胞制成的诱导多能干细胞(iPS)，因此研究人员认为，这些细胞——称为交感神经细胞，将有助于我们研究影响神经系统的疾病，也就是说，科学家将能够在实验室里培养
利用α互补现象筛选带有插入片段的重组克隆的原理
现在使用的许多载体都带有一个E.coli DNA的短区段，其中含有β-半乳糖苷酶的-α肽基因（lacZ’）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息。这个编码区中插入了一个MCS，它并不破坏读框，但是可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于编码β-半乳糖苷酶C端部分序列
Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法
模板的处理：1.平板上的菌落长到肉眼可见时（约12小时）；2.将除了模板之外的其它PCR反应液的组分准备好，并分装。引物最好使用Kit中已有的检测专用的引物，或者一条使用载体上的引物，一条使用基因的特异性引物（这样做可以鉴定非定向克隆的方向）；3.用半根灭菌的牙签（节约，而且好用）挑取菌落，在PCR
Cell子刊：干细胞筛选助力不治之症
肌萎缩侧索硬化症ALS是一种致命的不治之症，ALS患者脊髓中的神经细胞逐步死亡，会最终剥夺患者的行动能力甚至呼吸能力。近期来自哈佛大学干细胞研究所的研究人员利用一种基于干细胞的药物筛选技术，发现了一种化合物能够保护ALS患者的神经细胞。这一研究成果公布在Cell Stem Cell杂志上。
微生物克隆系统使重组基因表达的筛选更加容易
传统的手工挑取微生物克隆是一个费时烦人且易出错的过程。微生物克隆筛选系统一小时可以完成3000 个克隆的挑取，而一个熟练的人工只能挑取约600 个克隆。自动化系统的速度相比人工提高了至少5 倍，最关键的是更加准确，有效性>98%。微生物克隆筛选系统的荧光成像模块可以显著减
微生物克隆系统使重组基因表达的筛选更加容易
传统的手工挑取微生物克隆是一个费时烦人且易出错的过程。微生物克隆筛选系统一小时可以完成3000 个克隆的挑取，而一个熟练的人工只能挑取约600 个克隆。自动化系统的速度相比人工提高了至少5 倍，最关键的是更加准确，有效性>98%。微生物克隆筛选系统的荧光成像模块可以显著减少下游的工作量，因为通
微生物克隆系统使重组基因表达的筛选更加容易
传统的手工挑取微生物克隆是一个费时烦人且易出错的过程。微生物克隆筛选系统一小时可以完成3000 个克隆的挑取，而一个熟练的人工只能挑取约600 个克隆。自动化系统的速度相比人工提高了至少5 倍，最关键的是更加准确，有效性>98%。微生物克隆筛选系统的荧光成像模块可以显著减少下游的工作量，因为通过
快速鉴定插入外源片段的克隆（从转化子中筛选重组名）
由于载体自身环化会产生大量的不含插入片段的转化子，给鉴定重组子带来一些麻烦。通常用双酶切（即插入片段两端酶切位点不同）载体去磷酸化，或者蓝白斑筛选有助于减少这种麻烦，但有的时候还是会需要大量筛选转化子中的重组子。A．Epicertre 公司提供一种快速连接和筛选试剂盒。可在转化子分布不是太密时（
大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选
4．操作步骤 1）大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培
谷物筛选器筛选原理
谷物筛选是指根据粮食颗粒大小的不同，利用一层或数层静止的或运动的筛面对物料进行分选的方法。因为筛选和重力分选的主要对象是谷物，其介于固体和液体之间而被称为散粒体。散粒体具有流动性和自动分级性能。谷物筛选器就是一款专门检验颗粒粮食、油料试样的含杂率及大米中、糠粉含量，确定其品质等级的仪器。
大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选－二
4．操作步骤 1）大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。将该菌悬液以1:100～1:50转接于100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩
大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选－一
1. 实验目的和要求通过本实验学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2. 相关知识及原理感受态细胞(Competent cells)：受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）
蓝白斑筛选的简介
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子，主要为α-互补与抗生素基因。蓝白斑筛选在指示培养基上，未转化质粒的菌落因无抗生素抗性而不能生长，重组质粒的菌落是白色的，非重组质粒的菌落是蓝色的，以颜色不同为依据直接筛选重组克隆的方法。
基因重组和DNA重组区别
基因重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA分子的过程。 在人类的生殖细胞中发现的46条染色体发生在生物体内基因的交换或重新组合。基因重组是生物遗传变异的一种机制，包括同源重组、位点特异重组、转座作用和异常重组四大类。DNA重组指DNA分子内或分子间发生的遗传
谷物筛选原理以及筛选仪器
筛选是指根据物料粒度的不同，利用一层或数层静止的或运动的筛面对物料进行分选的方法。由于筛选和重力分选的主要对象是谷物，就其性质而言，介于固体和液体之间而被称为散粒体。散粒体具有流动性和自动分级性能。谷物筛选器检验颗粒粮食、油料试样的含杂率及大米中、糠粉含量，确定其品质等级的一种检验仪器，确定其害虫密
Nature子刊：筛选激酶复合物文库－发现新型Wnt抑制剂
大肠癌是导致癌症死亡的主要原因，每年导致全球约700000人死亡。超过90%的大肠癌在Wnt信号组件基因中携带体细胞突变，如腺瘤结肠息肉（APC）抑癌基因，从而导致Wnt信号的组成性激活。这反过来又造成CSCs的产生，它们通常可对常规化疗产生耐药性。因此，阻断Wnt信号的治疗药物，有可能根除癌症
Nature子刊：筛选激酶复合物文库－发现新型Wnt抑制剂
大肠癌是导致癌症死亡的主要原因，每年导致全球约700000人死亡。超过90%的大肠癌在Wnt信号组件基因中携带体细胞突变，如腺瘤结肠息肉（APC）抑癌基因，从而导致Wnt信号的组成性激活。 大肠癌是导致癌症死亡的主要原因，每年导致全球约700000人死亡。超过90%的大肠癌在Wnt信号组件基因
杆状病毒表达系统的空斑纯化法介绍
由于在重组病毒中多角体基因被外源基因所取代，因此形成的子代病毒不含有包含体，为包含体阴性病毒。包含体阴性病毒与包含体阳性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形态是不同的。因此，可在光学显微镜下，利用这一特征筛选出含外源基因的重组病毒并加以纯化[12]。这正是目前使用最普遍的有效方法。 1
关于DNA重组的重组修复介绍
有丝分裂和减数分裂期间由各种外源因子（例如紫外线，X射线，化学交联剂）引起的DNA损伤都可以通过同源重组修复机制（HRR）来修复。 人类和啮齿动物中减数分裂期间HRR所必需的基因产物的缺陷会导致不育 。人类HRR所必需的基因产物（例如BRCA1和BRCA2）的缺陷同时会增加患癌症的风险。在细菌
DSX电脑筛选器筛选粮食杂质
在粮食品质检测中，粮食筛选，容重测定等是其中重要的检测项目，容重测定一般使用容重器就可以完成，而粮食筛选也可以使用仪器完成，我们推荐是使用DSX电脑筛选器。该仪器是专为粮食杂质筛选而研制开发的专用仪器，其标准符合GB5494-85《粮食油料检验杂质、不完善粒检验法》国家标准，属于新标准仪器产品，使
用电脑筛选器筛选粮食杂质
在农业育种工作中，对粮食、油料等进行筛理分级是其中十分重要的内容，主要作用是通过筛选来检验粮食油料的杂质、不完善粒等。而随着科技的发展和育种技术的进步，现代粮食杂质筛选已经告别了繁琐复杂的手筛法，广泛采用的是电脑筛选器法。使用仪器来进行粮食杂质的筛选，不仅更加轻松，而且效率更高，检验效果更好，能够更
专访张博：两篇Nature子刊技术论文开创同源重组新方法
2011年在我们还不是十分熟悉它的名字的时候，它被评为了当年Nature Methods杂志的年度技术，2012年在这种技术已成功应用于人类体外培养细胞、酵母、线虫、斑马鱼、植物、大小鼠等多个领域之后，它又入选了Science十大科学突破。这就是TALEN (Transcription
Nature子刊：首次实现蛋白质重要氨基酸个体水平遗传筛选
图片来源于网络 CRISPR/Cas9基因编辑系统利用Cas9核酸内切酶结合sgRNA对靶DNA进行切割，诱发DNA进行非同源末端连接（Non-homologous End Joining，NHEJ)或同源重组（Homology-directed repair，HDR）损伤修复机制，进而实现靶基因
《自然》子刊：可扩增筛选肿瘤新抗原特异性T细胞的技术
随着肿瘤的生长，机体的淋巴细胞会识别出这些异常的细胞，并浸润到肿瘤中，这就是我们常说的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）。 TIL中有一部分是以肿瘤特异性新抗原为靶点的T细胞，这部分细胞具有很强的肿瘤杀伤能力。然而实际上，TIL的数量很少，且常常在肿瘤微环境中被抑制。 那么，我们是否可以通过某些手段
DNA重组
目的：简单介绍了DNA重组技术的一些方法。包括重组质粒、PCR等。包括细胞结构、DNA，DNA如何改点等。
蓝白斑筛选及其原理
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使