细胞表面抗原流式细胞检测的一般步骤(供参考)

1.实验材料:检测管或96微孔板 一抗(FITC标记),以表记Anti-CD19/FITC抗体为例缓冲液:PBS(PH7.4)设备:移液器、离心机、冰盒或冰箱、流式细胞仪2. 注意事项:标记抗体在使用之前用PBS溶解并振匀,并确认没有沉淀,迅速离心几秒,使所有的液体都集中到管底,标记抗体应避光4℃保存,避免冻结,因样本的固定保存或较长时间放置可能会影响细胞表面分子和抗体之间的结合,故建议尽可能使用新鲜样品。3. 操作方法:一、以大鼠淋巴组织细胞表面抗原的流式检测步骤为例 样品制备: 取出大鼠淋巴组织块,迅速浸泡在10ml的缓冲液中,并用注射器的活塞研磨或使用两块预冷的载玻片研压成单细胞。把悬液转移到50ml的锥形管中静置片刻,使细胞团块和碎片沉降到管底,并通过尼龙网过滤成单细胞悬液。 在4℃下300-400g离心4-5分钟,除去上清液。如果该样品为脾脏细胞,加入一定量的RBC lysis裂解红细胞,或者用分离液分离出淋巴细胞。若......阅读全文

细胞表面抗原流式细胞检测的一般步骤(供参考)

  1.实验材料:   检测管或96微孔板 一抗(FITC标记),以表记Anti-CD19/FITC抗体为例   缓冲液:PBS(PH7.4)   设备:移液器、离心机、冰盒或冰箱、流式细胞仪   2. 注意事项:   标记抗体在使用之前用PBS溶解并振匀,并确认没有沉淀,迅速离心几

细胞表面抗原流式细胞检测的一般步骤(供参考)

1.实验材料:检测管或96微孔板 一抗(FITC标记),以表记Anti-CD19/FITC抗体为例缓冲液:PBS(PH7.4)设备:移液器、离心机、冰盒或冰箱、流式细胞仪2. 注意事项:标记抗体在使用之前用PBS溶解并振匀,并确认没有沉淀,迅速离心几秒,使所有的液体都集中到管底,标记抗体应避光4℃保

流式细胞术的步骤

流式细胞仪的操作和使用  ①打开电源,对系统进行预热;    ②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;    ③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;    ④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度最

细胞表面抗原检测实验

免疫荧光抗体法             实验方法原理 用人结肠癌细胞为免疫原,免疫小鼠,制得鼠抗人结肠癌细胞表面抗原(Ag)的单克隆抗体 IgG(第一抗体),二者可以发生特异性的

细胞表面抗原检测实验

免疫荧光抗体法             实验方法原理 用人结肠癌细胞为免疫原,免疫小鼠,制得鼠抗人结肠癌细胞表面抗原(Ag)的单克隆抗体 IgG(第一抗体),二者可以发生特异性的

流式细胞术应用-|-囊泡检测步骤详解

实验简介囊泡天然存在于体液中,并稳定携带了一些重要的信号分子。囊泡相关功能的研究已经成为研究热点,并有望在多种疾病的早期诊断中发挥作用。通常因流式细胞仪无法检测低于 250nm 的颗粒,因而并不是检测囊泡微颗粒的最佳选择。而贝克曼库尔特公司 CytoFLEX 流式细胞仪的问世,为流式检测囊泡微颗粒开

浅谈“科研行业入门”-供参考

  目录   1.怎样做出好的科研   2.论坛的使用   3.科研或许便是在仿照中立异   4.谈几点自己的领会,我是资料专业的   5.怎样看文献,做科研,发文章   6.写文章经历引荐   7.文献管理经历   8.范滇元院士谈研究生怎样做科研   9.科研资源分享   1

流式细胞的具体实验步骤

一 、细胞表面标记的检测1.试剂平衡至室温。准备:消毒台面;穿戴工作服,帽子,口罩和手套,放置棉签,草纸和有盖垃圾桶(内装有消毒剂)。2.写编号纸并编号。1----IgG1/ IgG1/ IgG12----CD4/CD8/CD33----CD14/CD454----3.每管加相应的抗体10l/每种和

流式细胞的具体实验步骤

一 、细胞表面标记的检测1.试剂平衡至室温。准备:消毒台面;穿戴工作服,帽子,口罩和手套,放置棉签,草纸和有盖垃圾桶(内装有消毒剂)。2.写编号纸并编号。1----IgG1/ IgG1/ IgG12----CD4/CD8/CD33----CD14/CD454----3.每管加相应的抗体10l/每种和

流式细胞术实验步骤

流式细胞术实验:1、制备细胞悬液,计数2、分装,按照每个EP(1.5ml)管1-2*10 6个细胞分装,3500rpm,4度离心。3、用100ulPBS重悬,加入10ul大鼠血清封闭,4度避光30min。4、加入相应的荧光标记的抗体,混匀,避光,4度孵育30min。5、加入1mlPBS洗两遍。6、用

请教流式细胞的具体实验步骤

一 、细胞表面标记的检测1.试剂平衡至室温。准备:消毒台面;穿戴工作服,帽子,口罩和手套,放置棉签,草纸和有盖垃圾桶(内装有消毒剂)。2.写编号纸并编号。1----IgG1/ IgG1/ IgG12----CD4/CD8/CD33----CD14/CD454----3.每管加相应的抗体10l/每种和

人外周血流式细胞仪检测指标正常参考值

胞表面抗原 细胞类型 正常值(x±s%) 变化范围% T 细胞抗原CD2总 T 细胞 羊红细胞受体76.28±7.6862.5—89.0CD3总 T 细胞69.98±5.7961.1—77.0CD4Th 细胞35.25±5.1625.8—41.6CD5T 细胞(部分 B 细胞)77.06±7.346

流式细胞仪检测细胞凋亡(双染色法)实验步骤

一、基本原理经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色,且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根据

流式细胞仪的使用操作步骤

一、开机程序1、检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。2、 打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS 或FACSFlow),合上压力阀。确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。3、将FACSCali

流式细胞术测细胞周期一般需要多少细胞

一般实验,检测需要记录10000个细胞。根据仪器的不同,死腔的体积也不一样,所以体积的要求不一样。理想状态下,样本浓度最好是每毫升一百万。另外,还需要一个样本管来设置机器(如果是单色),双色的话需要单色对照。这些对照管的细胞数要求很多。真正用来记录的样本只要比实际记录再加上死腔体积多一点就可以了。

流式细胞术实验步骤是什么

流式细胞术实验:1、制备细胞悬液,计数2、分装,按照每个EP(1.5ml)管1-2*10 6个细胞分装,3500rpm,4度离心。3、用100ulPBS重悬,加入10ul大鼠血清封闭,4度避光30min。4、加入相应的荧光标记的抗体,混匀,避光,4度孵育30min。5、加入1mlPBS洗两遍。6、用

流式细胞术检测细胞凋亡

实验概要Provides a rapid and convenient assay for apoptosis. 实验原理Apoptosis  is a carefully regulated process of cell death that occurs as a normal  part o

流式细胞技术检测法

1. 3流式细胞技术检测法 原理:包绕着鞘液的单细胞或微粒经过流式细胞仪检测区域时被激发光激发出荧光信号,形成的不同波长荧光信号被光电倍增管接收后转换为电信号并进一步转换成计算机可识别的数字信号。其应用范围广泛,常用于细胞生物学、细胞遗传学、免疫学、肿瘤学、血液学等领域。应用:1)了解细胞大小及颗粒

细胞凋亡检测:流式细胞仪检测技术

细胞调亡的流式细胞仪检测技术 一、固定细胞的染色方法 1 ) PI 单染色法 方法一1. 收集细胞( 1 ~ 5 )× 106 个, 500 ~ 1000r/min 离心 5min ,弃去培养液。2. 3ml PBS 洗一次。3. 离心去 PBS ,加入冰预冷的 70 %的乙醇固定, 4 ℃, 1h

细胞凋亡检测流式细胞仪检测技术

一、固定细胞的染色方法 1)PI单染色法 方法一 1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。 2.3ml PBS洗一次。 3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。 4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。 5.400目的筛网过滤

细胞凋亡检测流式细胞仪检测技术

一、固定细胞的染色方法 1)PI单染色法 方法一 1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。 2.3ml PBS洗一次。 3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。 4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。 5.400目的筛网过滤

细胞凋亡检测:流式细胞仪检测技术

细胞调亡的流式细胞仪检测技术一、固定细胞的染色方法1)PI单染色法方法一1.收集细胞(1~5)×106个,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。2.3ml PBS洗一次。3.离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。4.离心弃去固定液,3ml PBS重悬5min。5.40

流式细胞仪原理及操作步骤

流式细胞仪是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器,已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断,对淋巴细胞群和亚群进行精确分类,还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光

流式细胞仪原理及操作步骤

流式细胞仪原理及操作步骤:流式细胞仪是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器,已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断,对淋巴细胞群和亚群进行精确分类,还能分离纯化某一群

流式细胞仪原理及操作步骤

  流式细胞仪原理及操作步骤:  流式细胞仪是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器,已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断,对淋巴细胞群和亚群进行精确分类,还能分离纯

流式细胞仪Annexin-V凋亡试剂盒一般染色检测方法

1.把将被染色分析的细胞用冷PBS洗涤二次并在恰当的染色缓冲液(binding buffer)中以1 x 106 细胞/mL的浓度重悬。(染色缓冲液,binding buffer,中必须含有钙离子) 2.吸取100ul的细胞(1 x 105)至试管中。(必须在室温下进行)3.加入适量的荧光标记的an

流式细胞仪细胞凋亡检测

一 PI单染色法  基本原理   其原理主要是根据细胞 凋亡时在细胞、亚细胞和分子 水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等,其中细胞核的改变最具特征性,主要包括以下几个方面:1. 细胞核的改变:由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体荧光染料

流式细胞仪检测细胞凋亡

细胞凋亡的检测方法众多,流式细胞仪检测凋亡,是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此,具有其它方法无可比拟的优越性。下面我们就简单明了地介绍流式在检测凋亡方面的应用。在凋亡诱导剂的作用下,首先是细胞色素C和apa f-1形成复合体,线粒体的功能发生衰退;后是cas

流式细胞仪检测细胞凋亡(双染色法)实验步骤注意事项

一、基本原理经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜 的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色,且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根

流式细胞仪检测细胞凋亡(双染色法)实验步骤注意事项

一、基本原理经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用“细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色,且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多。流式细胞仪通常根据