基础知识:福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取

本篇文章是关于一个我们很少被问问题的题目,因为太简单,方法很常规结果也很少出错。我想说的是:福尔马林固定石蜡包埋组织的DNA提取。什么是FFPE组织?FFPE指的是为维持细胞核蛋白结构,先用福尔马林固定然后固体石蜡包埋,以便使用超薄切片机切成5-10微米厚的薄片的组织样品(通常是疑似肿瘤组织)。福尔马林与蛋白氨基发生了不可逆交联,保护细胞结构完整性,染色显示组织中肿瘤带来的畸形结构。但是,固定剂的交联作用对核酸来说是有害的。福尔马林石蜡和交联作用还妨碍了核酸的提取,抑制脱氧核糖核酸聚合酶、PCR扩增,都必须去除。从这些样品中获取DNA的前景看似很暗淡。幸运的是,我们已经客服了这两种主要障碍,从FFPE组织中获得高质量DNA不再困难。石蜡如何去除?传统去除石蜡的方法通常是使用二甲苯,一种高度易燃的有机溶剂。组织切片用二甲苯反复冲洗数次溶解石蜡,然后在DNA提取前再用乙醇反复冲洗去除残余二甲苯。如此反复多次的冲洗步骤,每次都会有少量......阅读全文

常见的疼痛研究模型及方法(三)

福尔马林致痛模型 本模型的目的是模拟急性组织损伤所致的持续性疼痛。一般以大鼠为实验对象。在动物一肢足背皮下注射稀释的福尔马林(formalin)溶液,导致动物的行为改变如安静时的屈腿、运动时的跛行以及舔足等。这些行为的程度(如舔足时间)与福尔马林浓度成正比,一般认为它是疼痛的象征。此外,其它行为如理

病原菌的分离鉴定及其疫苗的制备(3)

(二)疫苗制备1 .病原菌的扩大培养与分离液体培养:按配方配制 2216E 液体培养基,将培养基用 三角烧瓶分装并盖上棉塞后置 于高压蒸汽锅内, 121 ℃ 灭菌 15 ~ 30min ,冷却后于超净工作台内加入 1ml 左右预先制备的病原菌菌液,盖上棉塞,用摇床于 28~ 30 ℃ 下震荡(约

病料应该如何保存

要使实验室诊断得出正确结果,除病料采取恰当外,还要使病料保持新鲜或接近新鲜状态。如果病料需送外地检验时,则应加入适量的保存液。(1)细菌检验病料的保存。无菌采取脏器标本,可放在低温下保存。有污染可能时,应将标本放在灭菌的30%甘油缓冲盐水或饱和盐水中,容器加塞封固。饱和盐水的配制:蒸馏水100毫升,

猪肉是否含瘦肉精5分钟内出检测结果

  食药监局的工作人员在快检食品  “案板上肉割一小块就行,不用太多。”在仁风镇乐乐新农村购物超市内,快检人员对着的超市老板说。1月30日上午,记者跟随济阳县食药监所食品安全快检人员来到仁风、曲堤两镇,走进超市对店内的肉类、泡椒凤爪等进行随机现场快检。  拿到样品后,快检人员熟练地打开一个印有食品快

商贩用甲醛泡牛百叶判有期徒刑一年六个月罚五千元

  记者今天从海南省海口市美兰区人民法院获悉,美兰海山城火锅店用福尔马林泡牛百叶案12月21日宣判,店主姚某被以生产、销售有毒、有害食品罪,判处有期徒刑一年六个月,并处罚金5000元。   姚某是海山城火锅店经营者,该火锅店位于海口蓝天路金都大厦西北角铺面,自2012年2月开

FFPE组织样品的DNA和RNA纯化

福尔马林固定后石蜡包埋的组织简称为FFPE样品。将组织在 4–10% 的福尔马林中迅速固定。 固定时间限制在 14–24 小时 (越长的固定时间将越容易导致DNA的片段化,对下游实验不利)。将固定组织彻底脱水 (彻底脱去福尔马林残余,因为其阻碍蛋白酶K的作用)。 纯化DNA时,使用新鲜从石蜡块上切下

组织标本的处理

取 材 取材是制作切片程序中的首要步骤,取材不当,将直接影响病理诊断和科研工作的效果。组织标本的选用非常重要,不能随意的切取组织来制作组织切片,否则病理检验的结果是不会令人满意的。 一、取材工具:取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦,不应使用有钩镊子或血管钳等

组织标本的处理

 取 材 取材是制作切片程序中的首要步骤,取材不当,将直接影响病理诊断和科研工作的效果。组织标本的选用非常重要,不能随意的切取组织来制作组织切片,否则病理检验的结果是不会令人满意的。一、取材工具:取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦,不应使用有钩镊子或血管钳等手术器械镊取标本,以免损害组织造成

重庆黑作坊豆干里加甲醛-工人称常吃味道还不错

现场查获工业烧碱和福尔马林作坊周围污水横流,蚊蝇乱飞  昨日中午,大渡口区执法部门在八桥镇新华村2社一民房内,端掉一个无照制作豆干作坊,并发现工业碱和福尔马林等禁止食用的化工原料。面对执法人员的询问,工人竟振振有词―――“豆干确实加了碱,我还吃了的,没得问题!”  目前,执法人员暂扣

类器官荧光染色实验流程(一)

固定注意: 合并2-3孔的几十个类器官最为理想,但也可只使用一个孔的类器官。使用PFA固定和O.C.T包埋的实验流程使用1.5 mL的EP管收集类器官,使用4% PFA溶液室温固定半小时。室温下用PBS清洗3次,每次5分钟。然后将样本转移至30% 蔗糖溶液4度孵育过夜。第二天,移除蔗糖溶液,在O

揭秘大连尸体加工厂-生命终结尸体可永存

“生命终结,但尸体却可永久保留。”      “生命终结,但尸体却可永久保留。”听上去,这似乎有些不可思议,然而今天,在世界上,在中国,在大连,这却变成了现实。  冯・哈根斯公司是一个专门从事生物塑化工作的公司,他们把尸体解剖、脱水、定型之后制成人体标本,进行永久性保存。想像中,这一系列的操作过程令

苏丹黑染色实验

实验方法原理 苏丹黑(Sudan black B,SB)是一种脂溶性染料,可溶解于细胞浆内的含脂结构中,使胞浆中的脂类物质呈棕黑色或深黑色颗粒。实验材料 细胞浆试剂、试剂盒 福尔马林液苏丹黑酒精溶液实验步骤 一、实验试剂:1. 福尔马林液2. 苏丹黑酒精溶液(1)贮备液:苏丹黑B0.3g溶于100毫

苏丹黑染色实验

实验方法原理苏丹黑(Sudan black B,SB)是一种脂溶性染料,可溶解于细胞浆内的含脂结构中,使胞浆中的脂类物质呈棕黑色或深黑色颗粒。实验材料细胞浆试剂、试剂盒福尔马林液苏丹黑酒精溶液实验步骤一、实验试剂:1. 福尔马林液2. 苏丹黑酒精溶液(1)贮备液:苏丹黑B 0.3g溶于100毫升纯酒

寄生虫标本的保存实验——浓集法

实验材料原虫包囊虫卵蠕虫昆虫原虫试剂、试剂盒汞碘醛液生理盐水巴氏液酒精薄荷脑甘油仪器、耗材载玻片盖玻片棉纸棉花蜡液氮罐实验步骤一、原虫包囊和虫卵的保存 汞碘醛液10 ml与粪便1 g混匀后密封在瓶内,可保存其中的原虫包囊及虫卵数月之久,也可在经浓集法处理的粪便沉渣中加等量或1倍量的10 %甲醛液(加

寄生虫标本的保存实验

实验材料 原虫包囊虫卵蠕虫昆虫原虫试剂、试剂盒 汞碘醛液生理盐水巴氏液酒精薄荷脑甘油仪器、耗材 载玻片盖玻片棉纸棉花蜡液氮罐实验步骤 一、原虫包囊和虫卵的保存 汞碘醛液10 ml与粪便1 g混匀后密封在瓶内,可保存其中的原虫包囊及虫卵数月之久,也可在经浓集法处理的粪便沉渣中加等量或1倍量的10 %甲

做石蜡切片用的材料,该如何保存

FAA 里面有福尔马林,你放在4度或者室温放两个星期应该没关系

癌症患者放疗、化疗后出血性膀胱炎的治疗

使用异环磷酰胺或高剂量环磷酰胺治疗的患者或盆腔放射治疗(RT)后出现血尿,可根据出血性膀胱炎(HC)的严重程度提供多种治疗方案包括盐水膀胱冲洗,膀胱内灌注剂,高压氧治疗(HBO),尿流改道,髂动脉血管栓塞和膀胱切除术(膀胱切除术)。对于活动性出血的患者,血小板计数应维持在> 50*109 /L,

普鲁士蓝染色液(核固红法)使用说明

含铁血黄素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素,为金黄色或棕黄色颗粒,因其含铁,且为金黄色,故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后,在溶酶体酶的作用下,血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。Perls普鲁士蓝反应(Prussian blue reaction)又

科学家利用机器学习解开临床癌症样本中的基因组密码

  分析癌症基因组中的突变过程有助于在早期发现和准确诊断癌症,并可以揭示某些癌症患者对治疗产生耐药性的原因。  临床癌症样本是一个巨大的资源,可以为分子诊断技术提供更全面的支持,使特定的癌症患者与适合的癌症疗法相匹配,从而达到最好的治疗效果。然而,由于临床癌症样本中的DNA质量较差(如福尔马林会对D

有关病理标本常用固定液的问题

病理科最常用的固定液。是指40%的甲醛溶液(原液)再稀释至4%,即配成10倍稀释的甲醛溶液,最终甲醛浓度为4%,被称为福尔马林(Formalin)。稀释是按照体积比进行的。

哪种溶液被推荐为病理标本的首选固定液

病理科最常用的固定液。是指40%的甲醛溶液(原液)再稀释至4%,即配成10倍稀释的甲醛溶液,最终甲醛浓度为4%,被称为福尔马林(formalin)。稀释是按照体积比进行的。

尸体的收集、消毒、防腐、固定和保存实验

实验材料 尸体试剂、试剂盒 70%酒精来苏儿新洁尔灭福尔马林石碳酸甘油氨水麝香草酚仪器、耗材 解剖器吊桶注射器针头Y形玻璃管注射导管橡皮管橡皮手套隔离衣口罩长筒胶鞋塑料登记牌线实验步骤 一、尸体登记尸体处理前须按照政府有关规定进行登记,应有专用的登记本或登记卡。对无主认领的尸体,尚需拍照备查。登记内

尸体的收集、消毒、防腐、固定和保存实验

实验材料尸体试剂、试剂盒70%酒精来苏儿新洁尔灭福尔马林石碳酸甘油氨水麝香草酚仪器、耗材解剖器吊桶注射器针头Y形玻璃管注射导管橡皮管橡皮手套隔离衣口罩长筒胶鞋塑料登记牌线实验步骤一、尸体登记尸体处理前须按照政府有关规定进行登记,应有专用的登记本或登记卡。对无主认领的尸体,尚需拍照备查。登记内容应包括

颞动脉活检的检查过程

  医生在消毒后,用一把特制的活检钳,根据病变部位与要求,从颞浅动脉取几小块组织,放于10%的福尔马林溶液中固定,送病理科做病理检查。操作时应该小心无误,以免损伤血管。

原位杂交中植物组织要用faa固定多久

石蜡切片法——固定与包埋 一、实验目的 掌握石蜡切片法中固定、透明与包埋的基本操作步骤及要点。 二、实验材料 党参、秦艽或其它药材的根 三、实验用具及试剂 福尔马林-酒精-醋酸混合固定液(简称FAA)、各级酒精溶液

MSCs分化为矿化的成骨细胞

试剂和材料:完全培养基(CCM):α-MEM:α-低限量基础培养基,含谷氨酰胺,无核苷酸或脱氧核苷酸;添加:20%附加L-谷氨酰胺 2mmol/L、经FBS杂交瘤纯化,非热灭活、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml。过滤除菌。储存于4℃,不超过2周;BDM(骨分化培养基):CCM包含5mmo

罗氏收购Lumora的核酸纯化技术

  罗氏正在购买Lumora核酸纯化中的热洗脱技术及相关产品,该技术可用于多种样品类型,诸如福尔马林固定后石蜡包埋的肿瘤样本。罗氏表示,计划将该技术整合到测序流程解决方案中。  罗氏称,该技术仅用于研究。  罗氏也表示,Lumora的该项技术用时较短,数分钟内即可自动分离FFPE(福尔马林固定后石蜡

病理实验室组建方案

一、病理实验室常用仪器设备1、取材类(取材台、通风柜、冷藏柜、蜡块柜、切片柜、晾片柜)2、脱水类(组织脱水机)3、包埋类(包埋机、冷台、冰箱)4、切片类(石蜡切片机、冰冻切片机)5、漂烘类(漂片仪、烘片仪、漂烘仪)6、染色类(组织染色机、免疫组化染色机)7、阅片类(显微镜、病理图文分析系统)8、细胞

细胞浸润生长性检测实验

实验方法原理 浸润性生长是细胞浸入或穿透其它组织增殖生长能力,浸润生长性检测是检测癌性细胞的一项有意义的指标。检测方法需用其它正常组织和癌细胞共同培养,观察癌细胞向正常组织浸润生长的情况。实验材料 鸡胚试剂、试剂盒 Bacto仪器、耗材 玻璃圈CO2温箱福尔马林实验步骤 常用鸡胚皮肤或心肌组织块,作

如何区别甲醛和苯甲醛

甲醛是一种无色、有强烈刺激性气味的气体。易溶于水、醇和醚。甲醛在常温下是气态,通常以水溶液形式出现。35~40%的甲醛水溶液叫做福尔马林。甲醛分子中有醛基生缩聚反应,可以得到酚醛树脂(电木)。甲醛的主要危害表现为对皮肤粘膜的刺激作用。中文名称:甲醛中文别名:福尔马林、甲醛水、蚁醛溶液英文别名:For