免疫组化专题：肿瘤细胞体外传代培养及保种
一. 细胞复苏与培养将液氮或- 80℃ 保存的肿瘤细胞于 37℃ 水浴，快速溶化，用 8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液，于 1500 转/ 分，离心 3 分钟。 弃上清，再吸取 8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀，再 1500 转/ 分，离心 3 分钟，弃上清，细胞沉淀用 1.0ml 培养基混匀，备用。 另取一个 75cm2 方瓶，加入 14.0ml 培养基质，将上述制备的含 肿瘤细胞悬液(1.0ml)加入此方瓶中，于 37℃，5%CO2 孵育箱中培养。若此肿瘤细胞悬浮生长，大约 3－4 天细胞基质会变黄，5.0ml 细胞悬液可传代一个方瓶培养，可用 3－4 个方瓶培养，一个方瓶中呈对数生长的肿瘤细胞可达 1-1.5×10 7 个，根据试验所需，可决定传代的次数。 若此肿瘤细胞呈贴壁生 长，经过 3-4 天，肿瘤细胞生长至 80%-95% 单层时，弃上清，用 0.5mM 的EDTA(难消化的......阅读全文
无限细胞系的遗传特性
体外培养的大多数癌细胞有遗传学特性的改变，如呈现异倍体或多倍体核型、染色体片断的移位或缺失、癌基因特异表达等。光学显微镜下可见的核型变化在传代培养过程中稳定出现时，可作为标志性染色体，用于鉴别细胞的种属性。肿瘤细胞群常由多个细胞群组成，有干细胞系和数个亚系，并不断进行着适应性演变。
免疫组化发展及原理
1941年Coons首先用荧光素标记抗体—检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。 60年代 Akanke建立酶标抗体技术—铁蛋白标记Ab技术 70年代 Stemberger改良上述技术，建立辣根过氧化物酶—抗体过氧化物酶（PAP）技术，使免疫细胞化学得到广泛应用。 80年代 Hsu等建立了抗生
免疫组化的细胞凋亡检测
细胞凋亡原理：正常凋亡细胞通过检测凋亡细胞DNA片段进行染色，正常的、人为造成凋亡的细胞很少能够被染色。以甲基绿复染，便于从形态学上分辨评估正常细胞和凋亡细胞。 首先确定目标凋亡细胞的组织部位（如眼球组织，由于玻璃体结构内没有细胞核，因此看不到凋亡，在整个组织的最外面有单层视网膜细胞，因此只能
《自然》发表国际肿瘤基因组计划专题报道
4月15日，国际权威科学期刊《自然》杂志将发表关于国际肿瘤基因组计划的专题报道，介绍该计划所取得的发展历程、研究计划以及研究成果等。 全球联手解读“天书” “国际癌症基因组联合计划，是继国际人类基因组计划后，人类基因研究的新里程碑。”浙江大学医学院
视神经少突胶质细胞体外培养纯化及鉴定
1.材料和方法 1.1 DMEM/F12条件培养液（亚硒酸钠40μg·L-1，腐胺16.2 mg·L-1，转铁蛋白100 mg·L-1，胰岛素234U·L-1，甲状腺素0.4μg·L-1，黄体酮0.62 mg·L-1，谷氨酰胺3g·L-1）。DMEM/F12培养基、小牛血清购自Hy
阿霉素丙二醇脂质体的制备及体外抗肿瘤作用研究
化療作为癌症治疗的主要手段，存在两大问题：一是化疗药物缺乏选择性，二是多药耐药性[1-2]。靶向药物制剂成为当今抗肿瘤领域的研究主流[3-4]。高通透性和高滞留性[高渗透长滞留效应（EPR效应）]是肿瘤靶向药物设计的金标准[5]。醇质体是一种新型的柔性脂质体，是在脂质体的双分子层中加入不同的柔软剂，
物理所等在体外构建出肿瘤细胞侵袭组织的三维模型
癌症的最大致命性之一在于肿瘤细胞临床上的转移性。肿瘤细胞侵袭和转移过程的研究对于深入理解癌症的致命机理，探索更为有效的治疗手段至关重要。但是肿瘤细胞的侵袭环境和转移过程尤为复杂。如图1所示，肿瘤细胞侵袭的“战场”不仅是一个三维的微环境，而且肿瘤细胞不是单一行动，而是作为群体从营养少、空间狭小等生
肿瘤细胞的标记及活体荧光成像
摘要 以绿色荧光蛋白( GFP) 作为标记基因转入人类肺癌细胞系(ASTC2a21) , 经800 mg/ L G418 筛选, 获得5 株高表达细胞系. 利用流式细胞仪对GFP 表达的稳定性进行了初步研究, 结果表明本实验中有些细胞株间GFP 表达稳定性有显著差异( P < 0101) . 将稳定
细胞培养传代培养的材料和器材
材料和器材材料：培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75%酒精棉球，酒精灯，培养细胞。药品：培养基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清或胎牛血清，0.25%胰蛋白酶，Hank's液。仪器：CO₂培养箱，倒置显微镜，超净台。
细胞培养传代培养的实验方法
一、原理细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。为了保持细胞正常的二倍体核型，传代培养一般
传代培养细胞染色体显示法步骤
1.培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。 2.加秋水仙素：使用最终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液，温箱继续培养6~10小时；或用低温封闭法：把培养细胞置于4℃条件下6~12 小时后，再于37℃温箱继续培养6~10小时处理（加秋水仙素）。 3.
单层细胞传代培养时常出现的问题
1. 细胞难脱离 • 培养基内含有某些抑制成分（例如血清）使细胞解离液失活。 解决对策：在加入细胞解离液（dissociating solution）之前，先用DPBS润洗细胞两次或者是直接用细胞解离液润洗细胞。 • 选用的细胞解离液太弱。 解决对策：提高酶浓度、EDTA浓度，或者使用作用更强的细胞
细胞传代培养原理、仪器试剂和操作步骤
一、原理细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。二、材料和试剂1、细胞：贴壁细胞株2、试剂
巨噬细胞传代培养应用什么培养基
传代培养即一种细胞或组织或其他的培养方法。详解：传代培养中的细胞传代培养（subculture），当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。此时就需要将培养物分割成小的
细胞传代培养与原代培养的区别
原代培养：即第一次培养，是指将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。有几方面含义： 1、培养物一经接种到培养器皿（瓶）中就不再分割，任其生长繁殖； 2、原代培养中的“代”并非细胞的“代”数，因为培养过程中细胞经多次分裂已经产生多代子细胞； 3、原代培养过程中不分割
原代细胞培养和传代培养的方法
原代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用 EDTA 或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至 37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸
人源肿瘤细胞系异种移植CDX与人源肿瘤组织来源移植瘤PDX
问：什么是肿瘤移植模型？ 答：人的肿瘤移植到小鼠体内构建的人源化肿瘤模型 问：这种模型意义在哪？ 答：筛药，为人民服务。（请为伟大的小鼠致敬！） 问：为啥要构建肿瘤模型，不能跳过直接上临床？不也可以筛药吗？ 答：嗯，好主意，要不你先来好不好？ .......
人源肿瘤细胞系异种移植CDX与人源肿瘤组织来源移植瘤PDX
问：什么是肿瘤移植模型？答：人的肿瘤移植到小鼠体内构建的人源化肿瘤模型问：这种模型意义在哪？答：筛药，为人民服务。（请为伟大的小鼠致敬！）问：为啥要构建肿瘤模型，不能跳过直接上临床？不也可以筛药吗？答：嗯，好主意，要不你先来好不好？.......问：什么是CDX , PDX?答：急什么，认真听小编讲
青岛建立完善国家省市三级保种体系
近日，青岛召开全市种业工作会议。会上透露，今年，青岛将首次评选市级畜禽种质资源保种场，率先在山东省建立完善国家、省、市三级保种体系，争创山东省畜禽种质资源保护示范样板。据介绍，今年，青岛市各相关单位将在抓好《砧木良种与加工型鲜食玉米新品种选育与产业化开发应用》等一批局重点推进项目的同时，率先在山东省
细胞技术专题：补体介导的细胞毒试验
1、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
细胞技术专题：小鼠腹腔巨噬细胞培养实验
小鼠腹腔巨噬细胞培可以：（1）吞噬与清除异物；（2）分泌生物活性物质；（3）对仿生全降解材料，降解后的无机产物与生命过程中有机物的合成作用。实验方法细胞培养技术实验方法原理取小鼠腹腔巨噬细胞与乳胶颗粒在不同培养条件下混合后定量加入24孔板，37 ℃，5% CO2 培养箱中孵育后，荧光显微镜下计数吞噬
细胞技术专题：大鼠肝星状细胞培养实验
实验方法细胞培养技术 实验方法原理选用Wistar大鼠经消化酶灌注肝脏后,用分离液分离HSC，通过观察其自发荧光及其显著特征性结构的脂肪染色、细胞免疫化学染色等方法鉴定。 实验材料雄性 SD 大鼠 试剂、试剂盒戊巴比妥钠 小牛血清 DMEM 酶消化液I、Ⅱ Nycodenz D-Hanks’液 HB
诺华Kymriah获日本批准，治疗2种B细胞恶性肿瘤
瑞士制药巨头诺华（Novartis）近日宣布，日本卫生劳动福利部（MHLW）已批准Kymriah（tisagenlecleucel）治疗2种不同的适应症：CD19阳性复发性或难治性（R/R）B细胞急性淋巴细胞白血病（ALL），CD19阳性R/R弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）。 值得一提的是
原代细胞和传代细胞培养有哪些区别
原代细胞和传代细胞培养有含义、培养过程、培养结果和应用四个方面区别：1、含义不同原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，也称初代培养。原代培养是将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。有几方面含义：原代培养中的代并非细胞的代数，因为培养过程中细胞经多次分裂已经
传代细胞的概述
传代细胞是适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞。例如幼年动物的肾、肺等组织的细胞是比较容易培养的，而神经细胞非常难培养了。幼年动物的肾、肺、肝、卵巢、上皮、肌肉与肿瘤等组织的细胞较易培养，而神经细胞则较难培养。原代细胞基础上通过胰酶等物质消化后继续用于细胞培养的细胞，它与原代细胞具有相同核型。
人体外周血淋巴细胞培养及染色体制片
实验概要学习和掌握人体微量血液体外培养制备染色体标本的方法。实验原理人体的1ml 外周血中一般含有约1-3×106个小淋巴细胞，通常它们都处于间期的GO和G1期。在培养条件下给予药物刺激时，经过53-72小时可在培养物中获得大量的有丝分裂细胞，供染色体标本制备和分析之用。这种外周血培养方法是在1
角膜缘干细胞的量子点标记及体外移植示踪
体外培养的人角膜缘上皮细胞（Human Limbal Epithelial Cells, HLEC）在治疗角膜缘干细胞缺陷性疾病方面显示良好的应用前景。但是，对于其移植后的存活状态、行为方式以及长期效应等尚不明确。伦敦大学眼科研究所及莫菲尔眼科医院Alex J. Shortt课题组，应用
保乳乳腺癌肿瘤切除术手术技巧
保乳乳腺癌肿瘤切除术的目的是切除乳腺癌，组织边缘消极，同时保留**轮廓。所有肿瘤技术共同的一般原则包括切除与包括癌症的纤维腺组织相关的皮肤岛，并在胸壁上推进深部纤维腺组织以消除后切除缺陷。最广泛使用的肿瘤技术包括侧段切除术，蝙蝠翼固定术，中央保乳手术（BCS），减少**固定术和环形**固定术。这些技
简述体外培养细胞的形态特征
体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征，可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。如羊水细胞为贴附型细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。1、成纤维型细胞在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称之为成纤维细
原核细胞体外翻译系统
实验材料 适用于杯状 DNA 的 S30 提取物 适用于线状 DNA 的 S30 提取物 适用于环状 DNA 的 T7S30 提取物 试剂、试剂盒 无核酸酶的水 [35S] 标记的甲硫氨酸 1 mmol L 缺少中硫氨酸的氨基酸混合物 缺少氨基酸的 S30 反应混合液 仪