ClonePix技术快速筛选和开发高表达GPCR的哺乳细胞系(一)
ClonePixTM 2系统提供了一种全新、快速评估哺乳细胞系GPCR靶蛋白表达水平的方法 1. 用哺乳表达系统快速评估GPCR靶蛋白的內源表达水平 2. 增加发现最优细胞反应器的可能性 3. 减少细胞系/抗体开发的时间—避免有限稀释法 背景 哺乳细胞GPCRs的内源表达通常是非常低的,一般不超过3,000拷贝/细胞。这些内源表达水平足够维护正常的受体功能,但在GPCR药物发现的应用存在挑战。大部分的筛选试验要求更高浓度的功能GPCRs呈现在细胞表面。例如,结构的研究,小分子药物设计和天然GPCR的功能抗体生产均需要GPCR表达水平是内源表达水平的几个数量级。在“低等”生物中尝试建立表达系统取得的成功非常有限,由于细菌的无效折叠;酵母的低产和杆状病毒不正确的翻译后修饰。这些挑战激发了药物发现应用中高表达GPCR蛋白哺乳细胞系的市场需求。 关......阅读全文
ClonePix技术快速筛选和开发高表达GPCR的哺乳细胞系(一)
ClonePixTM 2系统提供了一种全新、快速评估哺乳细胞系GPCR靶蛋白表达水平的方法 1. 用哺乳表达系统快速评估GPCR靶蛋白的內源表达水平 2. 增加发现最优细胞反应器的可能性 3. 减少细胞系/抗体开发的时间—避免有限稀释法 背景 哺乳细胞GPCRs的内源表达通常是非常低
ClonePix技术快速筛选和开发高表达GPCR的哺乳细胞系(二)
ClonePix2系统成像和挑取表达GPCR(M1)的细胞克隆 ClonePix2 成像和挑取阳性(CHO-M1)和阴性(CHO-K1)细胞。明场成像识别每个克隆的位置和形态,荧光成像识别高表达的M1。对PE标记的抗体,使用Cy5通道曝光6,000ms。 无论是直接标记方法还是双抗体方法,根据C
ClonePix结合CloneSelect-Imager技术加强开发病毒特异...(一)
ClonePix结合CloneSelect Imager技术加强开发病毒特异性的杂交瘤细胞ClonePix结合CloneSelect Imager技术加强开发 病毒特异性的杂交瘤细胞 双链DNA病毒引起人类大多数疾病。疱疹病毒和腺病毒家族和乳头瘤病毒在人体中会产生相似的症状。而且,由
G418筛选稳定表达细胞系
1.G418的配制:取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中,加蒸馏水至10ml,过滤消毒,4度保存。2.细胞培养:取待测培养细胞,制备成细胞悬液,按等量接种入多孔培养板中,培养6小时左右开始加药。3.制备筛选培养基:在100ug/ml~1000ug/ml范围内确定几个梯度,比如先做个100
加强单抗研究,抢占发展先机Molecular-Devices
单克隆抗体(mAbs)作为潜在的治疗药物,持续受到广泛关注和期待。随着抗体偶联药物(antibody-drug conjugate)和双特异性抗体产品陆续进入市场,单克隆抗体的应用仍然是治疗发展的关键部分。虽然在抗体开发和放大过程中的一些关键步骤依然是一个重要挑战,但是高质量的单克隆抗体工程细胞
G418筛选稳定表达细胞系PROTOCOL
1.G418的配制: 取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中,加蒸馏水至10ml,过滤消毒,4度保存。2.细胞培养:取待测培养细胞,制备成细胞悬液,按等量接种入多孔培养板中,培养6小时左右开始加药。3.制备筛选培养基:在100ug/ml~1000ug/ml范围内确定几个梯度,比如先做个10
单克隆抗体药物研发和筛选Molecular-Devices-ClonePix-2
导言:如何加速药物研发进程?何种利器可解决药物开发的瓶颈?如何在宝贵而丰富的天然药物资源中开发出现代化新药?单抗、疫苗、重组蛋白等大分子药物爆发式增长,您期待最快速开发出新药从而占据一席之地吗? Molecular Devices公司针对药物开发过程中的最关键步骤提供了完整的解决方案。药物筛选,
表达筛选的定义和方法
中文名称表达筛选英文名称expression screening定 义(1)通过基因表达对组织、细胞或个体进行的筛选。(2)通过所用载体内含抗生素抗性基因、报道基因等的表达去筛选转化子的方法。(3)通过自身或融合表达的蛋白质的某种特性(如绿色荧光蛋白)进行筛选的方法。应用学科生物化学与分子生物学(
青岛能源所开发新技术助力工业菌株快速筛选
原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/4/498816.shtm近日,中国科学院青岛生物能源与过程研究所(以下简称“青岛能源所”)单细胞中心开发一种低成本、非标记的微型液滴微流控平台,可通过单细胞微液滴培养、液滴自荧光检测、目标微液滴自动分选等步骤
ClonePix结合CloneSelect-Imager技术加强开发病毒特异...(二)
快速分离分泌抗体的高产克隆 ClonePix系统在流程效率和成本节约方面显示了显著改善,增加了发现稀有分泌子的概率。因此,ClonePix2技术单克隆抗体产生的时间减少到有限稀释法的一半。 在这个过程中,首先扩增亲本杂交瘤克隆的数量,然后Clon
ClonePix结合CloneSelect-Imager技术加强开发病毒特异...(三)
单克隆的验证和IgG分泌子的均一化 ClonePix系统再克隆和特异性确认之后,2个亚克隆扩增,重新种到具有CloneDetect试剂的半固体培养基的6孔板中。ClonePix系统成像和分析表明克隆正常的分泌了IgG,同时,通过均相均一化过程,能观察到高产IgG的克隆(图5)。
急性中毒物质的快速筛选和检测(一)
概述 GB/T 5009.199-2003农药中毒残留物的快速筛选及蔬菜中农药残留量的快速检测 APHO-E-01-2005鼠药(毒鼠强、氟乙酰胺、敌鼠等)中毒残留物的快速筛选检测 APHO-E-02-2005亚硝酸盐中毒残留物的快速筛选及食品中残留量的快速检测
克隆的筛选和快速鉴定
实验概要掌握快速细胞破碎法测定大小不等的众多的质粒DNA;和菌落PCR快速鉴定克隆。实验原理在这个实验方法中,只需配制一种细胞缓冲液(它可以在室温下保存,长期使用)。利用破碎细胞缓冲液中的阴离子去污剂---SDS在37℃溶解膜蛋白,使细胞破裂,并解聚核蛋白,SDS还能与蛋白质结合形成复合物,使得蛋白
基因芯片技术的应用药物筛选和新药开发
由于所有药物(或兽药)都是直接或间接地通过修饰、改变人类(或相关动物)基因的表达及表达产物的功能而生效,而芯片技术具有高通量、大规模、平行性地分析基因表达或蛋白质状况(蛋白质芯片)的能力,在药物筛选方面具有巨大的优势。用芯片作大规模的筛选研究可以省略大量的动物试验甚至临床,缩短药物筛选所用时间,提高
转化克隆的筛选和鉴定——快速PCR筛选法
实验材料重组大肠杆菌试剂、试剂盒LB培养基氨苄青霉素乙醇质粒提取试剂盒引物Taq酶PCR缓冲液甘油硫酸镁dNTP蒸馏水琼脂糖仪器、耗材试管记号笔酒精灯冰箱牙签旋涡混合器微量移液取样器移液器吸头离心管双面微量离心管架制冰机恒温摇床超净工作台摇菌管PCR仪培养皿凝胶电泳仪
农杆菌瞬时表达CRISPR编辑基因和快速筛选突变植株新方法
最近,美国康涅狄格大学和南京农业大学李义教授团队在Horticulture Research发表了题为“A method for the production and expedient screening of CRISPR/Cas9-mediated non-transgenic mutan
新品上市-|-Andromeda-X-全新蛋白质表达和功能快速筛选系统
当您从事抗原生产酶促蛋白优化小分子药物靶蛋白表达重组膜蛋白重组蛋白研发和生产是否有如下困扰常规技术手段太过繁杂,耗时耗力?蛋白表达水虽然高,但无法同时监测其构象稳定性信息?无法使用粗裂解液进行快速筛选?无论您是从事蛋白质研究或者生产工作,您都需要一个帮助快速优化重组蛋白表达的得力助手。Androme
农杆菌瞬时表达CRISPR编辑基因和快速筛选突变植株新方法
最近,美国康涅狄格大学和南京农业大学李义教授团队在Horticulture Research发表了题为“A method for the production and expedient screening of CRISPR/Cas9-mediated non-transgenic mutan
农杆菌瞬时表达CRISPR编辑基因和快速筛选突变植株新方法
最近,美国康涅狄格大学和南京农业大学李义教授团队在Horticulture Research发表了题为“A method for the production and expedient screening of CRISPR/Cas9-mediated non-transgenic mutan
基因表达快速分析新技术
实验概要介绍了一种新的基因表达快速分析技术-MPSS 技术的基本原理、技术路线及其优点和应用。实验原理MPSS技术是利用限制性内切酶和荧光检测知识,发展出的一种辨认和测定细胞每一个cDNA 克隆片段末端16~20bp序列的方法,从而查明细胞内所有基因的表达情况。MPSS 分析系统大体可划分为三大部分
结构特征和元素特征一般怎么快速提取和筛选
这个问题包含了很多的步骤:①特征提取:特征值的获取可以来源于他人已得到的数据(数据库),也可以高通量计算获得,还可以通过结构的坐标通过一定的算法公式转换为特征值;②将不同结构对应的特征值存到数据库,通过条件的组合来层层筛选物性,excel没有组合筛选的功能,数据量较大时会使电脑卡顿,所以这一步用数据
术语解析和区别:高内涵成像、高内涵筛选和高内涵分析
本文浅析了高内涵成像(HCI)、高内涵筛选(HCS)、高内涵分析(HCA)等术语间的区别,将这些基于图像的自动化高通量技术逐渐用于生成数据,可对临床前研究和下游Go/No-go决策提供支持。引言显微镜技术在过去几十年所取得的惊人进步,使得HCI(高内涵成像,High content imaging)
基因芯片技术在药物筛选和新药开发领域的应用
由于所有药物(或兽药)都是直接或间接地通过修饰、改变人类(或相关动物)基因的表达及表达产物的功能而生效,而芯片技术具有高通量、大规模、平行性地分析基因表达或蛋白质状况(蛋白质芯片)的能力,在药物筛选方面具有巨大的优势。用芯片作大规模的筛选研究可以省略大量的动物试验甚至临床,缩短药物筛选所用时间,提高
什么是高通量筛选技术?什么是高内涵药物筛选?
【导读】高通量筛选是指以分子或和细胞水平的实验方法为基础,采用不同密度的微孔平板作为实验载体和自动化工具操作实验步骤,通过快速灵敏的检测装置在同一时间内对海量样品进行生物活性测定、采集实验数据和数字化分析处理,并以相应的信息管理软件支持整个系统正常运转的技术体系。高内涵筛选是指在保持细胞结构和功能完
用CRISPR技术开发新型筛选工具
“我们每个人都有α-突触核蛋白,”Burnett生物医学学院博士生Levi Adams说。“但是当出现帕金森后,该蛋白在脑部的含量出现异常。如果我们能‘看’到这种蛋白质在细胞内的变化,我们就能找到让它含量上升的原因和让它下降的措施。” 这项由美国国家卫生研究院资助,发表在Scientific
推开GPCR靶点与代谢性疾病研究的敲门砖动物模型
基因编辑技术最具代表性的就是在人类疾病动物模型制备方面的应用。随着经济发展,代谢性疾病的发病率逐年增高,其中心血管疾病导致的死亡占我国居民全部死因的40%以上,死亡率居于首位[1]。通过构建包括心血管疾病、糖尿病等代谢领域基因编辑小鼠模型,并进行多种深入研究,可以找到相关疾病的潜在治疗靶点,研
动态实时的细胞分析
图1. E-plate底部的交叉微电极工作原理示意图。贴壁生长的哺乳动物细胞与微电极间的相互作用产生的阻抗与孔内的细胞数量、细胞形态以及细胞黏附质量相关;阻抗的大小用细胞指数(CI)进行衡量。生物学和细胞进程是动态变化的,而目前的细胞检测方法多采用传统的终点法,需要标记,并且会破坏细胞
蛋白质芯片技术应用与基因表达的筛选
基因表达的筛选AngelikaL.等人从人胎儿脑的cDNA文库中选出92个克隆的粗提物制成蛋白质芯片,用特异性的抗体对其也进行检测,结果的准确率在87%以上,而用传统的原位滤膜技术准确率只达到63%。与原位滤膜相比,用蛋白质芯片技术在同样面积上可容纳更多的克隆,灵敏度可达到pg级。
助力抗“疫”,我们可以
若在后面回头来看历史,过去的这两个月必将刻骨铭心。 以至于网络上很多人说 2020 年的年初过的太过魔幻,看起来好像流浪地球的开头—— 不熄的山火、一触即发的战争、突如其来的坠机,还有这场真的开始和每个人息息相关的肺炎疫情。 从去年的 12 月隐隐显出眉目,大家还乐观的觉得,不过是一场小范
研究开发出原位代谢靶向的功能菌筛选、培养和强化技术
环境修复与生态系统工程高度依赖于原位功能菌的挖掘和应用,但长期以来,业界普遍采用的“先养后筛”范式面临着挑战。由于缺乏有效的菌群原位功能快检方法,因此通常难以快速识别和挖掘具有潜在功能的原位菌株。此外,即使能分离出功能菌,其在纯培养条件下的代谢效能(如除磷效率)往往与其原位环境有巨大差异,经常导致环