动物、植物、微生物中提取高质量的基因组DNA(一)
基因组DNA的提取概 述基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。一般来说,构建基因组文库, 初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下),并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。不同生物(植物、动物、微生物)的基因组......阅读全文
病毒-DNA-的提取实验——全血细胞中病毒-DNA-的提取
实验材料全血试剂、试剂盒裂解缓冲液 A裂解缓冲液 B蛋白酶 K仪器、耗材离心机水浴锅实验步骤1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀, 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀,再重复离心 1次,弃上清液。3. 用 117µL
动物组织中DNA的制备
(一)原 理DNA是所有生物体的基本组成物质。真核生物DNA主要存在于细胞核中。制备DNA时应将细胞核膜打破方能释放出来。细胞中的DNA和RNA分别与蛋白质相结合,形成脱氧核糖核蛋白及核糖核蛋白。在细胞破碎后,这两种核蛋白将混杂在一起。因此,要制备DNA首先要将这两种核蛋白分开。已知这两种核蛋白在不
水生动物病害基因组DNA快速提取试剂盒使用说明
水生动物病害基因组DNA快速提取试剂盒产品说明核酸抽取系列是检测试剂配套使用的DNA/RNA提取系列产品。本产品为水生动物病害基因组DNA快速提取试剂,采用独特的溶解系统,可快速地从样品中制备DNA。提取过程中无需使用有毒的酚氯仿,也无需进行耗时的醇类沉淀,整个过程只需10 min。产品组成0711
水生动物病害基因组DNA/RNA提取试剂盒使用说明
水生动物病害基因组DNA/RNA提取试剂盒一、简介水生动物病害基因组DNA/RNA提取试剂盒适合于快速从水生动物组织匀浆液中提取高纯度的病害基因组核酸。试剂盒基于硅胶柱纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀,获得的核酸可直接用于PCR/RT-PCR、Sorthern杂
BIOG血清、血浆游离DNA提取试剂盒(病毒基因组DNA提取)...
BIOG血清、血浆游离DNA提取试剂盒(病毒基因组DNA提取)使用说明特点◎操作简便快速,可在半小时内获得理想的DNA;◎提取DNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.7-1.9;◎产量更高,较国内同类产品高出20%;◎可用于血清、血浆等游离样本中DNA的提取;◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂,安全
种子DNA提取仪在黄瓜种子DNA快速提取中的应用
市面上出售的很多作物种子在正式销售之前,都需要进行种子纯度鉴定,而采用最多的种子纯度鉴定技术为SSR技术,该技术的应用是建立在良好的种子DNA提取方法之上的,因此在进行种子纯度检测的时候,可以利用种子DNA提取仪来快速提取种子DNA。 种子DNA提取仪可以说是实验室样品前处理名副其实
提取基因组dna后,怎样判断dna的纯度和质量
用紫外分光光度计测od值a260/a280正常1.8左右如果制备的dna样品a260/a2802,说明样品中rna过高,可用rnase消化后,用酚、氯仿、异戊醇抽提,再用乙醇沉淀dna
磁珠法提取基因组DNA的原理
a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生物
酵母菌基因组DNA的提取实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 SE缓冲液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K缓冲液 Tris仪器、耗材 高速冷冻离心机台式离心机恒温水浴低温冰箱冷冻真空干燥器取液器电泳仪水平电泳槽紫外观测仪实验步骤 1. 1.5 ml 对数生长期细菌细胞。2. 离心,12 000 rpm,1-2 min。3.
磁珠法提取基因组DNA的原理
(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生
酵母菌基因组DNA的提取实验
基本方案 实验材料 酵母菌 试剂、试剂盒
基因组DNA提取纯化的注意事项
大多数动物组织可以用裂解缓冲液和蛋白酶/蛋白酶 K 进行高效裂解。在加入裂解液之前需要将组织切成小块,有条件的话建议使用 TissueLyser 或研钵等提前进行均质化。骨骼肌,心脏,皮肤等组织含有收缩蛋白,结缔组织和胶原蛋白,所以利用蛋白酶 / 蛋白酶 K 进行充分消化是必须的。FFPE
磁珠法提取基因组DNA的原理
(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生
磁珠法提取基因组DNA的原理
(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生
酵母基因组DNA简易高效提取方案
1. 10ml菌液过夜培养至饱和(OD600值为2-3) 2. 离心沉降细胞(Sorvall中以2000rpm的速度),然后以冷的、等体积的无菌蒸馏水洗涤 3. 将细胞沉淀在200μl 裂解缓冲液中重悬浮,然后加入约300μl 玻璃珠和200μl的1:1苯酚:氯仿混和液 4. 漩涡摇匀1-2min
基因组DNA提取与PCR扩增技术
一、基因组DNA提取实验目的基因组DNA的制备是基因分析的前提。 本实验要求掌握基因组DNA提取的基本方法。实验原理 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的。核酸与蛋白质之间的结合力包括离子键、氢键、范德华力等,破坏或降低这些结合力就可把核酸与蛋白分开。 DNA、RNA所含有的嘌呤环和嘧啶
植物提取行业概况(一)
一、植物提取物的定义:植物提取物是以植物为原料,按照对提取的最终产品的用途的需要,经过物理化学提取分离过程,定向获取和浓集植物中的某一种或多种有效成分,而不改变其有效结构而形成的产品。按照提取植物的成分不同,形成甙、酸、多酚、多糖、萜类、黄酮、生物碱等;按照最终产品的性状不同,可分为植物油、浸膏、粉
植物组织制备基因组DNA实验
氯化铯法 CTAB法 实验方法原理 加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则
植物组织制备基因组DNA实验
实验方法原理 加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。实验材料 植物组织试剂、试剂盒 抽提缓冲液十二烷基肌氨酸钠TE异丙醇溴化乙锭氯化铯仪器、耗材 离心机实验步骤 收取1
采用Agilent-Femto-Pulse系统对不同基因组DNA提取进...(一)
采用Agilent Femto Pulse系统对不同基因组DNA提取进行质量评估作者Chava Pocernich,Jolita Uthe,Steve Siembieda 安捷伦科技有限公司摘要Agilent Femto Pulse 系统采用革命性设计,是唯一一款能够自动进行高分子量 (HMW)
病毒-DNA-的提取实验——新鲜或冷冻组织中病毒-DNA-的提取
实验材料新鲜或冷冻组织试剂、试剂盒匀浆缓冲液裂解液仪器、耗材剪刀匀浆器离心机实验步骤1. 取新鲜或刚解冻的组织去除血水和结缔组织,在冰浴上剪成小碎块。2. 将组织碎块移入预冷的匀浆器中,按 10 ml/g 加入匀浆缓冲液,混匀,制成匀浆液。3. 将匀浆液移人 Ep 管, 5000 r/min 离心1
粗提取植物DNA的实验步骤和原理
提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理:CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分
水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒使用说明
水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒一、简介水生动物病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒适合于快速从水生动物组织匀浆液中提取高纯度的病毒基因组核酸。试剂盒基于硅胶柱纯化技术,提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀,获得的核酸可直接用于PCR/RT-PCR、Sorthern杂
动物细胞基因组DNA-快速提取试剂盒(50T)说明书
动物细胞基因组DNA 快速提取试剂盒(50T)概述:本方法用于动物细胞基因DNA 的快速提取,可提取107-108 动物细胞,其质量能够满足各种分子生物学要求。组成:1.溶液A 1ml RNase A 10mg/ml。-20℃保存2.溶液B 20ml3.溶液C 65ml4.溶液D 1.5ml Res
核酸提取仪应用领域
几乎在每个实验室,与生物分子相关的分离纯化工作都是十分重要,且必不可少的。但要对多个样品进行纯化还是相当困难的,不仅需要选择合适的纯化技术,而且工作量也特别大,很难满足当前飞速发展对高通量样品进行提取纯化的需求。磁珠自动核酸提取纯化系统是使用磁珠法技术,可广泛应用于基因组学、疾控医疗、食品安全、法医
核酸纯化仪在基因组学、CDC和分子诊断方面的应用
基因组学 天隆 NP968磁珠提取纯化系统,非常适合于基因组学的研究。无论提取样本的来源是微生物、动物、植物或是病毒,结合特别针对TIANLONG NP968磁珠提取纯化系统优化的TIANLONG全血基因组DNA提取试剂盒、白细胞层全血基因组提取试剂盒、动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒,可
三代测序的DNA提取和宏基因组学分析(一)
改进的人类肠道微生物组的高分子量DNA提取,纳米孔测序和宏基因组学装配Improved high-molecular-weight DNA extraction,nanopore sequencing and metagenomicassembly from the human gut microb
海洋不同生境总基因组DNA的提取
实验概要本实验采用NaI/玻璃粉方法、溶菌酶与蛋白酶K/离心吸附柱方法以及试剂盒PowerSoil DNA Isolation Kit (MO BIO Laboratories,Inc.)三种方法对海洋岸边土壤、海水以及沉积物三种样品进行DNA抽提。为比较不同方法的抽提效果,采用分光光度计对DN
方法三:酵母菌基因组DNA的提取
方法三:酵母菌基因组DNA的提取一:仪器:同方法一二:试剂:SE缓冲液(1M山梨醇,0.1MEDTA pH7.5);溶菌酶(50mg/ml);20%PVP;蛋白酶K缓冲液(10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA);其余同前三:操作 1.5ml 对数生长期细菌细胞
方法二:细菌基因组DNA的微量提取法
本方法通过SDS裂解细胞,蛋白酶降解蛋白,CTAB去除多糖成分一:仪器:同方法一 二:试剂:TE、TAE缓冲液;10%SDS;5MNaCL;20mg/ml蛋白酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB,0.7M NaCL 4.1gNaCL 溶于80ml水中,缓慢加入10gCTAB,加热溶解);