动物、植物、微生物中提取高质量的基因组DNA(一)
基因组DNA的提取概 述基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。一般来说,构建基因组文库, 初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下),并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。不同生物(植物、动物、微生物)的基因组......阅读全文
细菌基因组DNA提取实验
细菌基因组DNA提取可应用于:(1)获得细菌基因组DNA;(2)作为PCR模板;(3)用于测序、遗传信息分析等。实验方法原理本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DN
血基因组DNA提取实验
实验方法原理 本试剂盒采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。适用于从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA。实验材料 抗凝全血试剂、试剂盒 血基因组DNA 试剂盒仪器、耗材 96孔深孔板96圆孔板96孔DNA制备板
关于土壤基因组DNA提取
土壤样品含有大量的微生物,其中绝大部分的微生物都是无法直接培养进行繁殖和研究。从土壤样品中提取 DNA 是研究土壤微生物zui为有效的方法。目前从土壤样品中提取微生物 DNA 的方法主要有直接法和间接法。直接法是指把土壤样品放在裂解液中,经过有效的破壁方法使微生物的DNA 全部释放到裂解液中,然后再
细菌基因组DNA提取实验
实验方法原理 本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD
血基因组DNA提取实验
实验方法原理 采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。 实验材料 抗凝全血
细菌基因组DNA提取实验
实验方法原理 本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0×109 细菌中获得多至20 μg 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。实验材料 细菌培养物
植物DNA提取实验——机械法
植物DNA提取实验用于:(1)获得较纯的真核细胞基因组DNA;(2)后续PCR分析,RFLP分析,基因文库的构建,基因探测等的研究。实验方法原理这是一种快速简便提取植物总DNA的方法。先将新鲜的叶片在液氮中研磨,以机械力破碎细胞壁,然后加入十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液,使细胞膜破裂。同时将核酸与植物
CTAB法提取植物总DNA
实验概要CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法,通过实验掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。 实验原理CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特
植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做
植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做?具体步骤怎么样?植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。(这时选择设备的时候注意选择那种通用性强的,可以一机配多种
植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做
植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做?具体步骤怎么样?植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。(这时选择设备的时候注意选择那种通用性强的,可以一机配多种
血基因组DNA提取实验——血基因组DNA大量试剂盒提取法
实验方法原理本试剂盒采用独特的两相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DN的目的。适合从5 ml 的抗凝人或哺乳动物全血,或500 ul 抗凝鸟类或两栖动物全血中获得多至250 ug 的基因组DNA。实验材料抗凝全血试剂、试剂盒血基因组DNA大量试剂盒仪器、耗材DNA
植物基因组提取(CATB法)
一、实验目的 掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。 二、实验原理 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)
植物总DNA提取过程中应该注意哪些问题
取样的材料最要是新鲜的,而且取嫩叶,如果取老叶的话,含有较多的多糖和酚类物质等杂质,这样加大了纯化的难度。磨样时最好是加液氮,磨样速度要快。一般用酚和氯仿抽提两次,吸取上清时,一定要小心,不要把白色物质吸入。抽提时不要有太力振动,操作也要仔细,尽量避免DNA断裂。
如何从动物肝脏中提取DNA?
一、原理: 在浓氯化钠(1—2mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很大,核糖核蛋白的溶解度很小,在稀氯化钠(0.14 mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很小,核糖核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同浓度的氯化钠溶液,将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。 将
用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法(一)
一种用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法 来源:方统科技----------------------------------------------------------------------------------摘要: 本文介绍了一种用于PCR的植物基因组DNA的快速制备方法。该方法
从不同动物组织中提取总DNA的方法及步骤(一)
1. 从动物组织中提取总DNAa.取不超过25mg的组织(脾不超过10mg),剪切成尽可能小的碎片,加入180微升样品裂解液A。请勿使用过多的样品,过多的样品会导致抽提效果下降。较小的组织碎片会使裂解速度加快,裂解效果提高。新鲜或冻存的组织均可,但固定过的组织请参考后续的其它步骤进行。b.加入20微
怎样提取微生物的质粒(DNA)
碱提法:一、试剂准备1.溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8.0).1M Tris-HCl(pH 8.0)12.5ml,0.5M EDTA(pH 8.0)10ml,葡萄糖4.730g,加ddH2O至500ml.在10 lbf/in2高压灭菌
肠道微生物DNA的提取方法
实验概要肠道微生物DNA是进行微生物分子生态学研究的前提。能否获得高的DNA提取率和高质量的DNA,从而真实地反映微生物群落的实际情况,是保障研究结果是否可靠的关键。如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本研究采用物理方法,化学方法,酶解法等进行DNA提取,并对其进行
病毒-DNA-的提取实验——培养细胞中病毒-DNA-的提取
实验材料细胞试剂、试剂盒裂解液TE 缓冲液仪器、耗材培养瓶EP管真空泵实验步骤1. 贴壁培养细胞倾去培养液,加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中,2000 r/min 离心 10 min, 弃上清液,用 PBS 悬浮细胞,离心洗涤 2~3次,用 PBS
单头昆虫基因组DNA的提取
实验概要一种简单快速提取单头小型昆虫基因组DNA的方法。主要试剂1. 蛋白酶K[美国Merck公司]2. 三羟甲基氨基甲烷(Tris)[美国Amresco公司]3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]4. 琼脂糖及溴化乙锭(EB)[美国Amresco公司]5. 乙二胺四乙酸钠(Na2EDT
提取基因组DNA的方法有哪些
1、苯酚氯仿抽提法优点是采用了实验室常见的试剂和药品,做起来成本比较低廉。缺点是由于使用了苯酚、氯仿等试剂,毒性较大,长时间操作对人员健康有较大影响,而且核酸的回收率较低,损失量较大,由于操作体系大,不同实验人员操作重复性差,不利于保护RNA,很难进行微量化的操作。 2、离心柱法离心柱法DNA提取它
细菌基因组DNA提取方法综述
细菌基因组DNA的提取方法综述,提供了5种方法。 1 快速微量提取法A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中,12000rpm离心1min, 丢去上清夜,收集菌体。B.加入400ul裂解液(40mMTris-醋酸,20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8)混匀,置于37oC水浴1hr
动物组织基因组DNA快速提取试剂盒使用说明书
动物组织基因组DNA快速提取试剂盒一、简介本产品采用独特的溶解系统,可快速地从各种生物样品中快速制备DNA,便于PCR扩增。该方法样品预处理较简单,提取过程无需使用有毒的酚氯仿抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀,整个提取过程只需15-20 min即可。二、组成(48测试)071051M
植物DNA的提取实验中吸收样品、抽提应注意什么
抽提时应缓慢摇匀,不能太用力,时间要适当长一点。离心后吸取上清要慢,枪头最好用蓝枪头或是剪过的黄枪头,注意千万不能触到蛋白膜。原因就是DNA链容易断裂,所以要轻,要用口大的枪头。为了抽提效果好所以延长时间。
动物细胞基因组DNA的制备
实验概要本实验介绍了动物细胞基因组DNA的制备原理及操作流程。本方法一般可从5×107培养的非整倍体细胞(如HeLa细胞)中获得大约200μg DNA。DNA的长度可达到100~150kb。20ml正常血的DNA产量约为250μg。实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组
动物基因组DNA-的分离纯化实验
盐溶法 实验方法原理 根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离, 然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白,使核酸释放出来, 再利用
动物基因组DNA-的分离纯化实验
实验方法原理 根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离, 然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白,使核酸释放出来, 再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出, 达到分离提纯的目的。在0 . 14 mol/ L 的氯化钠溶液中, RNA 核蛋白(RNP) 溶解度大, 而DNA
植物总DNA提取方法和过程
植物总DNA提取植物总 DNA 的提取有多种方法,转基因食品检测中不同用途的 DNA 提取应该采用各自适宜的方法进行。下面介绍用于新鲜或干燥的植物性食品检测的常见 DNA 提取方法。1、可用于 PCR 的粗提液微量制备1)原理与特点利用搅拌破碎食品组织,碱液破坏细胞壁然后再用缓冲液进行提取。此法主要
高通量的PCR模板植物基因组DNA制备方法(一)
摘 要:制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费人工的工作。本文介绍一种高通量的植物基因组DNA(gDNA)快速制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(长度约30 mm或40 mm,与96方孔板的孔深大致相同) 或一小块(约2~4 mg)双子叶植物叶片放入9
病毒-DNA-的提取实验——拭子标本中病毒-DNA-的提取
实验材料拭子标本试剂、试剂盒TE 缓冲液裂解液蛋白酶K仪器、耗材离心机棉签实验步骤预操作:将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于 2 ml 生理盐水中,洗下标本。若标本在 4 h 内处理,可置于室温保存,否则需 4℃保存。1. 将生理盐水中的标本以 2 000 r/min 离心 5 min