高通量的PCR模板植物基因组DNA制备方法（二）
1.2 植物材料 1.2.1 水稻秧苗。将1.6-mL 96方孔板底部用6 mm电钻头打穿，或将旧96孔PCR板的底部剪去约4 mm。使用时将方孔板压入少量泥巴。每孔放入1粒萌动的水稻种子，在自然日光下(或人工气候箱)生长至3~4片叶。其他植物小苗也可用类似方法种植。 1.2.2 水稻大植株的鲜叶片或干燥叶片。 1.2.3 其他单子叶和双子叶植物的鲜叶片或干燥叶片。 1.3 操作方法 1.3.1 鲜叶片基因组模板DNA的制备 (1) 用手摘取水稻秧苗叶一小段(对大植株的叶片，避开主叶脉撕取约3 mm宽的一小段)，放入2.2-mL或1.6-mL的96方孔板的孔中，叶片长度与方孔板深度大致相同，对其他单子叶植物叶片的操作与对水稻相同，双子叶植物叶片量为2~4 mg(不要太多)。 ......阅读全文
聚合酶链式反应（PCR）模板的制备
模板的制备PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象，可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。标本处理的基本要求是除去杂质，并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以
小麦种子直接PCR
实验概要本实验提供了小麦种子直接PCR的几种方案。实验原理小麦是世界第二大粮食作物，仅次于玉米，作为人类主食之一，对于小麦的研究由来已久。现在利用现代分子生物学手段改良小麦种子，筛选优良品种成为各大种子公司研究机构的首选。另外由于现今转基因植物的广泛应用以及外来生物入侵，海关检验检疫部门对于转基因，
植物基因组DNA的RFLP
实验概要本实验介绍了植物基因组DNA的RFLP多态性分析的原理及操作步骤。通过本实验可了解不同植物或同一植物不同个体之间基因组DNA顺序的差异性，掌握DNA限制性酶切片段长度多态性研究的基本方法。实验原理DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间，也存在于同一种植物的
哺乳动物中制备基因组DNA实验——制备DNA
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。实验材料动物组织试剂、
为什么pcr的时候，DNA模板浓度高了，会有拖尾
因为pcr利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。DNA模板纯度不纯的时候，会对PCR起抑制作用。PCR反应中，模板只要1ng就可以，所以模板浓度不要太高。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)。并混入限量
新一代高通量测序技术SOLiD简介
目前市场上有四种高通量测序仪，分别是Solexa，454 (GS-FLX)，SOLiD和Polonator。根据测序原理，它们可以被分为两大类：使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454，及使用连接法测序(Sequencing by Ligation
高通量测序技术SOLiD简介
目前市场上有四种高通量测序仪，分别是Solexa，454 (GS-FLX)，SOLiD和Polonator。根据测序原理，它们可以被分为两大类：使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454，及使用连接法测序(Sequencing by Ligat
新一代高通量测序技术SOLiD简介
目前市场上有四种高通量测序仪，分别是Solexa，454 (GS-FLX)，SOLiD和Polonator。根据测序原理，它们可以被分为两大类：使用合成法测序(Sequencing by Synthesis)的Solexa和454，及使用连接法测序(Sequencing by Ligation
小鼠肝基因组DNA制备
原理DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中，制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。
小鼠肝基因组DNA制备
原理DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中，制备 DNA 的原则是既要将 DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持 DNA 分子的完整。蛋白酶K 及链霉蛋白酶 E 的应用使这两个原则得到了保证。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。
高通量植物（转）基因检测的利器植物材料直接PCR技术
摘要： 北京百泰克生物技术有限公司暨推出通用植物总RNA提取试剂盒（RP3301）成功解决了各种难提植物RNA的问题后，新近又针对高通量植物DNA的提取扩增推出了最新产品——植物直接PCR试剂盒（PR7501），该试剂盒不需要液氮和研磨杵研磨，也不需要钢珠破碎，更不借助任何特殊的仪器设备，方法及
高通量植物（转）基因检测的利器——植物材料直接PCR技术
摘要： 北京百泰克生物技术有限公司暨推出通用植物总RNA提取试剂盒（RP3301）成功解决了各种难提植物RNA的问题后，新近又针对高通量植物DNA的提取扩增推出了最新产品——植物直接PCR试剂盒（PR7501），该试剂盒不需要液氮和研磨杵研磨，也不需要钢珠破碎，更不借助任何特殊的仪器设备，方法及其
高通量植物（转）基因检测的利器植物材料直接PCR技术
高通量植物（转）基因检测的利器---植物材料直接PCR技术 摘要： 北京百泰克生物技术有限公司暨推出通用植物总RNA提取试剂盒（RP3301）成功解决了各种难提植物RNA的问题后，新近又针对高通量植物DNA的提取扩增推出了最新产品——植物直接PCR试剂盒（PR7501），该试剂盒不需要
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法（二）
PCR芯片的设计和所包含的基因 96孔模式的每种RT2Profiler PCR芯片，含有基因特异性引物，可用于研究84个与某种信号通路或者疾病相关的基因。此外，芯片中还有设置了3个检测实验质量的对照。图2为PCR芯片模式图。由于每种芯片都是根据特别的信号通路或者特定的应用范围设计的，研究者可以用它来
如何确定转基因拷贝数
鉴定转基因植物的第一步就是要确定被转基因已经稳定的整合到了染色体上。第二步任务就是评估有多少个转基因拷贝，以及每个转基因的表达水平如何。一般经过上游表达载体的设计构建以及下游转化体系的建立、转化品系的筛选鉴定等一系列步骤后，即获得 T 0 代转基因植物。在转化过程中，外源 DNA 随机插入植物
基因型鉴定试剂盒使用说明
试剂盒成分 1、 YSY Buffer 2、2*PCR Master Mix（使用实验室常用的酶即可，由客户自备） 储藏条件：4oC实验步骤 1、细胞与动物组织的准备： 1.1 培养细胞准备： 以培养密度为 1´106 个/ml 为例，在超净台内取 1ml（内含 300-1000 个细胞）；对于某些
荧光定量PCR实验指南3
3.3 引物、探针的纯度和稳定性定制引物的标准纯度对于大多数PCR应用是足够的。部分应用需要纯化，以除去在合成过程中的任何非全长序列。这些截断序列的产生是因为DNA合成化学的效率不是100％。这是个循环过程，在每个碱基加入时使用重复化学反应，使DNA从3'到5'合成。在任何一个循环都
测序简史（二）
（3）原因不明的复杂结构，测序结果出现突然信号减弱或消失从序列上看，DNA碱基排列并无特别异常。估计是DNA整体出现复杂结构，从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行。图4 复杂结构引起的信号中断 2.出现套峰是什么原因？在测序反应中，模板或引物的原因都可能造成套峰的形成，归结其形成原因有以下几点
细菌中制备基因组DNA实验——小量制备
真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。实验方法原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液
制备DNA测序模板实验——双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性
实验材料DNA试剂、试剂盒NaOHEDTA乙酸钠乙醇仪器、耗材离心管离心机摇床实验步骤1. 加入约0.5 pmol 重组质粒DNA于0.5 ml 微量离心管中，如果体积大于20 μl 应以乙醇沉淀，重溶于20 μl 水。2. 如果体积小于20 μl，用水补足20 μl。3. 加入2 μl 2
PCR的模板最大是多少
长片段PCR扩增试剂盒所用的酶是Taq聚合酶和有校正功能的聚合酶的混合酶,这种混合酶可以染色体和其它细胞器的DNA为模板高效进行PCR反应。在人的染色体上可以扩增出27kb的DNA片段,而以DNA为模板则可以扩增出40 kb的片段.现在的那些试剂盒还是比较牛的
方法二：细菌基因组DNA的微量提取法
本方法通过SDS裂解细胞，蛋白酶降解蛋白，CTAB去除多糖成分一：仪器：同方法一 二：试剂：TE、TAE缓冲液；10%SDS；５ＭNaCL；20mg/ml蛋白酶Ｋ；CTAB/NaCL溶液(10% CTAB，0.7M NaCL 4.1gNaCL 溶于80ml水中，缓慢加入10gCTAB，加热溶解)；
DNA测序技术的现状和发展（四）
1.1.3.2 模板制备程序完全的体外大规模模板制备工作是达成高通量、低价格测序技术的前提。已广泛使用的乳液PCR扩增技术就是一种很好的方法。不过，由于很难在热循环测序反应中保证乳液微滴的稳定性，因此最开始实验的模板扩增方法是恒温扩增法（isothermal）。乳液PCR不需要借助细菌的帮助就能扩增
动物细胞基因组DNA的制备
实验概要本实验介绍了动物细胞基因组DNA的制备原理及操作流程。本方法一般可从5×107培养的非整倍体细胞（如HeLa细胞）中获得大约200μg DNA。DNA的长度可达到100~150kb。20ml正常血的DNA产量约为250μg。实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组
细菌中制备基因组DNA实验
小量制备 氯化铯法 实验方法原理 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿
细菌中制备基因组DNA实验
实验方法原理 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。实验材料 细菌试剂、试剂盒 TE氯化铯溴化乙锭NaCl乙醇CTAB仪器、耗材 离心机摇床实验步骤 1
全自动核酸分子诊断系统的某些进展（一）
摘 要 随着后基因组时代的到来，全自动核酸分子诊断系统得到了广泛的应用。本文立足于国内外医疗仪器市场全自动核酸分子诊断系统的现状，介绍了全自动核酸分子诊断系统的基本组成及其关健技术。在此基础上介绍了国际上全自动分子诊断系统的主要生产商及其产品，并对具有代表性的几个产品的特点进行了分析。最后对全自动核
SDS法提取植物基因组DNA
本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质，最后用乙醇或异丙醇沉淀。一 材料、试剂和仪器1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料2 试剂(1)提取缓冲液Tris-H
转基因植物TETR基因PCR检测试剂盒样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。。也可以选购本公司的一管式病毒DNAOUT或其升级版柱式病毒 DNAOUT。本试剂盒免费赠送15次DNA病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAOUT的成分)。稀释阳性对照(以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标
llumina高通量测序平台的应用
Illumina公司的新一代测序仪Genome Analyzer最早由Solexa公司研发，利用其ZL核心技术“DNA簇”和“可逆性末端终结（reversible terminator）”，实现自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。Illumina公司于2007年花费6亿美金的巨资收