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半制备规模单链RNA纯化(一)

Sean M. McCarthy and Martin GilarWaters Corporation, Milford, MA, U.S.引言寡核苷酸合成是非常高效和高产率的过程。在固相载体上进行寡核苷酸反应的典型产率为每耦合阶98~99.5%。在典型的多阶寡核苷酸合成中,杂质聚集在一起,即使是一般大小的21基体寡核苷酸的总产率也达到67~90%,较长链的寡核苷酸的产率相应较低。研究人员通常需要使用纯度高于初步合成混合物的材料。因此,用于基因敲除、基因分型和诊断目的寡核苷酸通常需要在合成后进行纯化。适合实验室规模寡核苷酸纯化的经济可行的解决方案很少,而现有的方法(比如离子交换色谱分析法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法)通常比较繁琐和费时。在本应用说明书中,我们介绍了一种成本低、速度快的中等数量材料的纯化方法,单次进样载量高达140 nmoles,采用沃特世 ACQUITY UPLC®系统和寡核苷酸分离技术(OST)色谱柱化学技术可达......阅读全文

半制备规模单链RNA纯化(一)

Sean M. McCarthy and Martin GilarWaters Corporation, Milford, MA, U.S.引言寡核苷酸合成是非常高效和高产率的过程。在固相载体上进行寡核苷酸反应的典型产率为每耦合阶98~99.5%。在典型的多阶寡核苷酸合成中,杂质聚集在一起,即使是一

半制备规模单链RNA纯化

引言寡核苷酸合成是非常高效和高产率的过程。在固相载体上进行寡核苷酸反应的典型产率为每耦合阶98~99.5%。在典型的多阶寡核苷酸合成中,杂质聚集在一起,即使是一般大小的21基体寡核苷酸的总产率也达到67~90%,较长链的寡核苷酸的产率相应较低。研究人员通常需要使用纯度高于初步合成混合物的材料。因此,

半制备规模单链RNA纯化

  寡核苷酸合成是非常高效和高产率的过程。在固相载体上进行寡核苷酸反应的典型产率为每耦合阶98~99.5%。在典型的多阶寡核苷酸合成中,杂质聚集在一起,即使是一般大小的21基体寡核苷酸的总产率也达到67~90%,较长链的寡核苷酸的产率相应较低。研究人员通常需要使用纯度高于初步合成混合物的材料。因此,

半制备规模单链RNA纯化(二)

图2中所示被选中的馏份收集窗表示不同的质量负荷。峰值采集后,样品可以根据需要对等分和干燥,以便长期储存。TEAA的挥发性使离子对缓冲组分的去除非常容易。溶剂蒸发后被纯化的寡核苷酸实际上是不含盐的。 UPLC条件纯化RNA寡核苷酸的纯度通过ACQUITY UPLC系统来验证。如图3所示,我们的纯化方法

单链和双链M13噬菌体DNA的大规模制备

实验方法原理 这个方案主要用于制备大量 M13 噬菌体的双链 DNA,因在实验室中 M13 噬菌体经常被用作克隆载体,以及在某些特殊用途时需要制备大量的单链噬菌体 DNA,如当一个特定的重组体被多次用于制备反射性标记探针或构建大量定点突变体时。实验材料 大肠杆菌 F' 菌株M13 噬菌体原液

单链和双链M13噬菌体DNA的大规模制备

            实验方法原理 这个方案主要用于制备大量 M13 噬菌体的双链 DNA,因在实验室中 M13 噬菌体经常被用作克隆载体,以及在某些特殊用途时需要制备大量的单链噬菌体 DNA,如当一个特定的重组体被多次用于制备反射性标记探针或构建大量定点突变体时

单链和双链M13噬菌体DNA的大规模制备

这个方案主要用于制备大量 M13 噬菌体的双链 DNA,因在实验室中 M13 噬菌体经常被用作克隆载体,以及在某些特殊用途时需要制备大量的单链噬菌体 DNA,如当一个特定的重组体被多次用于制备反射性标记探针或构建大量定点突变体时。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理这个方案主

单链RNA的结构特点

中文名称单链RNA英文名称single-stranded RNA;ssRNA定  义只含有一条链的RNA分子。生物体中绝大部分RNA是单链RNA,形成二级结构时,是既有单链、又有双链结构域的RNA分子;只有某些RNA病毒是由两条链互补而成的双链RNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与

小规模快速制备果蝇RNA

小规模快速制备果蝇RNA             试剂、试剂盒 Northern 样品缓冲液  lmol L 乙酸

小规模快速制备果蝇RNA

试剂、试剂盒 Northern 样品缓冲液 lmol L 乙酸 酚氯仿 DEPC 处理的水 GHCL 溶液 无水乙醇实验步骤 一 材料与设备1)Northern 样品缓冲液:2.2mol/L 甲醛,1mol/LMOPS,50% 甲酰胺2)lmol/L 乙酸3) 酚:氯仿(1:1)4)DEPC 处理的