小鼠单个核细胞分离一步梯度法去除死细胞
PriCells-小鼠单个核细胞分离一步梯度法去除死细胞 基本原理活细胞(密度较小)和死细胞(密度较大)密度不同,从而有助于将活的淋巴细胞和红细胞分离。 附加材料高密度溶液:Ficoll-Paque(Ficoll和泛影酸钠;Pharmacia LKB)或Lympholyte-M(Cedarlane)12ml或50ml聚丙烯离心管(比聚苯乙烯离心管好)注:Ficoll-Paque和Lympholyte-M的密度与温度有关;该方法中所采用的以及其他商品化的高密度溶液适合在室温中使用。因此应注意使细胞悬液、离心和高密度溶液控制在室温。否则会因活细胞沉入离心管底导致在密度界面上损失活细胞。 实验方案1、用RPMI-5完全培养基混悬细胞,分装到离心管中使其细胞数达到0.5×108~1×108个细胞/2ml(12ml离心管)或1×108~5×108个细胞/5ml(50ml离心管)。 2、用移液器吸取3......阅读全文
从单个核细胞中分离T细胞的方法
1)用玫瑰花结形成试验分离E+细胞:1.制备AET-绵羊红细胞:1)在刻度离心管中,用无菌的含5%小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次,每次离心500×g 10分钟。2)吸净上清液,测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞,加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液,混匀。室温中反应30分钟。3)用无
PNAS突破:单个细胞核转录组测序
研究人员成功地从单个脑细胞细胞核中分离出全部的信使RNA并对其进行了测序。这项发表在《美国科学院院刊》(PNAS)上的新研究,将帮助研究人员更好地了解一些器官在健康和疾病状态下的功能机制,为开发出个体化治疗提供了又一块跳板。 动物和植物中的大多数细胞都包含有一个细胞核,里面储存着细胞的DN
人单个核细胞分离液使用注意细节
人单个核细胞分离液1.077是一种用于分离人外周血单个核细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。外周血中单个核细胞(PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同,红细胞和粒细胞密度较大,1.090g/mL 左右,淋巴细胞和单核细胞密度为 1.075~1.090g/mL,血小板
外周血单个核细胞分离实验的操作步骤
1、取外周静脉血,用肝素抗凝,加等量的Hank’s液并混匀。 2、将分层液加入试管中,用量约为血量的1/2。用吸管沿管壁缓缓将血加入分层液面上。 3、置于水平离心机离心,1500r/min,10min。可见绝大多数单个核细胞悬浮于血浆和分层液的界面,呈白膜状。 4、用尖吸管吸取界面的细胞层
外周血单个核细胞(PBMC)中,是否包含有B细胞
PBMC中主要包含单核细胞和淋巴细胞,淋巴细胞中包含T和B细胞。
如何用淋巴细胞分离液分离单个核细胞?
淋巴细胞分离液可用于体外分离外周淋巴血细胞,也可以从其他来源中分离单核细胞,包括脐带血细胞和骨髓细胞,适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞,在医疗和医学生物中广泛应用。其他人及动物多种比重细胞分离液。 如何用淋巴细胞分离液分离单个核细胞? 1)分离外周血中的单个核细胞 1.抽取正常人静脉血加
外周血单个核细胞的分离如何进行呢
外周血中单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的比重介于1.075~1.090之间,红细胞及粒细胞在1.092左右,血小板在1.030~1.035之间,因而可利用一种比重介于1.075~1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心,使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。 对分离介质的基本要求
外周血和脐带血中分离单个核细胞
基 本 方 案 FicoH-Hypaque梯度离心法分离单个核细胞材 料肝 素 抗 凝 血(附 录 3 G ) 或 者 肝 素 化 的 脐 带 血(I Oml脐 带 血 加 入 I m l 含 250U 的P B S 为宜)P B S聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque) 溶液H B S
外周血单个核细胞可以用来做哪些实验
外周血单个核细胞即外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。体外检测淋巴细胞首先要分离外周血单个核细胞,目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque(葡聚糖-泛影葡胺)密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异最多12天,但需要刺激。 PBMC(外周血单个核细胞)是原代细胞,单纯
密度梯度分离法分离单个核细胞(MNCs)
试剂和材料:1. 合适的培养基或冷冻液;2. PBSA;3. Ficoll-Hypague;4. 巴氏吸管;5. 50ml离心管;实验方法:1. 将脐血样品用PBSA按1:1比例稀释;2. 将15ml Ficoll-Hypague吸入50ml离心管;3. 将30mlPBSA稀释的脐血样品缓慢地加到F
外周血单个核细胞分离的基本原理介绍
外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞,其比重为1.070左右,而红细胞和多核白细胞的比重超过1.080。这样利用介于两者比重之间的溶液(称为分层液)做密度梯度离心,就可得到单个核细胞。最常用的分层液为聚蔗糖和泛影酸钠混合比重为1.070±0.001的溶液,国内常用泛影葡胺代替泛影酸钠。
外周血单个核细胞(PBMC)制备方法及注意事项
外周血单个核细胞(PBMC)制备方法及注意事项外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞(Lymphocyte)、单核细胞(Monocyte)、树突状细胞(DC)和其他少量细胞。PBMC可利用健康人或动
人骨髓单个核细胞(BM-MNCs)的制备梯度密度离心
* 仅使用新鲜骨髓。避免冷冻和解冻骨髓细胞,并在无菌条件下进行。1
外周血单个核细胞结核分枝杆菌DNA的检测价值
【摘要】 目的 探讨单个核细胞结核分枝杆菌DNA检测在肺结核诊断中的价值。方法 380例外周血用淋巴细胞分离出单个核细胞,用1%TritonX-100加蛋白酶K提抽模板DNA作PCR扩增,产物227bp。结果 外周血单个核细胞结核分枝杆菌DNA检出率为90.3%(343/380)明显高于
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等.取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑 (1) 细胞纯度; (2) 细胞获得量; (3) 细胞活力; (4) 使用方法的简易程度和本室条件等.测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑(1)细胞纯度;(2)细胞获得量;(3)细胞活力;(4)使用方法的简易程度和本室条件等。目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。
外周血单个核细胞分离实验的器材和注意事项
一、试剂与器材 1、聚蔗糖—泛影葡胺分层液,Hank’s液,RPMI-1640培养液,肝素。 2、水平离心机。 二、注意事项 1、在分离外周血单个核细胞过程中,将稀释血液加于分层液上时,要避免冲散分层液面,而要使之形成良好的界面,否则影响分离结果。 2、此法操作得当,单个核细胞得率可达
从单个核细胞中分离T细胞(玫瑰花结形成试验、尼龙毛、...
从单个核细胞中分离T细胞一、用玫瑰花结形成试验分离E+细胞1.制备AET-绵羊红细胞1)在刻度离心管中,用无菌的含5%小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次,每次离心500×g 10分钟。2)吸净上清液,测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞,加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液,混匀。室温中反
脾脏、胸腺和淋巴结中单个核细胞分离和培养
基本方案从小鼠脾脏、胸腺和淋巴结制备单个核细胞分离和培养。实验材料RPMI-5或DMEM-5完全培养基。2.新鲜分离的小鼠器官:≤6周龄的小鼠胸腺;6周至6个月龄的小鼠脾脏和淋巴结。3.60mm×15mm培养皿。4.剪刀和镊子(保存在70%乙醇的烧杯中)。5.装有19G针头的6ml注射器。6.200
利用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
实验概要本实验用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化了外周血单个核细胞。实验原理常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,犌W水性高,平均分子量
小鼠抗核抗体,小鼠抗核抗体试剂盒使用说明
小鼠抗核抗体,小鼠抗核抗体试剂盒使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中抗核抗体(ANA)含量。实验原理:本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠抗核抗体(ANA)水平。用纯化的小鼠抗核抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入抗核抗体(ANA),再与HRP标记的抗核抗原
小鼠增殖细胞核抗原(PCNA)ELISA试剂盒
小鼠增殖细胞核抗原(PCNA)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗小鼠 PCNA 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 PCNA与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠PCNA,形成免疫复合物连接在板上,
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的测定
实验原理:染色单体或染色体的无着丝点断片,或因纺锤体受损而丢失的整个染色体,在细胞分裂后期,仍然在细胞质中。末期之后,单独形成一个或几个规则的次核,被包含在子细胞的胞质内,因比主核小,故称为微核。大小应为主核的1/20~1/5。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。微核率是和用药的剂量或辐射累积
单个细胞的PCR分析
单个二倍体细胞在分析单精子以前,Li等人对个体二倍体细胞内的β珠蛋白基因进行过研究。两 个组织培养细胞株用于这些实验。其中一个纯合是镰刀型细胞密码子6(βS)发生突 变,另一个纯合子则来源于正常的βB等位基因。扩增含有密码子6的β珠蛋白片段的 引物,及能够区别这两个特异的等位基因的寡核苷酸探针(A
单个细胞的PCR分析
单个二倍体细胞在分析单精子以前,Li等人对个体二倍体细胞内的β珠蛋白基因进行过研究。两 个组织培养细胞株用于这些实验。其中一个纯合是镰刀型细胞密码子6(βS)发生突 变,另一个纯合子则来源于正常的βB等位基因。扩增含有密码子6的β珠蛋白片段的 引物,及能够区别这两个特异的等位基因的寡核苷酸探针(AS
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的测定方法
实验原理:染色单体或染色体的无着丝点断片,或因纺锤体受损而丢失的整个染色体,在细胞分裂后期,仍然在细胞质中。末期之后,单独形成一个或几个规则的次核,被包含在子细胞的胞质内,因比主核小,故称为微核。大小应为主核的1/20~1/5。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。微核率是和用药的剂量或辐射累积
外周血和脐带血中分离单个核细胞—FicollHypaque梯度离心法
外周血单个核细胞可应用于: (1)免疫学(包括自身免疫性疾病),传染病,血液系统恶性肿瘤,疫苗开发,移植免疫学研究; (2)预测药物和异生素免疫抑制作用; (3)高通量筛选本实验来自「精编免疫学实验指南」作者:J.E.科利根等,译者:曹雪涛等,实验方法原理FicoH-Hypaque(又称淋巴细胞分层
解析单个癌细胞检测技术
在很多医疗不发达的地区,医生有限,资源奇缺,购买昂贵的诊断设备更是难以实现。而这些地方的癌症患者又常常因为无法及时获得早期诊断,错失最佳的治疗时间,而失去宝贵的生命。近年来自美国哈佛大学和麻省理工大学的研究人员共同开发了一种袖珍微流体设备,可在血液样本中检测出单个癌细胞,帮助医生快速诊断癌症是否已从
单个癌细胞的形态特点
主要表现在细胞核上,可归纳为五大特征:⑴核大:癌细胞核可比正常大1-5倍。但核膜不内折。⑵核大小不等:由于各个癌细胞核增大程度不一致,同一视野的癌细胞核,大小相差悬殊。⑶核畸形核膜增厚:癌细胞核可出现明显的畸形,表现为细胞核形态不规则,呈结节状、分叶状等,核膜出现凹陷、皱褶,使核膜呈锯齿状。⑷核深染
正常单个hela细胞的大小
直径约为10μm,重约0.001μg人体细胞一般是以微米(毫米的千分之一)为单位的,从数微米到几十微米不等。在医学上,显微镜下比较肿瘤细胞的大小是和正常细胞相比而言的,较小的肿瘤细胞如小细胞肺癌,较大的肿瘤细胞如巨细胞瘤。