双重染色抗体的选择
用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一,二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。......阅读全文
双重染色抗体的选择
用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一,二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。
吖啶橙和溴化乙啶双重染色
染料同时染色细胞,为鉴别凋亡细胞和坏死细胞提供较好的方法。染料: 吖啶橙(AO)膜通透性较高的染料 溴化乙啶(EB)正常细胞: AO- 绿色荧光强,EB- 染色红色荧光较弱;凋亡细胞: AO- 绿色荧光强度弱减,EB- 染色红色荧光加强;坏死细胞: AO- 绿色荧光强度弱或消失,EB- 染色红色荧光
免疫组化试验抗体选择及常用染色方法
一、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组织化学染色技术不仅有较高的敏感性
双酶双底物的双重免疫染色—多种组织抗原配对的双重酶
改良的 EnVision-HRP/AP 双酶双底物的双重免疫染色(间接法)——Ki-67-CK20 等多种组织抗原配对的双重酶实验步骤1. 恒冷切片或石蜡切片,厚 4~6 μm,常规处理。2. 0.1%NaN3+0.3%H2O2/TBS(50 mmol/L,pH 7.8)或 0.3%H2O2/甲醇,
双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤
1.一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。2.二步双染色法先用TRITC标记的A抗体进行免疫荧光染色,再用FITC标记的B抗体染色,根据两种抗体的动物种属不同,可用直接法也可用间接法,结果A抗原呈现橘红色荧光,而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中,常用的方法是免疫
双酶双底物的双重免疫染色—淋巴瘤轻链κ、λ的双重酶标记
实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水(若用含汞固定液固定的组织,则需用内含 0.5% 碘的乙醇溶液脱汞 5 min,乙醇浓度为 70%,经自来水洗后以 2.5% 硫代硫酸钠浸洗 1 min,水洗)。2. 0.3%H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min,自来水洗,蒸馏水洗,入 PBS(0.01mol/L
关于抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲,做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很简单,买进口抗体捉襟见肘,买国产抗体得需要大无畏的勇气。在我们实验室western blot实验历程里,我们用过进口抗体,进口抗体国内分装包装,国产抗体,质量良莠不齐。 进口抗体一般不会出现闪失:Abca
抗体选择指南
抗体亲和层析原理是蛋白 A和蛋白 G对不同来源的IgG的Fc-区具有高度亲和性和特异性。这些蛋白被固定在我们的许多填料上,产生了从腹水、细胞培养上清液和血清中分离IgG和IgG亚类的极好方法。关于抗体亲和纯化的全部产品系列,见下页抗体亲和填料和层析柱选购指南。 蛋白A (Protein
流式抗体选择
很多朋友面对各种各样颜色的流式抗体,在选择及搭配上就犯了难,在此我们需要了解下流式细胞仪的各个激发光及各个接收通道是如何工作的、常见的荧光素有哪些、这些荧光的特性是什么样的。了解了这些,选择抗体和搭配不同的颜色就变得非常简单了。我们再回过头来看看流式细胞仪的原理,熟悉一下流式细胞仪的光路系统。从这张
抗体的选择和保存
当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候,如何选择适合我们实验需要的抗体,并恰当保存使用,是每个科研人员需要细心考虑的。抗体种类繁多,品牌众 多,技术参数不一,价格和质量更是相差甚大,如何购买到高质量价格合适的抗体,并准确地做出我们想要的结果,其中有很多细节需要注意。一、怎样选择适合你实验需要的抗
选择自动双重纯水蒸馏器的重要性
仪器在可靠性、使用寿命和操作性能多方面作了改进提高。全新箱式结构,打开箱盖不必动玻璃。高硼硅玻璃制成。石英管全浸入式加热。双重蒸馏、水位电子自动控制。机箱内外喷塑,耐腐蚀。特别介绍:仪器备有进水节流阀,特别适合用桶装水饮用水做水源。优点如下:1、减少水垢、减少清洗次数、延长寿命一倍以上。2、出水水质
选择自动双重纯水蒸馏器的重要性
仪器在可靠性、使用寿命和操作性能多方面作了改进提高。全新箱式结构,打开箱盖不必动玻璃。高硼硅玻璃制成。石英管全浸入式加热。双重蒸馏、水位电子自动控制。机箱内外喷塑,耐腐蚀。特别介绍:仪器备有进水节流阀,特别适合用桶装水饮用水做水源。优点如下:1、减少水垢、减少清洗次数、延长寿命一倍以上。2、出水水质
流式细胞仪多色染色与同型对照抗体选择与搭配
一、如何搭配流式抗体荧光标记流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的:流式细胞仪能检测多少个通道需要同时检测检测多少个指标厂家的抗体有多少种荧光标记如果流式细胞仪的通道越多,那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多A 、 如何根据流式细胞仪搭配流式抗体1) BD流式细胞仪(06版目录第614页)
怎么选择流式抗体?
我们开始流式实验时,首先要选择抗体,必然要涉及到荧光的选择,尽量使这些荧光的补偿值降到zui低。 1,我们需要了解我们用的流式细胞仪的硬件设施(激光,滤光片) 2,选择合适的荧光染料,尽量利用到你的仪器上的所有激光,这样可以使这些荧光交叉可能性达到zui小。一般四种颜色或以下的比较好选,常用:FI
怎么选择流式抗体
我们开始流式实验时,首先要选择抗体,必然要涉及到荧光的选择,尽量使这些荧光的补偿值降到zui低。 1,我们需要了解我们用的流式细胞仪的硬件设施(激光,滤光片) 2,选择合适的荧光染料,尽量利用到你的仪器上的所有激光,这样可以使这些荧光交叉可能性达到zui小。一般四种颜色或以下的比较好选,常用:FI
怎么选择流式抗体?
我们开始流式实验时,首先要选择抗体,必然要涉及到荧光的选择,尽量使这些荧光的补偿值降到zui低。 1,我们需要了解我们用的流式细胞仪的硬件设施(激光,滤光片) 2,选择合适的荧光染料,尽量利用到你的仪器上的所有激光,这样可以使这些荧光交叉可能性达到zui小。一般四种颜色或以下的比较好选,常用:FI
流式抗体(荧光抗体)细胞染色步骤与注意
染色缓冲液(BSA)的配制:PBS含有1% FBS和0.09% NaN3,置于冰上或4度冰箱备用。准备单细胞悬液:淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。用冰染色缓冲液洗细胞2次,离心细胞,用冰染色缓冲液重悬细胞,使终浓度为2×107细胞/ml。各取50ul(106细胞)细胞悬液到2个圆底的Ep管中。根据
双重荧光定量PCR探针荧光基团该怎么选择
有干扰的话,在仪器上面就可以看出来,比如说,FAM和VIC,FAM有信号,单独看VIC也肯定有信号,只是低点而已
Ig分子具有结合抗原和刺激抗体生成的双重功能
Ig分子具有结合抗原和刺激抗体生成的双重功能。首先,它能与抗原结合,产生多种生物效应,包括: ①与病原微生物或它分泌的毒素结合,产生抗感染免疫; ②活化体液的一类正常组分,即补体分子,起到杀伤病原体或靶细胞的作用; ③加强吞噬细胞等免疫细胞的吞噬或杀伤效应; ④与组织中的肥大细胞或嗜碱性
如何选择合适的GST抗体?
GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便,以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到,也可以直接被位点特异性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的优点,商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛
如何选择合适的GST抗体?
GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便,以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到,也可以直接被位点特异性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的优点,商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛
如何选择合适的GST抗体?
GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便,以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到,也可以直接被位点特异性蛋白酶裂解去除。正是由于以上的优点,商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛应用
Western-Blot中抗体的选择
Western Blot又称为蛋白质印迹,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。基本原理:聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离,分离后的蛋白被转移到固相支撑物(杂交膜)上,抗体特异性识别目标蛋白,通过酶促反应或者化学发光等
荧光抗体染色与结果判断
荧光抗体与抗原反应,一般在25~37℃,30分钟,不耐热抗原的检测则以4℃过夜为宜。(一)直接法:用特异荧光抗体直接滴加于标本上。本法操作简便,特异性高,非特异荧光染色因素少;缺点是敏感度偏低,需制备特异性的荧光抗体。(二)间接法:可用于检测抗原和抗体,普通一抗+荧光二抗。灵敏度高,仅需一种荧光抗体
免疫组化抗体选择要点及流式抗体选择常识
一抗的选择要点1.选择单克隆还是多克隆抗体?由一种B细胞产生的单一特异性抗体叫做单克隆抗体,单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合,就像导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种B细胞产生抗体,形成抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆
HA抗体推荐—选择合适HA标签抗体的因素
HA标签系统利用一个HA (流感病毒血凝素,influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端,该系统已广泛应用于多种细胞类型,相应的HA标签抗体也被广泛应用。HA 标签抗体能特异识别C末端或N末端带有HA标签
GAPDH抗体推荐—Abbkine高性价比GAPDH内参抗体的选择
在Western Bloting实验中,可能存在总蛋白浓度测定不准确,或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差;这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参,比如内参GAPDH的含量来进行校正。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组
如何选择合适的His标签抗体?
His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化。由于分子量较小,并且较容易分离和纯化,His-tag 融合标签与其他标签相比有很多明显优势, 是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。His抗体可以用于检测和His标
如何选择合适的Myc标签抗体?
随着蛋白质组学的迅猛发展,重组蛋白质的使用在近年来大大增加。重组杂合体含有一个亲和标签如GST、Myc、His等,可用于辅助目标蛋白的纯化,这已经被广泛使用。利用融合蛋白有助于重组蛋白纯化和检测的这个有点被广泛认可。Myc标签相当于人的c-Myc 410-419位肽段(序列为:EQKLISEED
如何选择合适的CBP标签抗体?
CBP标记的蛋白在低浓度钙缓冲液中能够异性的被钙调蛋白树脂捕捉吸附,并且在中性环境中能够被2 mM EGTA洗脱,这与6组氨酸亲合标签纯化体系相比反应条件要温和许多。仅有4-kDa 大小的CBP tag 与26-kDa GST 标签相比对蛋白分子的影响非常小。在所表达的蛋白分子上包含一个凝血