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实验方法原理 CsCl 等密度梯度离心用于制备最高纯度的感染性 λ 噬菌体颗粒，它没有任何细菌核酸的污染。从这种噬菌体颗粒中提取的 DNA 可用作 DNA 测序的模板、亚克隆至质粒载体和产生用于原位杂交的探针。这种方法第二个优点是，由它所获得的噬菌体原种是高度浓缩的（大于 1011 cfu/ml)，在 4℃ 保存时，许多年后仍能保持它们的感染力。实验材料 λ 噬菌体悬浮液试剂、试剂盒 CsCl乙醇仪器、耗材 Beckman SW41 或 SW28 转子或相当型号Beckman Ti50 或 SW50.1 转子或相当型号皮下注射用针头实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液(1) CsCl（固体）(2) CsCl 溶液(3) 乙醇2. 离心机和转子(1) Beckman SW41 或 SW28 转子或相当型号(2) Beckman Ti50 或 SW50.1 转子或相当型号，配有清亮的离心管（如 Beckman 超亮离心管......阅读全文
*章离心机及转子的分类：一．离心机的分类：国际上对离心机的分类方法有三种：按用途分、按转速分和按结构分。按用途分类：分为制备型离心机和制备分析离心机。制备型离心机：仅供分离浓缩，提纯试样的离心机。制备分析离心机：不但能分离浓缩、提纯试样，而且可以通过光学系统对试样的沉降过程进行观察、拍照、测量、数字
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
CsCl 等密度梯度离心用于制备最高纯度的感染性 λ 噬菌体颗粒，它没有任何细菌核酸的污染。从这种噬菌体颗粒中提取的 DNA 可用作 DNA 测序的模板、亚克隆至质粒载体和产生用于原位杂交的探针。这种方法第二个优点是，由它所获得的噬菌体原种是高度浓缩的（大于 1011 cfu/ml)，在
重组DNA技术可以用于：（1）据需要选择目的基因（DNA片段）在体外与基因运载体重组，转移至另一细胞或生物体内，以达到改良和创造新的物种和治疗人类疾病的目的；（2）是现代分子生物技术发展中最重要的成就之一，即是基因工程(Gene Engineering)的核心技术。实验方法原理Adeasy系统利用了
PCR体外扩增法 实验方法原理 Adeasy系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并
实验方法原理 CsCl 等密度梯度离心用于制备最高纯度的感染性 λ 噬菌体颗粒，它没有任何细菌核酸的污染。从这种噬菌体颗粒中提取的 DNA 可用作 DNA 测序的模板、亚克隆至质
生物工程是一门新型的跨学科技术，它涉及范围十分广泛，科学家通常把基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，看成是构成生物工程的4大生物技术。 基因工程主要指基因重组技术。它是根据生物遗传规律，使用类似工程设计的方法，在体外利用限制性内切酶把来自不同生物的遗传基因进行“拼接”，使之重新组合。然后
实验材料 λ噬菌体臂 大肠杆菌菌株 用于λ噬菌体的包装抽提物 试剂、试剂
蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为可溶性抗原，它们有相当部分来源于组织和细胞，成分复杂。制备这类免疫原时，首先须将组织和细胞破碎，然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗原，提纯的抗原需鉴定后才能用做免疫原。 一、组织匀浆的制备用于制备免疫原的材料必须是
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
CDNA文库筛选（一）λgt11 cDNA文库铺平板宿主细菌制备1．用一个E.coli宿主菌株单菌落分别接种2×5ml LB培养基（Y1088用于噬菌斑杂交，Y1090用于免疫筛选），于37℃振荡培养过夜。2．将过夜培养物以3000×g离心5min。3．分别用2ml λ-dil（10 mm
（2）各种转头用于等密度离心的优缺点分析： A、固定角式转头：主要用于差分离心的角式转头，在超速离心机上可以很好地用于等密度离心，尤其是 DNA平衡等密度离心，自形成梯度，用快速密封管或厚壁管，常用的单管的容量为 10~40ml。常用转速 40,000~80,000rpm，离心时间较短，分离
实验概要本实验介绍了氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法(即连续梯度法)纯化闭环DNA的原理及操作步骤等。实验原理用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于线性 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。许多年来，纯化大量质粒 DNA 的首选方法是
提取植物DNA时遇到多糖成分的干扰， DNA质量一直不高，如何消除多糖的影响？参考见解：一般来说，SDS法提取的DNA会还有较多的多糖，使DNA成胶冻状。而CTAB法提取可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比较高，可用以下方法试一试：1、 在 DNA 未溶出之前，先用一些缓冲液洗去多糖。如可用
提取植物DNA时遇到多糖成分的干扰， DNA质量一直不高，如何消除多糖的影响？ 参考见解：一般来说，SDS法提取的DNA会还有较多的多糖，使DNA成胶冻状。而CTAB法提取可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比较高，可用以下方法试一试： 1、 在 DNA 未溶出之前，先用一
实验概要通过本实验掌握传代细胞培养的基本方法，了解无菌操作的基本原则。掌握磷酸钙介导的贴壁细胞的通用转染方法。了解细胞凋亡的形态特征，掌握细胞凋亡DNA梯度（“DNA Ladder”）电泳检测法。实验原理细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期
细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。
方法cDNA 末端的削平1.cDNA样品（来自步骤 11)于 68°C 加热5 min。这一步骤是使cDNA分子的单链突出端可能形成的双链结构发生变性。2. 将cDNA溶液冷却至37°C并加入下列试剂：5xT4噬菌体DNA聚合酶修复缓冲液 &n
细胞分离就是通过物理、生物、化学的方法，将生物组织分离为单细胞分散系的过程。干细胞分离的方法有很多，离心分离是常用方法之一。 离心技术是利用物体高速旋转时产生强大的离心力，使置于旋 ...细胞分离就是通过物理、生物、化学的方法，将生物组织分离为单细胞分散系的过程。干细胞分离的方法有很多，离心分离是常
实验方法原理本实验首先是制备植物新鲜组织匀浆、过滤,分离出完整的叶绿体,然后通过蔗糖密度梯度离心,把叶绿体与其他亚细胞结构分离开来。完整叶绿体经蛋白酶K酶解后,再通过酚-氯仿抽提获得高纯度的叶绿体DNA。实验材料植物新鲜幼嫩叶片试剂、试剂盒缓冲液A(提取缓冲液)缓冲液B(裂解缓冲液)TE缓冲液蔗糖溶
实验方法原理 本实验首先是制备植物新鲜组织匀浆、过滤,分离出完整的叶绿体,然后通过蔗糖密度梯度离心,把叶绿体与其他亚细胞结构分离开来。完整叶绿体经蛋白酶K酶解后,再通过酚-氯仿抽提获得高纯度的叶绿体DNA。实验材料 植物新鲜幼嫩叶片试剂、试剂盒 缓冲液A(提取缓冲液)缓冲液B(裂解缓冲液)TE缓冲液
可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操作方法更快。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效，但在某种意义上它比以前的操
目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱
密度梯度区带离心法又可分为两种：(1)差速区带离心法：当不同的颗粒间存在沉降速度差时(不需要像差速沉降离心法所要求的那样大的沉降系数差)。在一定的离心力作用下，颗粒各自以一定的速度沉降，在密度梯度介质的不同区域上形成区带的方法称为差速区带离心法。此法仅用于分离有一定沉降系数差的颗粒(20%的沉降系数
1腺病毒的包装，纯化和感染技术背景：Adeasy 系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的病毒载体。利用带有E1 基因的293 细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl 梯度离心，透析进行分离纯化。对绝大多
DNA序列测定技术序列测定的技术和策略Sanger双脱氧链终止法Maxam－Gilbert DNA化学降解法测序策略 目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的
实验室离心机分离方法不一，适用场合也不尽相同。 1. 差速离心法：许多具有生物活性的生物大分子和亚细胞器是不稳定的，需要低温高速离心，zui常用的是差速离心法。通过离心后倒出上清液和沉淀分开，把分离出来的上清液再增大转速离心，分离出第二部分沉淀，这样不断增大转速，逐级分离出所需要的物质。利用这种方
用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于与线状 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。连续梯度法实验方法原理用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于与线状 DN
欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭，常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭，常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsC
通过一种有效的蛋白酶（如蛋白酶 K ) 的消化作用及随后的酚：氯仿抽提，就能从大规模制备的 λ 噬菌体中很好地分离到 DNA。该方法也适用于小量（50~100 ml ) 制备物。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理通过一种有效的蛋白酶（如蛋白酶 K ) 的消化作用及随后的酚：