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黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)

实验方法原理 应用此种扩增方法,文库不容易失真,这是由于在任何一步骤中,含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长,而且有时由于主滤膜保 存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法,即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。实验材料 λ 噬菌体包装反应大肠杆菌接种菌株仪器、耗材 卡那霉素 TB 琼脂平板TB 培养基无去污剂、无菌的硝酸纤维素膜或尼龙滤膜实验步骤 一、材料1. 培养基含 25 μg/ml 卡那霉素 TB 琼脂平板(150 mm)TB 培养基2. 专用设备无去污剂、无菌的硝酸纤维素膜或尼龙滤膜(137 mm)。3. 载体和菌株λ 噬菌体包装反应适宜的大肠杆菌接种菌株(如 XLl-Blue、ED8767、NM554、DH5αMCR)二、方法预培养1. 计算能产生 3 万~ 5 万个转化的菌落的包装反应体积。2. 取若干无菌试管,向每管中加入 0.2 ml 接种......阅读全文

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中的多联体。构建在 λ 噬菌体中的文库以具有感染性的重组噬菌体形式贮存和增殖。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

            实验方法原理 在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

实验方法原理 在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中的多联体。构建在 λ 噬菌体中的文库以具有感染性的重组噬菌体形式贮存和增殖。实验材料 T4 噬菌体 DNA 连接酶牛小肠碱