用TaqDNA聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水ddNTPdNTP甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶Taq 酶稀释缓冲液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 标记的寡核苷酸引物仪器、耗材 微量离心管（0.5 ml) 或微量滴定板装有多孔加热板的程控热循环仪可加热到 65°C 的水浴实验步骤 材料缓冲液和溶液试剂、缓冲液、储液的组成参见附录 1, 储液使用前稀释到适当浓度。去离子蒸馏水（冰预冷）ddNTP,4 种 ddNTP 储液（5 mmoI/L)dNTP,4 种 dNTP 储液（lmmol/L)甲酰胺加样缓冲液10x 标记混合液和 ddNTP 延伸/终止混合液当测序模板富含二級结构时，用等摩尔 7-脱氨-2'-dGTP 代替 10X 标记混合液和 ddNTP 延伸/终止混合液中的 dGTP。酶和缓冲液5x 反应缓冲液200 mmol/LT......阅读全文
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 ddNTP dNTP 甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶 Taq 酶稀释缓冲液
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水ddNTPdNTP甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶Taq 酶稀释缓冲液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 标记的寡核苷酸引物仪器、耗材 微量离心管（0.5 ml) 或
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
热稳定 DNA 聚合酶除了在 PCR 反应中应用外，还可用来替代测序酶或 Klenow 片段进行双脱氧链终止法测序。它在高温下（70°C) 进行等温链终止反应的能力可减少测序反应中由于模板 DNA 上引物假结合位点与引物退火错配产生的问题，它还可用于富含二级结构模板的测序。本实验源于分子克隆实验指南
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水二硫苏糖醇dNTP 和 ddNTP标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液甲酰胺上样缓冲液测序酶稀释缓冲液测序酶反应缓冲液含MgCl2测序酶酵母无机焦磷酸酶寡核苷酸引物模板 DNA放射性化合物仪器、耗材 离心机和转头微量离心管或微量滴定板实验步骤 材料缓充液和溶液去离子蒸
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
本方案参照了 Tabor 和 Richardson(1987a,1989b,1990) 的方法，采用单链 DNA 模板进行 DNA 测序（有关单链 M13 噬菌体和质粒 DNA 制备，请参见第 3 章的方案 4、8 和第 12 章的方案 1)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕
用－T7－噬菌体－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 二硫苏糖醇 dNTP 和 ddNTP 标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液 甲酰胺上样缓冲液 测序酶稀释缓冲
双脱氧法DNA测序实验——测序酶进行标记测序反应
在基本的双晩氧测序反应中，寡核苷酸引物退火于单链DNA摸板，在4种脱氧核糖核酸三磷酸存在时，引物为DNA聚合酶所延伸。反应混合物中也含有4种双脱氧核糖核苷三磷酸的其中一种，当它掺入到DNA的生长链时，可终止链的延伸。实验材料DNA试剂、试剂盒寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器
用大肠杆菌－DNA－聚合酶－I－Klenow－片段进行双脱氧测序实验
当 Sanger 及其同事建立第一个 DNA 链终止延伸法时，只有一种合适的 DNA 聚合酶可用，即大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段。它具有在模板存在时聚合 dNTP 的活性，但缺乏完整聚合酶 I 的 5'-3'外切酶活性。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，
双脱氧法DNA测序实验——α标记核苷酸进行热循环测序反应
实验材料DNA试剂、试剂盒DNA测序缓冲液dATPDNA聚合酶仪器、耗材热心换反应装置离心机实验步骤1. 对应于毎个待测模板，分别以A、G、C、T 标记好4个微量离心管。2. 分别往标好A、G、C、T 的管子中，加A、G、C、T 测序混合液各3 μl。 3. 对于单链模板：在0.5 ml 微量
双脱氧法DNA测序实验
测序酶进行标记测序反应 α-标记核苷酸进行热循环测序反应 实验材料 DNA
双脱氧法DNA测序实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器、耗材 离心机离心管微量滴定板实验步骤 1. 对于每个单链模板：将下列试剂混合于0.5 ml 微量离心管中（1）0.5 pmol 单链DNA模板（2）0.5 pmol 引物（3）1 μl 10×测序酶缓冲液（4
化学发光双脱氧DNA测序实验
利用生物素标记引物 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
化学发光双脱氧DNA测序实验
标准的双脱氧DNA测序可以很容易和很有效地使用非同位索标记的化学发光法进行检测。在测序反应中，使用生物素标记的引物。用非同位素标记如生物素衍生化的引物，可用于为5’-末端标记引物而设的入测序反应的工作方案。实验材料DNA试剂、试剂盒生物素Tris·ClMgCl2DNA聚合酶dATPdCTPdGTPd
化学发光双脱氧DNA测序实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 生物素Tris·ClMgCl2DNA聚合酶dATPdCTPdGTPdTTP仪器、耗材 热循环仪尼龙膜滤纸离心机实验步骤 1. 在微量离心管中混匀下列试剂，配制DNA摸板混合物（1）1 μg 单链DNA模板或1~3 μg 变性双链DNA模板（2）0.5 pmol 生物素
制备DNA测序模板实验——双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性
实验材料DNA试剂、试剂盒NaOHEDTA乙酸钠乙醇仪器、耗材离心管离心机摇床实验步骤1. 加入约0.5 pmol 重组质粒DNA于0.5 ml 微量离心管中，如果体积大于20 μl 应以乙醇沉淀，重溶于20 μl 水。2. 如果体积小于20 μl，用水补足20 μl。3. 加入2 μl 2
循环测序：利用－PCR－和引物末端标记进行双脱氧测序实验
本方法成功的关键是模板 DNA 的纯度。琼脂糖、盐和蛋白质的污染都会导致 DNA 聚合酶的提前终止或暂停，而 DNA 和 RNA 降解所产生的寡核苷酸将造成引物错配。这些污染会严重导致假阳性条带或空白出现。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试
循环测序：利用－PCR－和引物末端标记进行双脱氧测序实验
试剂、试剂盒 ddNTP 延伸 终止混合物酶及其缓冲液AmpliTaq CS 或其他无外切酶活性的 DNA 聚合酶循环测序缓冲液热稳定的 DNA 聚合酶核酸和寡核苷酸模板 DNA仪器、耗材 小离心管 或者微孔板热循环仪实验步骤 材料溶液和缓冲液贮存液、缓冲液和试剂的配方请参照附录 1。将贮存液稀释到
DNA测序——双脱氧链末端终止法
实验方法原理DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3'-OH末端上进行的。由于2’，3’-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3'-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3'-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。 本实验根据此原理，将待测DNA片段插入单链噬菌体M13载体，
PCR技术（三）：Taq－DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的.(一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa.其比
双脱氧链终止法测序用变性模板的制备实验
双脱氧链终止法变性模板 分子克隆实验指南（第三版）下册 第12章 方案2下面通过碱变性质粒 DNA 的方法应与方案 3 联合使用，因在此过程中采用测序酶催化双脱氧测序反应。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒乙酸铵氯仿异戊醇DMSO
双脱氧链终止法测序用变性模板的制备实验
试剂、试剂盒 乙酸铵氯仿异戊醇DMSO乙醇NaOH酚测序反应缓冲液琼脂糖凝胶寡核苷酸引物闭环双链质粒 DNA仪器、耗材 干冰-乙醇浴65°C 水浴实验步骤 材料缓冲液和溶液试剂、缓冲液、储液的组成参见附录 1, 储液使用前稀释到适当浓度。乙酸铵（5mol/L, 非缓冲，pH~7.4)氯仿：异戊醇（2
双脱氧链终止法测序用变性模板的制备实验
试剂、试剂盒 乙酸铵 氯仿 异戊醇 DMSO 乙醇 NaOH酚 测序反应缓冲液 琼脂糖凝胶
Taq－DNA－聚合酶的基本信息
中文名称Taq DNA 聚合酶英文名称Taq DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。这个酶只有
Taq－DNA－聚合酶的基本信息
中文名称Taq DNA 聚合酶英文名称Taq DNA polymerase定 义编号：EC 2.7.7.7。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。这个酶只有
大肠杆菌－DNA－－I－Klenow－片段及单链－DNA－模板进行双脱氧实验
试剂、试剂盒 dATP 去离子蒸馏水 EDTA 延伸 终止混合液 和示踪混合液 甲酰胺上样缓冲液 Tris-Cl
用循环测序法检测突变实验
实验材料血液或者其他来自待测个体的 DNA 材料试剂、试剂盒乙酸钠异丙醇TE 缓冲液分子质量标记物寡聚核苷酸测序引物多聚核苷酸激酶反应缓冲液多聚核苷酸激酶双脱氧核苷酸Taq DNA 聚合酶10 X 循环测序反应缓冲液矿物油终止液仪器、耗材热循环仪和管子实验步骤展开
关于PCR，你知道多少？（四）Taq－DNA聚合酶
在PCR反应中，毫无疑问的DNA聚合酶是最关键的因素。PCR最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶 I的Klenow片段。但该酶存在很多缺陷，使之不能广为应用，比如：热稳定性差，每次DNA热变性后大部分酶都被灭活，需要重新加入，每个循环都要重新加入；Klenow酶反应温度较低，引物和模板容易形
DNA测序技术的介绍
DNA测序技术，又叫基因测序技术。 人类基因组这部由A、T、G、C四个字母组成的卷帙浩繁的生命天书如同一座宝库，保藏着几千年来人们迫切想知道的秘密，DNA测序技术就好似“芝麻开门”这样的咒语，是我们打开宝库的金钥匙。世界上第一个测定DNA序列的方法是由英国生化学家弗雷德里克·桑格尔发明的。自此
DNA序列测定技术（Sanger双脱氧链终止法与Maxam－Gilbert...3
３．DNA 聚合酶通常用于双脱氧法序列测定的有几种不同的酶，其中包括大肠杆菌DNA 聚合酶I的Klenow片段（Sanger等，1977），反转录酶（见文献，如Mieredorf和Prfeffer，1987）经过修饰消除了 3'→5'外节酶活性的T7噬菌体DNA 聚合酶（
上样并进行－DNA－测序实验
DNA 序列可通过酶解或化学降解产生一系列成套的 DNA 片段，这些片段可以通过薄层变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分辨。一个典型的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳能够分辨出编码 15~400 个核苷酸长度的 DNA 序 列。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔