DNA电泳(agarose胶)

实验材料 DNA样品试剂、试剂盒 琼脂糖 电泳缓冲液溴化乙锭 上样缓冲液仪器、耗材 电泳仪电泳漕 透射紫外灯 胶带纸 紫外成像仪......阅读全文

琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品的基本步骤

  1. 制备琼脂糖凝胶,尽可能薄。DNA样品与上样缓冲液混匀,上样。推荐使用的靶基因的上样量见不同条件下上样本的使用指针比较表。一般而言,对地高辛杂交系统,所需DNA样品的浓度较低,每道加2.5-5μg人类基因组DNA;如果基因组比人类DNA更复杂(如植物DNA)则上样量可达10μg;每道上质粒D

DNA酶切及凝胶电泳之三:操作步骤及注意事项

一、DNA酶切反应1、将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶液集中在管

琼脂糖凝胶电泳跑完,DNA条带颜色浅怎么回事

琼脂糖凝胶电泳跑完,DNA条带颜色浅怎么回事原因有以下:1、 可以考虑是不是样品不纯,目的产物与杂带相差不大,所以要多跑一段时间才有尾巴。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。2 、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液,加2微升溴酚蓝便可,注意上样浓度;3、可能是原液浓

琼脂糖凝胶电泳DNA回收实验方法和注意事项

实验前准备及重要注意事项1.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。2.使用前请检查Buffer PG,如果出现结晶或者沉淀,可在37℃水浴中放置3-5分钟,即可恢复澄清。3.电泳时最好使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果;如下一步实验要求较高,请尽量使用TAE电

琼脂糖凝胶电泳法检测-DNA-及-RNA-的纯度及浓度

  1、DNA 的琼脂糖凝胶电泳检测  (1)配制琼脂糖凝胶  ①称取适量琼脂糖,放入100mL锥形瓶中按胶浓度加入1倍 TAE 或 TBE 缓冲液,于微波炉或水浴中溶解。  ②熔化的琼脂糖冷却至60℃,加入终浓度为0.5μg/mL 的 EB,混匀。  ③将凝胶床水平放置,插入两端的挡板,用滴管吸取

DNA琼脂糖凝胶电泳条带纵列怎么有那么多

原因有以下:1、 可以考虑是不是样品不纯,目的产物与杂带相差不大,所以要多跑一段时间才有尾巴。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。2 、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液,加2微升溴酚蓝便可,注意上样浓度;3、可能是原液浓度太大造成的;4、可能DNA已降解。5、在提

制备电泳实验——连续电泳

仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖电泳实验步骤1. 连续洗脱电泳使用连续洗脱的聚丙烯酰胺凝胶电泳或琼脂糖电泳能制备微克到毫克级的多肽,蛋白或核酸。装置可以是各种各样的。有的是把样品直接加在固体凝胶的表面,分子经过电泳分离后,由流动的缓冲液洗脱,纯化后的分子被浓缩,并由蠕动泵和部分收集器收集。2. 连

免疫电泳实验_电泳

试剂、试剂盒Tris-巴比妥缓冲液贮液电极缓冲液琼脂糖溶液实验步骤电泳时温度可控制在 10~15℃,同前述电泳的方法一样,先在冷却板上铺一层煤油,再铺胶。电极芯与凝胶的边缘接触 5~10 mm,并保持平行,电泳时的电场强度约为 20 V/cm。

琼脂糖凝胶电泳时胶中dna是靠什么发出荧光的

琼脂糖凝胶电泳时胶中dna是靠荧光染色剂溴化乙锭发出荧光的。溴化乙锭为一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基

琼脂糖凝胶电泳用哪种琼脂糖-DNA线性长度如何确定

线性DNA长度可以琼脂糖凝胶电泳来判断呀,这要看你的DNA是多大的了,如果是几KB的话,选择相应的Marker,跑电泳比对一下就知道大小了,如果是10KB以上的话,先用内切酶切,然后再跑电泳比对带型

电泳法和紫外分光光度法检测DNA,哪种方法更好

两种方法各有优劣。电泳法更直观,如果你有DNAMaker,并且知道Maker的浓度,就可以使用一维条带分析软件如QuantityOne分析样品中DNA的含量,而且可以很直观地了解目的DNA的纯度、大小等特性。但是,由于电泳中染色特异性很强,对DNA、RNA之外的小分子污染情况无法检测。紫外法可对样品

电泳DNA时,拖尾现象很严重,造成这种现象的原因有哪些

电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑:1、PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.

琼脂糖凝胶电泳时胶中dna是靠什么发出荧光的

琼脂糖凝胶电泳时胶中dna是靠荧光染色剂溴化乙锭发出荧光的。溴化乙锭为一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基

火箭免疫电泳的电泳

火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。

交叉免疫电泳的电泳

一种对样品中各蛋白组分进行定性分析或定量测定的技术。即借助区带电泳使蛋白质抗原分离,继而将含特异性抗体的琼脂糖插入至区带一侧,旋转90。再进行电泳,形成与火箭免疫电泳形状相似的沉淀峰。

通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验

实验方法原理 本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测纯化过程,以找到出问题步骤。实验材料 λ 噬菌体 DNAλ 噬菌体裂解物或原种试剂、试剂盒 2.5X SDS-EDTA 染料混合物

DNA经pcr扩增后电泳出现了三条带是怎么回事

非特异性扩增 优化下pcr条件 在不行的话就重新设计引物

人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析

实验目的: 1. 熟悉分子生物学实验的操作特点。 2.掌握人类基因组DNA提取的基本原理。 3.熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。 4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。 实验原理: 用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,加入SDS破裂核膜,用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来,经苯酚

人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析

实验目的:  1.熟悉分子生物学实验的操作特点。  2.掌握人类基因组DNA提取的基本原理。  3.熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。  4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。实验原理:  用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,加入SDS破裂核膜,用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来,经

通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验

本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测纯化过程,以找到出问题步骤。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量

DNA扩增产物经琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因

主要和你提取的DNA样品有关,样品纯度不好或是保存不适宜发生降解都会造成条带不清晰。

人类基因组DNA跑电泳一般用什么浓度的胶

总体原则是:分子量大的DNA,电泳时使用浓度较小的凝胶反之亦反。胶浓度越大,电泳速度越小;若胶浓度偏高,可能跑不动,条带缩在一起;若胶浓度过低,可能跑得太快,同样分不开。可参考下面的对应关系:凝胶浓度(%) 线性DNA长度(bp)0.5 1000~300000.7 800~120001.0 500~

实验中dna琼脂糖凝胶电泳的图(跑胶图)怎么看

克隆实验中dna琼脂糖凝胶电泳的图(跑胶图)怎么看琼脂糖是线性的多聚物,基本结构是1,3连结的β-D-半乳糖和1,4连结的3,6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链 。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解,温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶,

决定DNA在琼脂糖凝胶电泳色谱仪中迁移速率的因素

决定DNA在琼脂糖凝胶电泳色谱仪中迁移速率的因素有DNA分子大小、琼脂糖凝胶浓度、DNA构象、琼脂糖凝胶和电泳缓冲液中的溴化乙锭、所用电压、电泳缓冲液等。一、DNA分子大小:双链DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速率与其碱基对数的常用对数成反比。分子越大,迁移越慢,因为摩擦力越大,也因为大分子通过凝胶孔

2D电泳-电泳流程之-第一向电泳

第一向分离等电聚焦蛋白质是两性分子,在不同的pH环境中可以带正电荷、负电荷或不带电荷。对每个蛋白质来说都有一个特定的pH,此时蛋白质的静电荷为零,此pH值即该蛋白质的等电点(pI)。将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时,它会向与其所带电荷相反的电极方向移动。在移动过程中,蛋白分子可能获得或失去

电泳仪常用的电泳方法

电泳仪常用的电泳方法  一、凝胶电泳  由区带电泳中派生出的一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式。  凝胶电泳中的琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是普通电泳中应用zui多的两种形式。  目前,这种办法被广泛用来分析蛋白质和核酸。  二、醋酸纤维素薄膜电泳  电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、

免疫电泳实验_免疫电泳

实验材料待检抗原试剂、试剂盒抗体琼脂巴比妥缓冲液仪器、耗材电泳仪载物玻片打孔器玻璃铸型微量进样器实验步骤1.  取载物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%琼脂凝胶,制成2毫米厚的琼脂板。2.  按图位置,在琼脂板未凝固时,放入抗血清槽铸型,注意勿使铸型全部浸入琼脂中,待凝固时再打孔。3.

电泳技术RNA电泳操作步骤

  试剂:  琼脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。  步骤  一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc)  1. 称量20.9g的MOPS,置于1L烧杯中。  2. 加700mL

DNA琼脂糖凝胶电泳marker跑了两次不出来什么原因

如果marker质量没问题的话,应该是荧光染料有问题。可以把染料直接加到胶里再倒板。

质粒DNA限制性酶切及琼脂糖凝胶电泳分离鉴定1

实验原理一、DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:I类和III类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。III类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的D