通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验
实验方法原理 本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测纯化过程,以找到出问题步骤。实验材料 λ 噬菌体 DNAλ 噬菌体裂解物或原种试剂、试剂盒 2.5X SDS-EDTA 染料混合物DNaseⅠ稀释缓冲液胰 DNase Ⅰ仪器、耗材 琼脂糖凝胶水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液2.5X SDS-EDTA 染料混合物2. 酶和缓冲液DNaseⅠ稀释缓冲液,胰 DNase Ⅰ (1 mg/ml)3. 凝胶琼脂糖凝胶(0.7%),用 0.5X TBE,含 0.5 μg/ml 溴化乙锭4. 核酸和寡核苷酸λ 噬菌体 DNA ( 对照 DNA)5. 专用设备预置于 65℃ 的水浴6. 载体和菌株λ 噬菌体裂解物或原种二、方法1. 按如下方法配置胰 DNaseⅠ 的工作液(1 μg/ml):1 μl DNase Ⅰ 储......阅读全文
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验
实验方法原理 本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测纯化过程,以找到出问题步骤。实验材料 λ 噬菌体 DNAλ 噬菌体裂解物或原种试剂、试剂盒 2.5X SDS-EDTA 染料混合物
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验
本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测纯化过程,以找到出问题步骤。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA
实验方法原理 本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测纯化过程,以找到出问题步骤。
通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验
实验方法原理 来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备,通常有两种方法:① 平板裂解,这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法;② 小量液体培养,这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。
通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验
实验方法原理 来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备,通常有两种方法:① 平板裂解,这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法;② 小量液体培养,这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。实验材料 λ 噬菌体原种大肠杆菌铺平板细菌试剂、试剂盒 氯仿SM仪器、耗材 LB 或
通过平板裂解和洗脱制备λ噬菌体原种实验
来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备,通常有两种方法:① 平板裂解,这是一种噬菌体在生长于顶层琼脂或琼脂糖的细菌中增殖的方法;② 小量液体培养,这是用生长于液体培养基中的细菌进行噬菌体增殖的方法。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理来源于单个噬菌斑的 λ 噬菌体原种的制备
通过平板裂解和刮取制备λ噬菌体原种
方法:1、铺平板感染培养物的制备:对直径为10cm的培养皿,取105pfu的噬菌体(通常约为一个噬菌斑重悬液的1/10或一个大噬菌斑重悬液的1/100)与0.1ml铺平板细菌混匀。对直径为15cm的培养皿,去2*105pfu的噬菌体与0.2ml铺平板细菌混匀。至少要置一个含为感染细胞的对照管,将感染
制备DNA测序模板实验——小量裂解物中制备λ噬菌体DNA
实验材料重组λ噬菌体试剂、试剂盒DNA酶ⅠRNA酶ⅠPEGSMSDSEDTA异丙醇乙酸钠TE仪器、耗材巴斯德吸管试管离心机实验步骤1. 在新鲜配制的λ顶层琼脂糖和λ琼脂糖平板上,通过在平板上裂解适于λ噬菌体生长的大肠杆菌菌株,制备重组λ噬菌体毒种原液。2. 取700 μl 毒种液加入无菌的1.5
λ噬菌体分离物的快速分析(从平板裂解物中纯化λDNA)实验
实验方法原理 对有希望的基因组或 cDNA 克隆的分析,通常开始于用限制酶消化 λ 噬菌体 DNA 的小量制备物,并对消化产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。所获得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成(由噬菌体 SP6、T3 和 T7 编码的依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶来完成)的模板以
λ噬菌体分离物的快速分析(从平板裂解物中纯化λDNA)实验
实验方法原理 对有希望的基因组或 cDNA 克隆的分析,通常开始于用限制酶消化 λ 噬菌体 DNA 的小量制备物,并对消化产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。所获得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成(由噬菌体 SP6、T3 和 T7
λ噬菌体分离物的快速分析(从平板裂解物中纯化λDNA)实验
对有希望的基因组或 cDNA 克隆的分析,通常开始于用限制酶消化 λ 噬菌体 DNA 的小量制备物,并对消化产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。所获得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成(由噬菌体 SP6、T3 和 T7 编码的依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶来完成)的模板以及 PCR 的模板。本
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。实验材料 大肠杆菌培养物试剂、试剂盒 氯仿NaCl聚乙二醇SM胰 DNaseⅠ仪器、耗材 S
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。
用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验
实验方法原理 可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,另外噬菌体最初的接种量也大。但是,在液体培养物中制备的 λ 噬菌
用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验
实验方法原理 可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,另外噬菌体最初的接种量也大。但是,在液体培养物中制备的 λ 噬菌体原种将更清亮,并且也不含污染平板裂解物的硫酸盐多糖。
用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验
可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,另外噬菌体最初的接种量也大。但是,在液体培养物中制备的 λ 噬菌体原种将更清亮,并且也不含污染平板裂解物的硫酸盐多糖。本实验来源「分子克隆实验指
λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的平板裂解物或液体培养物,也可用于以后的分析。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒
材料:缓冲液和溶液:氯仿NaCl(固体)聚乙二醇(PEG 8000)SM酶和缓冲液:胰Dnase I (1mg/ml)胰Dnase I (1mg/ml)于TE中(ph7.6)离心机和转子:Sorvall GSA 转子或相当型号专用设备:量筒(2L)载体和菌株:大肠杆菌培养物,经λ噬菌体感染和裂解方
DNA凝胶电泳实验中EB的作用
1溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA.2溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配.许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性.溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄.溴化乙
DNA凝胶电泳实验中EB的作用
1溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA.2溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配.许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性.溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄.溴化乙
DNA凝胶电泳实验中EB的作用
1溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。2溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。溴化乙
λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验
如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说,λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地
λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
实验方法原理 遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的平板裂解物或液体培养物,也可用于以后的分析。
λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
实验方法原理 遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的平板裂解物或液体培养物,也可用于以后的分析。实验材料 λ 噬菌体试剂、试剂盒 氯仿SM仪器、耗材 硼硅酸盐巴斯德设管(配有橡皮球)或微量移液
λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验
实验方法原理 如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说,λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。
λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验
实验方法原理 如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说,λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。实验材料 噬菌体重组子大肠杆菌试剂、试剂盒 氯仿乙醇高盐缓冲液Tris-ClNaClEDT
重组M13噬菌体克隆分析
在本方案中,当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时,用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在本方案中,当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时,用重组 M13 噬菌
用噬菌粒载体制备单链DNA
实验方法原理 噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外,这些质粒通常是高拷贝数的,并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白,但含有全部的顺式作用序列,该作用是病毒 DNA
用噬菌粒载体制备单链DNA
实验方法原理 噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外,这些质粒通常是高拷贝数的,并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白,但含有全部的顺式作用序列,该作用是病毒 DNA 合成起始和结束及噬菌体颗粒的形态发生必不可少的。实验材料