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2D电泳电泳流程之第一向电泳

第一向分离等电聚焦蛋白质是两性分子,在不同的pH环境中可以带正电荷、负电荷或不带电荷。对每个蛋白质来说都有一个特定的pH,此时蛋白质的静电荷为零,此pH值即该蛋白质的等电点(pI)。将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时,它会向与其所带电荷相反的电极方向移动。在移动过程中,蛋白分子可能获得或失去质子,并且随着移动的进行,该蛋白所带的电荷数和迁移速度下降。当蛋白质迁移至其等电点pH位置时,其净电荷数为零,在电场中不再移动。聚焦是一个与pH相关的平衡过程:蛋白质以不同的速率靠近并最终停留在它们各自的pI值,在等电聚焦过程中,蛋白质可以从各个方向移动到它的恒定位点。......阅读全文

ZOOM® IPGRunner™系统:简化的双向电泳(2D gel eletrophoresis)

摘要双向电泳(Two-dimensional(2D) gel electrophoresis)是一项基于蛋白的两种不同特性:电荷和质量来分离蛋白的技术。首先基于蛋白固有电荷,通过等电聚焦(isoelectric focusing IEF)进行第一向蛋白分离,然后根据蛋白的质量,在第二向中通过SDS-

植物蛋白质组学和糖基化实验

实验材料链霉亲和素-过氧化物酶                                       &

双向电泳的新进展和新工具

  随着蛋白质组学概念的提出,双向电泳(2D gel electrophoresis)一度曾变得很流行。近几年,因质谱技术的快速发展,LC-MS的热度似乎更高。然而,在某些应用上,双向电泳更有优势。   双向电泳提供了整个样品的鸟瞰图,而这是质谱无法比拟的。它可以对样品中复杂的蛋白质进行整体性

植物蛋白质组学和糖基化实验2

3. 糖基释放后的蛋白质分析1 ) 糖基释放的化学处理方法还原性氨化反可应选择性的解离糖蛋白上的 O-糖苷(见注释 10) 。去糖基化的蛋白用 1D SDS-PAGE 分析,将其迁移情况与其糖基化形式的蛋白进行比较,电泳迁移率的增加是 O-连糖苷出现在蛋白上的证据(见注释 11)。( 1 ) 将 1

植物蛋白质组学和糖基化实验(四)

3.3 我的糖基化蛋白在哪实验人员可通过这个方法获得关于糖苷在蛋白骨架上的分布及糖苷本身的结构信息。这类实验可在纯化的糖蛋白或者从 1D 或 2D 电泳胶上分离出来的蛋白上进行,首先,用蛋白内切酶消化蛋白质,通过高效液相色谱(HPLC) 分离消化后的肽和糖肽混合物。对含有糖苷的收集组分进行糖

MALDI-TOF MS技术在临床微生物实验室中的应用前景

质谱技术在临床微生物实验室中的应用前景引言自20世纪80年代起, 质谱技术就已经成为科学研究中用于蛋白分析的强大工具。随着技术的不断成熟和广泛使用, 其在微生物检验常规诊断中的作用越来越受到关注, 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption

临床微生物实验室:质谱应用的广阔前景

  质谱技术在临床微生物实验室中的应用前景  【引言】自20世纪80年代起, 质谱技术就已经成为科学研究中用于蛋白分析的强大工具。随着技术的不断成熟和广泛使用, 其在微生物检验常规诊断中的作用越来越受到关注, 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser deso

等电聚焦和二维凝胶电泳实验

对于复杂混合物,如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分,通过两步正交的分离 (orthogonalseperation),二维凝胶 (2D 胶)电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷,即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量,即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电

蛋白质组学概念的起源和发展

  蛋白质组学的诞生和发展,离不开多学科和技术的逐渐交叉融合。这些学科技术包括(但不限于)基因组学、生物化学、分析化学、自动化、基于电磁场的精密质谱仪、信号处理、数理统计和计算机科学。近年来,分子医学、大数据技术和人工智能的发展,进一步加速推动了蛋白质组学的成长,使之在精准医疗领域展示出越来越大的应

谷类植物种子蛋白质提取实验

实验材料白蛋白                                         &n

谷类植物种子蛋白质提取实验

实验材料 白蛋白球蛋白试剂、试剂盒 提取液漂洗液溶解液烧化剂甘油溶液实验步骤 3.1 种子总蛋白提取的普适方法使用普适方法的目的在于从研磨好的种子中提取总蛋白质,不考虑具体的蛋白质种类 。此方法由 Damerval 等 [ 9] 及 Granier [ 10 ] 提出,它可以用于所有的种子,参见第

谷类植物种子蛋白质提取实验

实验材料白蛋白球蛋白试剂、试剂盒提取液漂洗液溶解液烧化剂甘油溶液实验步骤3.1 种子总蛋白提取的普适方法使用普适方法的目的在于从研磨好的种子中提取总蛋白质,不考虑具体的蛋白质种类 。此方法由 Damerval 等 [ 9] 及 Granier [ 10 ] 提出,它可以用于所有的种子,参见第 1 章

2-DE 蛋白质组学的 PROTICdb 数据库实验

实验步骤:3.1 PROTICdb 概述在输入或浏览数据时,每个最终用户需要一个 PROTICdb 账户(由您的管理员创建 ) 。作为一个新用户,首先要创建一个新的项目。一旦建立,该项目就属于这个用户,这个用户有权授予其他用户访问权限。为确保数据一致性的精确度,尽量不要用手动输入操作。因此,

2-DE 蛋白质组学的 PROTICdb 数据库实验

仪器、耗材DBMS实验步骤3.1 PROTICdb 概述在输入或浏览数据时,每个最终用户需要一个 PROTICdb 账户(由您的管理员创建 ) 。作为一个新用户,首先要创建一个新的项目。一旦建立,该项目就属于这个用户,这个用户有权授予其他用户访问权限。为确保数据一致性的精确度,尽量不要用手动输入操作

快速发现Biomarker?

SELDI蛋白质芯片系统实现了来自小样本的基于芯片的蛋白质和肽段图谱与一个高通量分析平台的一体化,可从大量复杂生物学样品中快速获得蛋白质分子量图谱,发现Biomarker。ProteinChip SELDI系统用于从大量复杂生物学样品中快速获得蛋白质分子量图谱,发现Biomarker。它使

蛋白质组实验全套流程方案-1

 蛋白质组实验流程双向电泳的样品的制备样品制备原则样品制备是双向电泳中最关键的一步,将直接影响2-DE结果好坏。目前并没有一个通用的样品制备方法,尽管处理方法多种多样,但都遵循几个基本的原则:1)尽可能的提高样品蛋白的溶解度,抽提最大量的总蛋白,减少蛋白质的损失;2)减少对蛋白质的人为修饰

质谱仪

最近又有几项有关质谱仪的最新进展问世,这些新成果的出现又给我们的生物大分子研究工作补充了“弹药”。在蛋白质测序方面,基于碰撞诱导裂解技术(CID),又新出现了可变裂解技术(Alternate fragmentation technique),该新技术是基于处在碰撞池中的离子具有的电子传递特性开发出来

质谱检测法与蛋白质分析(二)

传统的和最新的蛋白质组学研究策略虽然到目前为止,还没有一种蛋白质组学研究策略能够对某个蛋白质组进行常规的、完整的分析,但是现在的技术已经非常强大,我们相信,很快就能进行全蛋白质组学研究了。而且,对某个亚蛋白质组(比如某个细胞器或亚细胞结构的蛋白质组)进行研究早就已经不是什么难题了,这已经成为了一种常

质谱检测法如何进行蛋白质分析?

  MS/MS操作模式  串联质谱仪通常使用的都是离子模式来鉴定蛋白质的氨基酸序列。目前所有的MS/MS质谱仪都具有该功能。不过其它特殊的质谱仪也具有MS/MS功能。如果要发现蛋白质中的某个功能基团则需要用到母离子扫描功能或者中性丢失扫描功能,而这就必须用到三重四级杆质谱仪,如Q-Q-Q质谱仪,或四

质谱检测法与蛋白质分析(三)

  Protein(s):待测蛋白质样品;Enz. Digestion:酶解;Pep. Mixture:裂解产物混合物;   MS Analysis:质谱检测分析;DB Search:数据库比对搜索;Identities:鉴定;   Prot.DB :蛋白质数据库;Proteom

珀金埃尔默:抢占赛道 提供细胞分析系统解决方案

  分析测试百科网讯 4月13日中国细胞生物学学会2021年全国学术大会在重庆召开。来自细胞生物学相关领域的2000余位专家、学者齐聚一堂,交流学科发展,更有众多企业,带来了领域前沿的创新成果。作为一门古老而始终面向前沿的学科,细胞生物学研究的进步同细胞分析技术密不可分,而近年来最令人瞩目的应用是细

质谱沙龙第十六期活动报道

      2009年2月22日下午,质谱沙龙第十六期活动在第二炮兵总医院远程会诊中心会议室举行。此次到会者除了来自发酵研究院、清华大学医学院、北京大学分析中心、二炮总医院、军事医学科学院、解放军307医院、北京生命科学研究所、中科院植物所、AB公司

电转化流程

电转化流程适用于(1)转基因(2)基因介导(3)基因修复。实验方法原理胞电转染(电转),也叫细胞电穿孔 (electroporation),是把外源大分子物质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小分子导入细胞膜内部的重要方法。 在瞬间强大电场的作用下,溶液中细胞的细胞膜具有了一定的

电转化流程

            实验方法原理 胞电转染(电转),也叫细胞电穿孔 (electroporation),是把外源大分子物质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小分子导入细胞膜内部的重要方法。&n

China Lab 2014技术研讨会主会场演讲报告

  2014年3月12日,由广东省对外科技交流中心、国药励展展览有限责任公司、广东国际科技贸易展览公司主办的广州国际分析测试及实验室设备展览会暨技术研讨会(China Lab 2014)在广州保利世贸博览馆盛大开幕。12日上午召开的中国(广州)分析测试论坛主会场共邀请到诸位专家学者就蛋白质的