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双标签的分离实验

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤 一、用 NlaIII 消化双标签,释放接头1.向 480ul 已纯化的 PCR 产物中加入下列成分:2.在 37℃ 下消化 Ih(不要热失活酶,否则将致使 22~26bp 的小双标签变性)。3.消化产物可以在 4℃ 下过夜保存,或者用 Dynabead 进行生物素化 PCR 产物的提取。二、用 Dynabead 提取生物素化产物注意:本步骤中,由于生物素链霉抗生物素的捕获,去除了接头及未酶解或者部分酶解的产物,从而富集反应产物。1.荡链霉抗生物素 M-280 Dynabead 1 min,使其重新成为悬液。2.将 3 份 IOOul 的 Dynabead 转移入 1.5 ml 的 Eppendorf 试管中。3.用磁设备固定磁珠,弃去上清液。4.200ulIX 结合及冲洗缓冲液重悬冲洗 3 次,固定磁珠,弃去冲洗液。5.NlaIII 酶解过的双标签......阅读全文

基因表达轮廓(gene expressed profile)技术-2

经过这轮RDA过程,Tester中的目的DNA将得到第一次富集。将第一轮产物更换新接头,进行第二轮RDA过程,目的DNA可得到进一步的富集。该技术假阳性很低。但仍不能解决个体mRNA在丰度上存在巨大差异的问题,当靶序列浓度较低时,其富集受抑制。3:抑制消减杂交(suppression subtrac

大规模蛋白质相互作用研究方法进展(三)

           图1 TAP亲和层析纯化原理[14]  注:A:标签中的ProteinA 与固化的IgG 结合缓冲液淋洗去除不能结合的杂蛋白,TEV 酶切分离ProteinA &nbs

GE生命科学网店再添新品,小改变可以带来大不同

  GE生命科学的电子商务团队致力于将网络购买平台打造成为实验室小伙伴儿身边的全天候耗材供应商。GE生命科学网店不断扩展产品线,开拓新渠道,目前安特百货旗舰店中,提供四大类共386个货品。店内商品涵盖过滤与分离、样品前处理、生物分子试剂、手动蛋白纯化

赛默飞ASMS发布两款Orbitrap系列液质 一款小巧一款“高大上”

  分析测试百科网讯 6月2-6日,全球质谱界盛会—第67届美国质谱年会(67th ASMS,以下简称ASMS)在美国亚特兰大盛大举行。会议期间,赛默飞发布了两款Orbitrap系列新液质,并举办了媒体发布会和Thermo Fisher Happy Night!媒体发布会现场  赛默飞在本届ASMS

动物实验技术-1

实验动物常用作病原微生物的分离和鉴定,进行动物接种实验应选择易感性高、健康的动物。常用的动物有小鼠、豚鼠和家兔。根据实验要求可通过皮下、皮内、肌肉、腹腔、静脉等途径注射。感染动物死亡后,必要时进行尸体解剖并作病原体的检查。一、实验动物接种法(一)小白鼠接种法【材料】1.小白鼠。2.无菌注射器(1ml

研究蛋白质与DNA相互作用的主要方法

一、引言在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mRNA转录与修饰以及病毒的感染等都涉及到DNA与蛋白质之间的相互作用的问题。重组DNA技术的发展,人们已分离到了许多重要的基因。现在的关键问题是需要揭示环境因子及发育信号究竟是如何控制基因的转录活性。为此需要:a、鉴定分析参与基因表达调控的DNA元件

优级纯、分析纯、色谱纯、色谱试剂都有啥区别?

  试剂规格基本上按纯度(杂质含量的多少)划分,共有高纯试剂、光谱纯试剂、基准试剂、分光纯试剂、优级纯试剂、分析试剂和化学纯试剂等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要优级纯、分级纯和化学纯3种。选用不同纯度试剂的标准主要是不同的反应需求,以及该试剂所含杂质对分析要求有无影响。   按

环状RNA研究深度剖析

  1.环状RNA为什么火?它到底是何方神圣?   2013年两篇Nature[1][2]文章的出世,彻底颠覆了我们对RNA的传统认知,同时也迅速引爆了整个生物医学界!经过严格统计汇总后,2017年国家自然科学金获批的项目中环状RNA研究相关的项目总数高达176项,其中有两项杰出青年基金,一项优秀

2018国自然研究热点一:环状RNA研究深度剖析

  1.环状RNA为什么火?它到底是何方神圣?   2013年两篇Nature[1][2]文章的出世,彻底颠覆了我们对RNA的传统认知,同时也迅速引爆了整个生物医学界!经过严格统计汇总后,2017年国家自然科学金获批的项目中环状RNA研究相关的项目总数高达176项,其中有两项杰出青年基金,一项优秀

新鲜冰冻血浆中凝血因子检测结果与分析

【关键词】  新鲜冰冻血浆; 凝血因子; 活性 根据卫生部临床输血技术规范要求,新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)自血液采集后6~8 h之内经分离放入-50℃速冻成块,在-30℃保存1年内几乎含有全部凝血因子,包括不稳定因子Ⅴ和Ⅷ[12]。而血液凝血因子易受血

冷冻血浆中凝血指标的测定与分析

【摘要】  目的 为了解和掌握FFP中血液凝血指标的含量及活性对临床具有重要意义。方法 对湖南省永州市中心血站提供本院的FFP随机抽查20份/袋/2U,进行了部分凝血指标的含量测定与分析。结果 从本凝血指标测定与分析中发现仍有少量血液凝血因子未能达到正常要求,如:APTT超出正常范围(>3

食品检验工教案

第一讲实验室安全知识本讲重点难点 1、 分析实验室一般安全操作守则 2、 使用电器设备的安全守则 3、 强氧化剂、爆炸性物质的处理与防爆 讲课实施: 一、分析实验室一般安全操作守则 (一)一般安全操作 1.防止中毒 (1)所有试剂药品瓶,要有标签。 (2)严禁试剂入口,用移液管吸取有毒样品时应用橡皮

更快更灵敏的timsTOF Pro:为蛋白质组学而生

  分析测试百科网讯,今年9月国际人类蛋白质组学大会(HUPO)上,布鲁克公司发布timsTOF Pro捕集离子淌度飞行时间质谱,该产品获得了由分析测试百科网组织评选的2017 ANTOP大奖,奖项名称为“蛋白质组学创新质谱技术奖” 。BCEIA展会上,分析测试百科网编辑采访到布鲁克道尔顿中国区高级

布鲁克携手timsTOF Pro、PASEF推动蛋白质组学高精度分析

  分析测试百科网讯 2018年11月15日,第十届中国蛋白质组学大会(CNHUPO)在广州召开。布鲁克携捕获型离子淌度质谱timsTOF Pro、超高分辨磁共振质谱scimaX等众多明星产品参加了本次盛会。会后,分析测试百科网讯采访到了布鲁克董事总经理兼执行副总裁Dr. Rohan Thakur,

布鲁克推出全新timsTOF™ Pro捕集离子淌度质谱

  分析测试百科网讯 在近日召开的第十六届人类蛋白质组学年度世界大会(HUPO)上,布鲁克推出了基于平行累积连续碎裂(Parallel Accumulation Serial Fragmentation,PASEF)技术的timsTOF Pro质谱系统。凭借其专有的捕集离子淌度质谱(TIMS)技术,

博奥晶典许俊泉:效率更高更贴近临床需求CTC分析平台

  循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell, CTC)是液体活检最重要的研究领域之一,近年来相关检测技术不断取得新突破,成为体外诊断的新热点。而最近一则“强生CTC检测系统停产称已出售 存技术瓶颈”的新闻又让业内众说纷纭。在2016年5月30日,强生(上海)医疗器材有限公司日前澄

生物大分子样品的保存

生物大分子制成品的正确保存极为重要,一旦保存不当,辛辛苦苦制成的样品失活、变性、变质,使前面的全部制备工作化为乌有,损失惨重,全功尽弃。影响生物大分子样品保存的主要因素有:⑴空气:空气的影响主要是潮解、微生物污染和自动氧化。空气中微生物的污染可使样品腐败变质,样品吸湿后会引起潮解变性,同时也为微生物

影响电泳迁移率的因素介绍

  由电泳迁移率的公式可以看出,影响电泳分离的因素很多,下面简单讨论一些主要的影响因素:   1. 待分离生物大分子的性质   待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说,分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快。   2. 缓冲液的性质

邻氨基苯甲酸合成酶的测定实验

暂未评分点评实验,有机会获丁当奖励 +收藏邻氨基苯甲酸合成酶的测定实验标签:分支酸丙酮酸-裂解酶 分支酸 L-谷氨酰胺 酶学实验手册 第三章                     

串联体化实验

是对差异显示技术(DD)实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验现代神经科学研究技术作者:U.Windhorst & H. Johansson  翻译:赵志奇 陈军试剂、试剂盒溶液与缓冲液LoTEcDNA标签连接酶实验步骤实验方案 A 和 B1.将切

避免与其他细胞类型的组织培养污染

全球生物标准协会(GBSI)进行的在线调查结果证实了许多细胞科学家已经知道的情况。超过一半的受访者--52% - “从未”对他们实验中使用的细胞系进行认证或其他与物种相关的质量控制测试。根据调查结果,百分之四十四的人从未进行过STR(短串联重复)DNA分析,这是公认的认证标准。虽然受访者更有可能进行

用固化 Ni2+吸收色谱纯化带组氨酸标签的蛋白实验

用固化 Ni2+吸收色谱纯化带组氨酸标签的蛋白实验             实验材料 表达带多聚组氨酸

空间蛋白质组学:一种强大的细胞生物学发现工具

真核细胞高度区室化,生物过程被分隔在不同的区室进行。蛋白质功能与亚细胞定位密切相关,不同的区室提供不同的化学环境(例如pH和氧化还原条件)、不同的潜在作用配体或底物。因此,对蛋白质亚细胞定位的严格控制是细胞生理学的重要调控内容。大多数细胞生物学过程涉及蛋白质亚细胞定位的变化,例如转录因子在细胞核-胞

病毒的保存实验

实验方法原理 含水物质首先经过冷冻,然后在真空中使水分升华,干燥,在这种低温、干燥和缺氧环境下,微生物的生长和代谢暂时停止,因而保存期较长,便于运输。该法需要冻干机等设备,并需保护剂。保护剂一般采用脱脂牛奶或血清等。保护剂的作用机理是在冷冻干燥的脱水过程中稳定病毒结构,防止细胞膜受冷冻或干

病毒的保存实验——冷冻干燥保存

病毒是具有生物活性的最小微生物,由于其结构复杂,各种类型的病毒对物理、化学作用的反应有所不同(温度、 pH 、盐类等)。保存病毒首先必须了解各种病毒的性质,才能恰当的选择保存剂和保护方法。来源:《病毒学检验》实验方法原理含水物质首先经过冷冻,然后在真空中使水分升华,干燥,在这种低

微生物检验室基本条件与实验守则!

   微生物检验室基本条件与实验守则!   一、微生物检验室基本条件   微生物检验室通常包括实验室和无菌室(包括无菌室外的缓冲间)。这样划分实验室不是的,可根据具体条件而定,但以下几个方面是不可缺少的。对各室的共同要求是高度的清洁卫生,也就是要尽可能地创造无菌条件。为了达到这个目的,房间的

新型微流控设备进一步优化液体活检

  伊利诺伊大学芝加哥分校和澳大利亚昆士兰科技大学的研究人员开发了一种设备,可以从患者血液样本中分离出单个癌细胞。这种微流控设备的工作原理是将在血液中发现的各种细胞类型按其大小进行分离。也许有朝一日,这种设备可以让快速价廉的液体活检帮助发现癌症并制定有针对性的治疗计划。这项发现发表在《微系统与纳米工

微流控液体活检原理

  伊利诺伊大学芝加哥分校和澳大利亚昆士兰科技大学的研究人员开发了一种设备,可以从患者血液样本中分离出单个癌细胞。这种微流控设备的工作原理是将在血液中发现的各种细胞类型按其大小进行分离。也许有朝一日,这种设备可以让快速价廉的液体活检帮助发现癌症并制定有针对性的治疗计划。这项发现发表在《微系统与纳米工

高效液相色谱仪正确配置流动相的要点

1.高效液相色谱仪的分离原理主要取决于流动相和固定相的吸附和解吸。流动相的正确配置对实验数据和分离效果至关重要。首先,流动相构型中应注意的问题-一般情况下,溶剂的混合是根据体积比(V≤V)或重量比(W≤W)进行的。溶液的体积随温度的变化而变化,因此根据重量比混合流动相。样品测定的重复性好,但操作繁琐

银耳菌种的分离实验

一、实验目的1.了解混合类型菌丝的概念;2.掌握银耳菌种分离的方法;3.学会银耳耳木分离的具体方法步骤。二、实验材料长有银耳的段木若干根、锯条、解剖刀、接种镊子、斜面培养基、75%的酒精棉球、培养皿、0.1%升汞水、手表、纱布、酒精灯、接种箱等。三、实验步骤1.选一根生长银耳的朵大肉厚且密的耳木一根