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WesternBlot技术实验流程

Western Blot又称为蛋白质印迹,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。 基本原理:聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离,分离后的蛋白被转移到固相支撑物(杂交膜)上,抗体特异性识别目标蛋白,通过酶促反应或者化学发光等方法将目标蛋白可视化,从而对蛋白进行定性或者定量研究。 WB技术的基本操作流程如下: 配胶 1. 注意一定要将玻璃板洗净,最后用ddH2O冲洗,将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。 2. 分离胶及浓缩胶均可事先配好(除AP及TEMED外),过滤后作为储存液避光存放于4℃,可至少存放1个月,临用前取出室温平衡(否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡,有条件者可真空抽吸3分钟),加入10%AP(0.7~0.8:100, 分离胶浓度越高AP浓度越低,15%的分离胶可用......阅读全文

Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较

  Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较,传统Western blot方法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(硝酸纤维素膜即NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到

Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较

Western Blot全自动分析仪与传统WB方法的比较,传统Western blot方法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(硝酸纤维素膜即NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到膜或

WB新时代开启 GE医疗发布Amersham WB蛋白免疫印迹系统

  2014年9月24日,2014慕尼黑上海分析生化展在上海新国际博览中心隆重拉开帷幕。GE医疗生命科学亮相2014慕尼黑上海分析生化展,举办新品发布会全球同步发布Western

Western blotting蛋白印迹市场概况和主要品牌及产品

近日,MarketsandMarkets咨询公司发布了全球western blotting市场的分析报告。据MarketsandMarkets预测,全球western blotting的市场规模将从2016年的5.75亿美元增长到2021年的7.31亿美元,复合年均增长率达4.9%。另一家Futur

Western blot分析的自动化不再是梦想

  Western blot是检测蛋白质的一项经典技术,几十年来一直受到人们的欢迎。不过,令人尴尬的是,这也是一个相当耗时并且难以重现的过程,有时带来惊喜,有时则是惊吓。  典型的Western blot流程大家都清楚,首先是蛋白电泳,分离后将蛋白质转移到膜上,然后进行一系列的处理,包括封闭、一抗孵

全自动Wes蛋白印迹让大分子量蛋白不再“难测”

  不管是基础研究还是转化医学,特定样本中特定蛋白质的表达情况可为研究者提供丰富的生物学信息。如临床样品中疾病特异性Biomarker的检测定量可作为疾病诊断、病患分型及疗效评估的重要参考依据;药物筛选活动中,也常常通过药物靶标及其下游通路蛋白的表达量或修饰状态来评估潜在的药效。著名的抗白血病药物G

Western Blot技术篇之样品制备

  Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:   从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)   十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按

Western Blot技术篇之样品制备

  Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:   从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)   十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按大小分离蛋白质

Western Blot技术篇之样品制备

  Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:   从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)   十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电泳按大小分离蛋白质

水平电泳仪选型

     Western Blot 是一种用于检测蛋白质以及蛋白质翻译后修饰的常用方法,可以对简单或复杂生物样品中的目标蛋白质进行半定量或定量分析。其操作步骤包括:      从细胞、组织或体液中制备样品(蛋白质提取和蛋白质浓度测量)      十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶通过电

BlotCycler全自动蛋白质印迹杂交系统与手工操作对比

Western Blot 属于经验依赖性的多步骤实验,结果的优劣受到多个因素的影响,传统的手工操作容易引入误差,难以保证重复性。美国Precision Biosystems公司携手环亚生物科技有限公司(APG BIO)推出的BlotCycler全自动化的蛋白质印迹杂交系统可以很好的解决了

今日让你刮目相看的Western blotting成像系统

  为了追踪Western blot中产生的信息,研究人员大多需要使用成像系统。这些工具将蛋白分析的图像转换成数字文件。近年来,Western blotting成像系统有了明显改进。在成像工具的帮助下,数据可以更好地定量。  与此同时,Western blot的操作也在不断变化。研究人员正逐渐从暗室

Nature年度技术:定向蛋白质组学

  时近岁末,各大杂志接连进行了年终盘点,此前出版的《Nature》杂志也对2012年进行了回顾,评点了2012年的科技进展,科技政策以及重要人物,中国科学家王俊入选了人物篇。同时《Nature Methods》也盘点了今年与明年的技术热点,选出了2012年度技术成果:定向蛋白质组学(targe

分子克隆介绍

各位小伙伴,大家还记得当初进实验室的时候接触到的一个实验技能是什么呢?没错,是 PCR 扩增。小编曾经也是,看着自己亲自配比 PCR 克隆扩增的每个组分,亲眼看着琼脂糖凝胶在紫外透光台上发出的幽绿色的荧光,也是深深被迷住。但总不可能成天就对着这个邪魅的荧光发呆,对吧?看久了,她会爱上你的眼

蛋白质印迹技术30年“进化”史

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。   有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western

新技术助蛋白质转印法提速

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。  有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western B

外泌体及其蛋白质组学研究

  外泌体是什么?  外泌体(Exosome),是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-200 nm。外泌体存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳等,不同组织来源的外泌体在内容物组成和功能方面存在差异,这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。越来越多的证据表明,宿主

Wes全自动蛋白印迹技术助力微量蛋白样品的检测

  科学家经常通过蛋白质的表达及修饰情况来揭示对应样品的生理或病理状态。WesternBlot是进行蛋白检测的最经典技术。核酸检测对样品量的要求极低,因为DNA或RNA具备体外扩增的性质。而蛋白质检测只能受限于能够获得的原始样品量。传统WesternBlot每个泳道所需的蛋白总量达10-100μg,

RNA甲基化研究深度剖析(一)

一、听说最近 RNA甲基化很火,它是何方神圣?1、高分文章频现 说起近来的科研热点,RNA甲基化修饰的相关研究可以说是当前整个生命科学领域最热门的方向之一,亮点文章频出,着实让人有些目不暇接。RNA甲基化的研究近3月发表的文章影响因子为10分以上的,就有高达 17 篇。

免疫荧光实验方法

 免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及

独立研究证实V3western流程的优越性

  来自澳大利亚弗林德斯大学(Flinders University)的研究人员近日在《Analytical Biochemistry》杂志上发表独立研究成果,证实了在western blotting中采用Bio-Rad stain-free技术的优越性。   弗林德斯大学的Alex Co

显微注射法建立转基因小鼠模型的操作流程

实验概要本实验详细介绍了显微注射法建立转基因小鼠模型的操作流程。实验原理转基因小鼠制备的基本原理是将改建后的目的基因(或基因组片段)用显微注射法注入供体小鼠的受精卵(或着床前胚胎细胞),然后将此受精卵(或着床前胚胎细胞)再植入受体动物的输卵管(或子宫)中,使其发育成携带有外源基因的转基因动物,通过分

ELISA试剂盒的选择方法(三)

第三步:检测什么样本?试验周期多长? 如需要检测的是尿液,柠檬酸盐血浆样本,需在订购前仔细查看ELISA试剂盒说明书中的验证样本。简单的说,如果ELISA试剂盒是没有用过试剂盒检测尿样,柠檬酸盐血浆,使用该试剂盒检测尿样会存在极大的风险;而且很多ELISA试剂盒中还会特别说明“不能检测柠檬酸盐血浆”

分析磷酸化蛋白的新方法

  蛋白磷酸化是重要的翻译后修饰,在调控基因表达和细胞功能方面起着关键作用。检测磷酸化时一般使用磷酸化抗体。近几年,市场上也出现了一些新的技术和产品,可实现磷酸化的灵敏检测。   Phos-tag™便是其中的一种。它最初由日本广岛大学医药分子功能科学研究室开发,后由Wako公司商业化。P

GST-pulldown操作流程

实验目的:体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用,或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。 实验原理:利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)

无脂肪酸BSA牛血清白蛋白产品的选择及应用

牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)是牛血清中的一种球蛋白,又称第五组分(需要注意的是,第五组分并不是BSA的一种组份,而是Edwin J. Cohn教授早期从血液中通过特定的分离技术得到5种组份,其中第五种就是白蛋白),CAS号为9048-46-8,包含583

Cell-Based ELISA简介以及应用

1、Cell-Based ELISA 的优点: Cell-Based ELISA(基于细胞的 ELISA)是一种全新的ELISA技术,有两个最突出的优点:1.1不需要抽提蛋白、包被微孔板:细胞直接在微孔板里培养,待检测的时候,将细胞固定在微孔板上并进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时,由于客观和

GST-pulldown操作流程

实验目的:体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用,或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。实验原理:利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,

GST-pulldown操作流程

实验目的:体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用,或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。实验原理:利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,

Meso Scale Discovery(MSD) ELISA试剂盒在胰岛素检测中的应用

有越来越多的证据显示,胎儿期及生命早期发生的事件可能会导致永久性的代谢改变,如II型糖尿病及代谢综合征[一个会增加心脏病、糖尿病和中风风险的各种风险因子的组合]。尽管在儿童和成人中进行的研究支持该假说,即早产可能会导致不良的代谢改变,但人们不清楚所观察到的早产与日后胰岛素抵抗及 II型糖尿病之间