蛋白质测序
一、概念当前，所谓蛋白质测序，主要指的是蛋白质的一级结构的测定。蛋白质的一级结构(Primary structure)包括组成蛋白质的多肽链数目。很多场合多肽和蛋白质可以等同使用。多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一级结构以来，现在已经知道约十万个不同蛋白质的一级结构。二、测定步骤1 多肽链的拆分。由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).2 测定蛋白质分子中多肽链的数目。通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。3 二硫键的断裂。几条多肽链通过二硫键交联在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的β-巯基乙......阅读全文
蛋白质自动测序仪的基本结构
蛋白质自动测序仪结构非常复杂，基本组成构件包括反应器、转换器、进样器、氨基酸分析系统和信息软件处理系统[1]。 反应器反应器中进行 Edman化学降解反应中偶联反应和环化裂解反应。在偶联反应之前有一个样品固定过程，即将蛋白质样品固定在纤维板上或将转印有蛋白质斑点的聚偏二氟乙烯膜（FVDF）放置
蛋白质质谱测序技术和仪器国产化
2015年10月17日，第二届全国质谱分析学术报告会在浙江大学紫荆港校区体育馆盛大开幕，在5位院士的精彩报告后，多位学者做了高水平的大会报告。 复旦大学杨芃原教授：蛋白质质谱测序技术和仪器国产化 复旦大学教授杨芃原教授做题为《蛋白质质谱测序技术和仪器国产化》的报告。蛋白质质谱测
蛋白质自动测序仪的日常维护
流动相的选择采用与检测器相匹配且黏度小的“HPLC”级溶剂，经过蒸馏和0.45μm的过滤去除纤维毛和未溶解的机械颗粒等，经过0.2μm的过滤可除去有紫外吸收的杂质对试样有适宜的溶解度。避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂[1]。 水的等级需用纯化水，因为不纯物的存在会增加去离子的吸光率，
蛋白质自动测序仪的发展历史
1953年，瑞典化学家Edman采用异硫氰酸苯酯法测定蛋白质的N端序列，为氨基酸自动测序奠定了基础。 1967年，Edman和Begg根据异硫氰酸苯酯法测定原理设计了第一台蛋白质自动测序仪（旋转杯蛋白质测序仪），为蛋白质自动测序以及蛋白质自动测序仪的商品化生产提供了理论支持和样机。 1971
蛋白质自动测序仪的工作原理
蛋白质测序仪主要检测的是蛋白质一级结构（氨基酸序列），其基本原理沿用艾德蒙（Edman）化学降解法，这也是经典的蛋白质测序方法。利用 Edman化学降解法测定蛋白质或多肽N末端序列，在测定过程中，氨基酸残基依次与异硫氰酸苯酯（PITC）作用，从蛋白质N末端依次切割下来，形成稳定的PTH氨基酸后进
我国或将实现蛋白质测序仪器和试剂国产化
基因测序技术飞速发展，使得几十个甚至上百个基因的测序能够在几天之内完成，近日，“蛋白质测序仪器和试剂国产化”项目实施工作会议在北京大学顺利落幕，会议得到了北京大学前沿交叉学科研究院方竞院长的大力支持。 90年代人类基因组计划，中国科学家承担了1%的任务；而2010年代的人类蛋白组计划，则是由中
新一代蛋白质测序方法诞生－|－Nature－Biotechnology论文推荐
德克萨斯大学奥斯汀分校（The University of Texas at Austin）的一个研究小组展示了一种比现有技术更灵敏的蛋白质测序新方法，能够识别单个蛋白质分子，而不再一次需要数百万个分子。这一进展可能对生物医学研究产生重大影响，使得开发用于癌症和其他疾病诊断的新的生物标志物更加容易，
新一代蛋白质测序方法诞生－|－Nature－Biotechnology论文推荐
德克萨斯大学奥斯汀分校研究人员发明了一种新技术，希望将蛋白质测序变得像 DNA 测序一样灵敏、快捷。 德克萨斯大学奥斯汀分校（The University of Texas at Austin）的一个研究小组展示了一种比现有技术更灵敏的蛋白质测序新方法，能够识别单个蛋白质分子，而不再一次需要数
川大华西医院研究者破译蛋白质测序难题
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DNA测序PCR测序反应
1. 取0.2 ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂： 所加试剂 测定模板管 标准对照管 BigDye Mix 1 μl 1 μl 待测的质粒DNA 1 μl － pGEM-3Zf (+) 双链DNA － 1 μl 待测DNA的正向引物 1 μl － M13(
DNA测序的测序原理
DNA测序的测序原理是：利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸
DNA测序的测序技术
高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（Next-generation sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以
二代测序的焦磷酸测序，合成法测序，连接法测序和离子半导体测序原理
不同的二代测序平台的区别主要体现在测序反应的技术上，这些差别可以分为4类： 焦磷酸测序，合成法测序，连接法测序和离子半导体测序。焦磷酸测序 在焦磷酸测序中，测序反应通过每个核苷酸结合过程中释放的焦磷酸来调控。释放的焦磷酸参与了一系列化学反应从而导致链光的产生。发出的光由记录基因蔟相应序列的相
简述DNA测序的测序规律
生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。 由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。 在可以区分长度仅
DNA测序仪pcr测序反应
pcr测序反应 (1) 取0.2ml的pcr管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂： 所加试剂 测定模板管 标准对照管 bigdye mix 1μl 1μl 待测的质粒dna 1μl － pgem-3zf (+) 双链dna － 1μl 待测dna的正向引物 1μl －
DNA测序技术的测序原理
化学修饰法测序原理化学试剂处理末段DNA片段，造成碱基的特异性切割，产生一组具有各种不同长度的DNA链的反应混合物，经凝胶电泳分离。化学切割反应：包括碱基的修饰，修饰的碱基从其糖环上转移出去在失去碱基的糖环处DNA断裂。Sanger法测序的原理就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物
DNA测序的测序目的
确定重组DNA的方向与结构，对突变进行定位、鉴定和比较研究。
DNA测序技术的测序规律
生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。在可以区分长度仅差一个核苷酸
DNA测序——自动测序法
DNA测序可用于：（1）测定未知序列；（2）确定重组DNA的方向与结构；（3）对突变进行定位和鉴定比较研究。实验方法原理ABI PRISM 310型基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司ZL的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单
DNA测序仪：454测序仪
454测序仪的出现极大促进了测序业务的开展，科研人员已经将测序技术作为解决科研工作中许多常见 问题的利器。这是因为454测序仪在以下几个方面取得了质的突破：首先是解决了高通量测序问题；其次它简 化了样品准备步骤，将以往转化大肠杆菌扩增质粒的繁琐过程全部用简单的体外PCR扩增法替代了；最后， 它缩小了
DNA测序的测序原理介绍
化学修饰法测序原理 化学试剂处理末段DNA片段，造成碱基的特异性切割，产生一组具有各种不同长度的DNA链的反应混合物，经凝胶电泳分离。化学切割反应：包括碱基的修饰，修饰的碱基从其糖环上转移出去在失去碱基的糖环处DNA断裂。 Sanger法测序的原理 就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定
直接分辨单个氨基酸分子小小纳米孔破解蛋白质测序难题
蛋白质是生命活动的主要承担者。测量组成蛋白质的氨基酸的排列顺序被称为蛋白质测序。由于缺乏普适、高效的测序技术，人类对蛋白质的了解还极其有限，生命世界的诸多奥秘仍待破解。近日，浙江大学化学系冯建东团队提出了基于固体纳米孔的氨基酸识别方法。他们构建了直径为1纳米左右的人工纳米孔，可进行单个氨基酸分子的精
直接分辨单个氨基酸分子小小纳米孔破解蛋白质测序难题
蛋白质是生命活动的主要承担者。测量组成蛋白质的氨基酸的排列顺序被称为蛋白质测序。由于缺乏普适、高效的测序技术，人类对蛋白质的了解还极其有限，生命世界的诸多奥秘仍待破解。近日，浙江大学化学系冯建东团队提出了基于固体纳米孔的氨基酸识别方法。他们构建了直径为1纳米左右的人工纳米孔，可进行单个氨基酸分子的精
直接RNA测序、串联质谱法揭示新冠转录组和蛋白质组特征
此前，南开大学高山、阮吉寿等在中国预印本ChinaXiv网站发表论文，称新冠病毒S蛋白可能存在Furin蛋白酶切位点。近日，发表在预印本网站bioRxiv上的一篇论文使用直接RNA测序和串联质谱法表明了SARS-CoV-2的转录组和蛋白质组的特征，揭示了细胞通道在去除了疑似Furin 蛋白酶切位点的
蛋白质测序技术为临床诊断和治疗的常规应用打开大门
虽然DNA提供了生物形态和功能的遗传食谱，但身体蛋白质的工作是执行DNA遗传密码所要求的复杂命令。 斯图尔特·林赛(Stuart Lindsay)是亚利桑那州立大学生物设计研究所(Biodesign Institute at ASU)的一名研究员，他一直走在改进DNA快速测序的前沿，最近他将自
双脱氧法DNA测序实验——测序酶进行标记测序反应
在基本的双晩氧测序反应中，寡核苷酸引物退火于单链DNA摸板，在4种脱氧核糖核酸三磷酸存在时，引物为DNA聚合酶所延伸。反应混合物中也含有4种双脱氧核糖核苷三磷酸的其中一种，当它掺入到DNA的生长链时，可终止链的延伸。实验材料DNA试剂、试剂盒寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器
解码“基因组学之父”桑格：测序，测序，测序
“桑格当之无愧地被称为‘基因组学之父’，他的工作为人类读取和理解基因代码奠定了基础，彻底变革了生物学并极大促进了当今的医学发展。”、 有一天，65岁的英国生物化学家弗雷德里克·桑格(Frederick Sanger)突然停下手中的试验，转身走出实验室，宣布自己正式退休。那一年是1983
DNA测序技术的测序的规律
生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等，因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物，这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。在可以区分长度仅差一个核苷酸
DNA测序自动测序法简介
基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司ZL的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一
DNA测序454－焦磷酸测序简介
该方法在油溶液包裹的水滴中扩增DNA（即emulsion PCR）,每一个水滴中开始时仅包含一个包被大量引物的磁珠和一个链接到微珠上的DNA模板分子（控制DNA浓度出现的大概率事件）。将emlusion PCR产物加载到特制的PTP板上，板上有上百万个孔，每个微孔只能容纳一个磁珠。DNA Pol