诱饵蛋白特性鉴定实验

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 CM培养基仪器、耗材 水浴锅培养箱电转仪实验步骤 一、lacZ激活试验 1. 采用标准的亚克隆技术,将编码目的蛋白质的DNA插入pEG202的多接头中,构建一个符合读框的融合蛋白。2. 将下列组合的质粒,分别按“乙酸锂转化法”转化酵母菌EGY48。(1)pBait+pSH18-34(实验组)(2)pSH17-4+pSH18-34(激活阳性对照组)(3)pRFHM1+pSH18-34(激活阴性对照组)3. 将转化混合物涂布于Glc/CM-Ura-His 省却成分培养基平板,于30℃培养过夜,选择含两种质粒的酵母菌。4. 将上步获得的三种转化子(实验组,阳性对照和阴性对照组)分别各挑至少5或6个单菌落,并将毎个克隆划在一个Glc/CM-Ura-His 省却成分培养基的主平板上。 5. 将一块尼龙膜轻轻地放在含酵母......阅读全文

诱饵蛋白特性鉴定实验

实验材料蛋白质试剂、试剂盒CM培养基仪器、耗材水浴锅培养箱电转仪实验步骤一、lacZ激活试验 1.  采用标准的亚克隆技术,将编码目的蛋白质的DNA插入pEG202的多接头中,构建一个符合读框的融合蛋白。2.  将下列组合的质粒,分别按“乙酸锂转化法”转化酵母菌EGY48。(1)pBait+pSH1

诱饵蛋白特性鉴定实验

基本方案             实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒

诱饵蛋白特性鉴定实验

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 CM培养基仪器、耗材 水浴锅培养箱电转仪实验步骤 一、lacZ激活试验 1.  采用标准的亚克隆技术,将编码目的蛋白质的DNA插入pEG202的多接头中,构建一个符合读框的融合蛋白。2.  将下列组合的质粒,分别按“乙酸锂转化法”转化酵母菌EGY48。(1)pBait+

相互作用蛋白鉴定实验——鉴定诱饵蛋白(LacZ的活性分析)

实验方法原理捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达 LexA 与目的蛋白的融合体的质粒。这种质粒转化到包含 LEU2 和lacZ 报道基因的报道酵母株中,并要行一系列的对照实验来鉴定所构建的诱饵蛋白是否适用,是否需要修饰,或是否应改变酵母菌报道条件。这些对照实验实现了诱饵蛋白在酵母菌中作为一种稳定蛋

相互作用蛋白鉴定实验——鉴定诱饵蛋白(半乳糖苷酶)

通过确定与之结合的其他蛋白质来理解某种特定蛋白质的功能,常常是十分有用的方法。这可以通过从文库中选择或筛选与靶蛋白相互作用的新蛋白来实现。现有一种特别有用的方法即双杂交系统或相互作用阱, 用来测定新的相互作用蛋白,这种方法采用充当「试管」的酵母菌和一种报道系统的转录激活作用来识别结合蛋白。本方法也可

诱饵蛋白是什么

测蛋白质与蛋白质之间相互作用,已知的那个蛋白就是诱饵蛋白。用诱饵来寻找可结合的蛋白。

“诱饵蛋白”或能治疗侏儒症

  软骨发育不全症是基因突变所致的一种最常见侏儒症。法国研究人员在动物实验中发现,如果注射一种“诱饵蛋白”,让致病基因失去作用,或能治疗软骨发育不全症。   法国卫生和医学研究所的研究人员18日在美国《科学·转化医学》杂志上报告说,软骨发育不全症患者体内的FGFR3基因发生突变后,会导致FGFR3

相互作用蛋白鉴定实验

鉴定诱饵蛋白(半乳糖苷酶) 鉴定诱饵蛋白(LacZ 的活性分析) 相互作用蛋白捕获             实验方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达

磷酸化蛋白鉴定实验

实验材料测序级膜蛋白酶                                                          试剂、试剂盒二硫苏糖醇                                                                  碘代乙酰

磷酸化蛋白鉴定实验

实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤:胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质(见 24. 3.1 );固相金属螯合亲和层析(IMAC) 富集磷酸肽(见 24. 3. 2 );用串

磷酸化蛋白鉴定实验

实验材料测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤这里所述的方法概括为下列几个步骤:胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质(见 24. 3.1 );固相金属螯合亲和层析(IMAC) 富集磷酸肽(见 24. 3. 2 );用串联质谱对磷酸

相互作用蛋白鉴定实验

实验方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达 LexA 与目的蛋白的融合体的质粒。这种质粒转化到包含 LEU2 和lacZ 报道基因的报道酵母株中,并要行一系列的对照实验来鉴定所构建的诱饵蛋白是否适用,是否需要修饰,或是否应改变酵母菌报道条件。这些对照实验实现了诱饵蛋白在酵母菌中作为

抗血清的特性鉴定

  根据不同目的制备的抗血清,对其中所含抗体的浓度,特异性及免疫球蛋白种类的要求也不一样。为了获得质量和数量上合符要求的抗血清,在收集动物血清前必须对免疫效果进行检测,对收获后的抗血清也必须对—些参数进行分析,如效价、亲和力及交叉反应等。根据不同的抗原性质选用合适的检测方法。最常用的为免疫沉淀,EL

相互作用蛋白鉴定实验——相互作用蛋白捕获

实验方法原理实验要经过两次连续大量的酵母菌平板筛选过程。酵母菌含有 LexA 融合探针、报道基因和插入PJG4-5(见图19.1.6)的 GAL 启动子控制下的 cDNA 表达文库。最近,已有可供用于这个系统的文库。实验材料携带适当质粒组合的酵母菌试剂、试剂盒完全(CM)缺失成分液体培养基含有如下指

如何检测诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的

在某些情况下,在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp,接着将重悬液平铺于5个100-mm的SD/–Trp平板,在30℃下温浴,直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml0.5XYPDA刮下每块板上的克隆,并收集到一管中,这样就可以使用这个细胞重悬液

代谢组鉴定质控标准正式建立

   蛋白质组和代谢组技术都基于质谱,但相比于蓬勃发展的蛋白质组学技术,代谢组虽然技术流程更简单,但其应用却一直十分缓慢。究其原因,是因为蛋白质组学却很早就基于Target-Decoy策略建立了FDR(假发现率)质控策略,可以保证鉴定结果的可靠性;而代谢组全谱鉴定一直缺乏有效的质控手段对鉴定结果进行

诱饵受体的功能介绍

受体的经典概念是以高亲和力与其特异性配体结合 ,并参与信号转导。诱骗受体以高亲和力和特异性识别某些炎性细胞 ,但在结构上不能进行信号转导或呈递激动剂给信号转导受体。因此它们起着激动剂和信号受体的分子“陷阱”的作用。IL 1RⅡ是首次被证实的纯诱骗受体 ,后又证实诱骗受体属于TNF受体和IL 1R家族

裸子植物鉴定实验_松科鉴定

实验材料苏铁带球果新鲜材料、苏铁大抱了叶新鲜叶片(或腊叶标本)、银杏腊叶标木(或新鲜叶片)银杏种子纵切片油松新鲜材料(或腊叶标本)油松叶横切片、侧柏新鲜材料(或腊叶标本)试剂、试剂盒乙酸洋红仪器、耗材显微镜镊子解剖针载玻片盖玻片滴管培养皿吸水纸实验步骤(三)松科 Pinaeeae油松 ( 图 2-2

蛋白的常用蛋白鉴定方法

传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力,不适合高流通量的筛选。目前,所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。 “满天星”式的2

细菌鉴定实验

实验方法原理 玻片凝集反应(slide agglutirlation)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌,立克次体,钩端螺旋体等)混合,在有适当电解质存在的条件下,如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物,即为阳性:如两者不对应便无凝集物出现,即为阴性。此法属定性试验,

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

实验材料 微管试剂、试剂盒 聚赖氨酸溶液仪器、耗材 盖玻片实验步骤 1. 准备该显微检测所需的盖玻片:(1) 盖玻片在 200 μg/ml 聚赖氨酸溶液中室温过夜。(2) 玻片在盛有 15 ml 蒸馏水的培养皿中翻转洗涤 4 次,每次 10 分钟。(3) 洗过的盖玻片风干并存放在无灰尘的容器中直到使

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性实验材料微管                                                          试剂、试剂盒聚赖氨酸溶液                            

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性实验材料微管试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材培养皿实验步骤1. 在一个培养皿里堆一些潮湿的滤纸片,放一块盖玻片到上面。加 50 μl 含运动蛋白的溶液到盖玻片的表面并涂开。盖上盖子在室温放 5~10 分钟,使蛋白黏附在玻璃上。2. 转移盖玻片,用室温的含

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性 通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性             实验材料 微管

蛋白质提取分离纯化鉴定的实验方案

一.血清ǐ-球蛋白的初步提取1. 血细胞与血清分离:取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞,上部为血清).2. 乳糜粒分离:4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心梯度液配置:离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积

蛋白质提取分离纯化鉴定的实验方案

一.血清ǐ-球蛋白的初步提取1. 血细胞与血清分离:取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞,上部为血清).2. 乳糜粒分离:4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心梯度液配置:离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积

裸子植物鉴定实验_苏铁科鉴定

实验材料苏铁带球果新鲜材料、苏铁大抱了叶新鲜叶片(或腊叶标本)、银杏腊叶标木(或新鲜叶片)银杏种子纵切片油松新鲜材料(或腊叶标本)油松叶横切片、侧柏新鲜材料(或腊叶标本)试剂、试剂盒乙酸洋红仪器、耗材显微镜镊子解剖针载玻片盖玻片滴管培养皿吸水纸实验步骤苏铁科cycadaceae苏铁为常绿乔木,茎短不

裸子植物鉴定实验_柏科鉴定

实验材料苏铁带球果新鲜材料、苏铁大抱了叶新鲜叶片(或腊叶标本)、银杏腊叶标木(或新鲜叶片)银杏种子纵切片油松新鲜材料(或腊叶标本)油松叶横切片、侧柏新鲜材料(或腊叶标本)试剂、试剂盒乙酸洋红仪器、耗材显微镜镊子解剖针载玻片盖玻片滴管培养皿吸水纸实验步骤柏科Cupressaeeae侧柏,如图取侧柏新鲜

裸子植物鉴定实验_银杏科鉴定

实验材料苏铁带球果新鲜材料、苏铁大抱了叶新鲜叶片(或腊叶标本)、银杏腊叶标木(或新鲜叶片)银杏种子纵切片油松新鲜材料(或腊叶标本)油松叶横切片、侧柏新鲜材料(或腊叶标本)试剂、试剂盒乙酸洋红仪器、耗材显微镜镊子解剖针载玻片盖玻片滴管培养皿吸水纸实验步骤(二)银杏科 Ginkgoaceae银杏 ( 图

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验1

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性实验材料微管试剂、试剂盒聚赖氨酸溶液仪器、耗材盖玻片实验步骤1. 准备该显微检测所需的盖玻片:(1) 盖玻片在 200 μg/ml 聚赖氨酸溶液中室温过夜。(2) 玻片在盛有 15 ml 蒸馏水的培养皿中翻转洗涤 4 次,每次 10 分钟。(3) 洗